5歲以下腹瀉患兒副溶血性弧菌感染調查分析

孫晶晶，龔四堂，陳冠樺，劉瑞桃，耿嵐嵐，黃玲，張順先

1廣州醫科大學附屬廣州市婦女兒童醫療中心消化科，廣州 510623；2廣州市兒童醫院消化科；3增城市婦幼保健院消化科；4上海中醫藥大學附屬龍華醫院臨床研究中心

腹瀉是引起全球5歲以下兒童死亡的第二大疾病，僅次于下呼吸道感染性疾病［1］。2015年，全球50.9萬名1～5歲兒童死于腹瀉，由腹瀉引起的死亡人數占此年齡段死亡人數的8.6%［2］。腹瀉是由多種病原、多因素引起的腸道傳染性疾病，主要病原體包括輪狀病毒A、諾如病毒GⅡ、致腹瀉型大腸桿菌、志賀桿菌、沙門菌、空腸彎曲菌、艱難梭菌、腺病毒、星狀病毒、副溶血性弧菌（VP）等。其中VP是引起兒童急性腹瀉的主要細菌性病原體之一，遼寧省VP總體檢出率為4.37%［3］，上海市成人中VP檢出率為5.22%［4］。VP感染性腹瀉主要在成人中研究較多，而在兒童中卻鮮有報道。本研究通過分層抽樣選取了2020年1月—12月就診的822例患兒為研究對象，回顧分析5歲以下腹瀉患兒VP感染情況，探討其感染特征，旨在為VP感染引起的細菌性腹瀉防治提供依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取2020年1月—12月于廣州市兒童醫院、廣州市婦嬰醫院、廣州市婦女兒童醫療中心、廣州市增城區婦幼保健院任何一家醫院就診的5歲以下急性腹瀉患兒495例（腹瀉組）。腹瀉診斷標準［5］：24 h內腹瀉次數≥3次伴糞便形態異常（血樣便、水樣便、黏液樣便和蛋花樣便等）。選擇同一時期，于上述任何一家醫院就診的非腹瀉患兒（近14 d內無腹瀉表現）327例作為非腹瀉組。本研究通過廣州市婦女兒童醫療中心倫理審查委員會評審（No.2017111501），同時通過中國臨床試驗注冊中心審核（ChiCTR-ROC-17013620）。患兒家屬均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 樣本采集使用醫院提供的一次性無菌塑料杯采集符合入選標準的患兒糞便樣本，挑取3 g或3 mL糞便裝入15 mL無菌離心管中，4℃保存，于24 h內送至實驗室檢測。患兒的基本信息采用結構化問卷調查完成。問卷填寫不完整或拒絕參加本次研究的被排除。

1.3 VP檢測挑取黃豆大小或0.5 mL糞便樣本，接種至40 g/L氯化鈉蛋白胨水中培養18～24 h。隨后接種至硫代硫酸鹽檸檬酸鹽膽鹽蔗糖瓊脂培養基（TCBS）中37℃培養16～18 h。使用一次性無菌吸頭挑選圓形、半透明、表面光滑、直徑2～3 mm的綠色菌落10～12個，接種至科瑪嘉顯色培養基上37℃培養16～18 h。挑取顯色為紅色的可疑菌落到無菌濾紙上，滴入氧化酶，10 s內顯色為紫紅色者，視為高度可疑的副溶血性弧菌。然后將該菌接種至營養瓊脂上37℃培養16～18 h。用無菌棉簽挑取菌落到生理鹽水中，將比濁度調至0.5，使用VITEK 2革蘭陰性菌鑒定卡在梅里埃VITEK 2 Compact全自動細菌鑒定系統上進行鑒定，37℃18～24 h后判定結果。最后將所有陽性菌株保存在含20%甘油肉湯培養基中，并于-80℃冷凍保存。

1.4 統計學方法采用SPSS26.0統計軟件。定量資料呈偏態分布以M（P25，P75）表示，比較采用秩和檢驗；計數資料采用例（%）表示，比較采用χ2檢驗或Fisher's確切概率法。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 腹瀉組與非腹瀉組基本特征比較腹瀉組男236例、女259例，非腹瀉組男149例、女178例，兩組性別比差異無統計學意義（χ2=0.352，P＞0.05）。822例患兒年齡中位數為24個月（95%CI：23～26），腹瀉組年齡中位數為17個月（95%CI：16～19），非腹瀉組年齡中位數為32個月（95%CI：10～49），腹瀉組年齡低于非腹瀉組（Z=-5.803，P＜0.05）。

2.2 VP與腹瀉的關系腹瀉組VP檢出率為5.9%（29/495），非腹瀉組為1.5%（5/327），腹瀉組VP檢出率高于非 腹 瀉 組（χ2=9.309，P＜0.05，OR=4.008，95%CI：1.535～10.463）。其中腹瀉組1歲以下患兒VP檢出率為3.0%（5/165），非腹瀉組為1.0%（1/98），兩組比較差異無統計學意義（χ2=1.114，P＞0.05，OR=3.031，95%CI：0.349～26.332）。腹瀉組1歲以上患兒VP檢出率為7.3%（24/330），非腹瀉組為1.7%（4/229），兩組比較差異有統計學意義（χ2=8.676，P＜0.05，OR=4.412，95%CI：1.510～12.893）。

2.3 腹瀉患兒VP感染的流行特征住院和門診腹瀉患兒VP檢出情況：VP檢出率門診腹瀉患兒為7.0%（27/383），住院腹瀉患兒為1.8%（2/112），差異 有 統 計 學 意 義（χ2=4.354，P＜0.05，OR=4.17，95%CI：0.977～17.857）。性別分布：腹瀉組VP在女性患兒中檢出率為6.2%（16/259），男性患兒檢出率為5.5%（13/236），腹瀉患兒VP檢出率女性高于男性，但差異無統計學意義（χ2=0.100，P＞0.05，OR=0.885，95%CI：0.417～1.882）。年齡分布：VP檢出率在＜2歲腹瀉組中檢出率為4.2%（14/330），＞2歲檢出率為9.1%（15/165），差異有統計學意義（χ2=4.688，P＜0.05，OR=2.257，95%CI：1.062～4.797）。季節分布：VP檢出率在腹瀉患兒中有明顯的季節分布趨勢（χ2=13.982，P＜0.05），秋季（7—9月）檢出率最高（13.1%，13/99），冬季（10—12月）檢出率最低（2.3%，2/87）。

2.4 腹瀉患兒VP感染的臨床特征因＜1歲患兒不能描述其是否有腹痛表現，因此未能將腹痛臨床癥狀納入本次統計。VP感染陽性患兒29例，VP感染陰性患兒466例，VP感染陽性腹瀉患兒與VP感染陰性患兒相比，發熱、脫水、抽搐、貧血、酸中毒發生率差異無統計學意義（P均＞0.05）。嘔吐發生率更高，差異有統計學意義（P＜0.05）。血便和黏液便發生率差異無統計學意義（P均＞0.05），而水樣便發生率高于VP感染陰性患兒，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。腹瀉患兒VP陽性者腹瀉時間（2 d，95%CI：2～3）與VP陰性者（3d，95%CI：3～4）相比差異有統計學意義（Z=-2.325，P＜0.05）。

表1 腹瀉患兒VP感染基本特征比較

3 討論

VP臨床表現以腹痛、嘔吐和水樣便為主［6］，本研究結果與華南地區VP感染的臨床特征基本一致［7］。VP的檢出率有明顯地域特征，即不同地區檢出率不完全一致。研究顯示，蘇丹喀土穆州急性腹瀉兒童中VP檢出率為0.9%［8］，我國北京地區0～5歲腹瀉兒童VP的檢出率為0.4%［9］，而我國其他非沿海地區如云南和甘肅的腹瀉兒童中幾乎未檢測出VP［10-11］。本研究中腹瀉患兒VP的檢出率為5.9%，高于其他地區，這可能與當地居民的飲食習慣有關。廣州地區居民有進食海產品的習慣，有研究發現，廣州市海產品VP的檢出率高達70%［12］，而非沿海地區居民不常進食海產品，同時水源為淡水，不利于VP的生長，因此感染率相對較低。

VP是一種嗜鹽性細菌，主要來自海產品，如海魚、蝦、蟹、貝殼，同時畜禽肉、咸菜等均發現有VP存在。本研究發現，2歲以上腹瀉患兒VP檢出率較2歲以下腹瀉患兒更高，這與兒童的生長活動相符。2歲以上兒童的飲食中輔食種類多樣化，外出游玩、就餐及活動范圍更廣，進食海產品的頻率較高；同時，部分居民為了追求海產品的鮮嫩口感，進食烹飪時間較短、未完全熟透的食物，感染機率較大。另外，該年齡段兒童可能尚未形成良好的衛生習慣，自律性差，易接觸受污染的水源，更易被感染。

VP檢出集中在夏秋季，這可能與氣候因素有關，夏秋季天氣炎熱，水溫較高，有利于VP的生長和繁殖，食物易受細菌污染；同時，海產品大量上市，增加了感染機率。冬季是VP檢出率最低時期，而此時以兒童病毒性腹瀉為主［13］。

VP檢出率在門診（7%）腹瀉患兒中高于住院（1.8%）腹瀉兒童，這可能與VP感染引起的臨床癥狀相對較輕有關，一般在門診就能治愈；同時，也與家長重視兒童健康有關，在兒童腹瀉的早期階段及時就醫治療，使感染在疾病初期階段就得到有效控制。

本研究發現，非腹瀉患兒仍可檢出VP，可能原因：一是患兒已感染VP，但處于疾病的潛伏期，尚未表現出臨床癥狀。研究顯示，VP感染致病的潛伏期為12～24 h［14］。二是患兒感染的VP數量較少，不足以引起臨床癥狀。文獻報道，tdh和trh基因編碼的直接溶血素和直接溶血相關霉素是VP主要的臨床致病因子［15］，患兒VP毒力基因攜帶情況不同，致病力不同。因此，VP陽性的非腹瀉患兒，其VP毒力基因攜帶情況及大便VP陽性持續時間等將是我們后續研究的重點。

VP感染相關腹瀉通常為自限性疾病，病程約為3 d［14］。本研究中VP陽性者腹瀉持續時間多為2 d且較VP陰性者腹瀉時間更短，考慮為此次VP陽性樣本量較少所致。VP感染一般不主張應用抗生素治療，但對于有嚴重脫水、免疫缺陷的患兒，應根據糞便培養和藥物敏感性結果［16］，使用相應的抗生素進行及時救治。另外，VP被認為是一種食源性病原體，其相關腹瀉以散發為主，但在全球如亞洲、非洲、美洲等地區也可引起爆發性流行［17］，故應加強對VP的監測，特別是在幼兒園、托兒所等場所，以防爆發流行。

綜上所述，廣州地區5歲以下腹瀉患兒存在VP感染，有明顯的季節分布特征，秋季高發，臨床以嘔吐、水樣便為主要表現。