老年急性心肌梗死患者PCI前血清miR-503、Apelin-13水平與術后左心室重構的關系

陳君，馬娜，顧明，彭洋

1天津市職業病防治院（天津市工人醫院）心血管內科，天津 300011；2天津市職業病防治院（天津市工人醫院）中西醫結合科

急性心肌梗死（AMI）是臨床常見的急危重癥，其病理基礎為冠狀動脈粥樣硬化引起的冠狀動脈管腔狹窄或堵塞，造成心肌缺血缺氧損傷［1］。經皮冠狀動脈介入治療（PCI）是治療AMI的常用方法，雖然PCI使得大部分患者能及時得到救治，但AMI患者PCI術后依舊可能發生左心室重構（LVR）［2］。LVR是左心室對慢性容量和壓力超負荷的適應性改變，AMI患者PCI術后LVR的發生不僅導致AMI患者心功能嚴重受損，還直接影響遠期預后，使其死亡風險明顯增加，是影響遠期預后的重要因素［3］。微小RNA是一類長度為19～24個核苷酸的無蛋白質編碼功能的內源性RNA，并且在包括血管生成在內的多種生理和病理過程中起重要作用［4-6］。研究發現，微小RNA-503（miR-503）與心肌細胞損傷密切相關，下調miR-503表達可提高缺氧環境下心肌細胞存活，抑制心肌細胞凋亡［7］。WEN等［8］研究顯示，miR-503可調控下游靶向基因孤獨G蛋白偶聯受體配體-13（Apelin-13），共同參與體外內皮祖細胞增殖、遷移和血管形成過程，二者存在靶向調控關系。但miR-503和Apelin-13表達 與AMI患者PCI術 后LVR的關系鮮見研究報道。本研究我們檢測了老年AMI患者術前血清miR-503、Apelin-13水平，分析二者與PCI術后LVR的關系，以期為臨床防治LVR提供一定參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取2019年5月—2021年4月天津市職業病防治院收治的行PCI治療的老年AMI患者143例作為觀察組，男79例、女64例，年齡60～80（68.46±6.35）歲。有吸煙史63例，有早發心血管疾病家族史37例。納入標準：①符合AMI的相關診斷標準［9］；②首次確診，且均行PCI治療。排除標準：①陳舊性心肌梗死；②曾進行過冠狀動脈支架置入術等心臟手術者；③合并各種惡性腫瘤者；④合并各種急、慢性感染病者；⑤水電解質紊亂、出血、嚴重糖尿病并發癥者；⑥近期有腦血管事件或重大外傷。選取同期醫院體檢健康者140例作為對照組，男74例、女66例，年齡60～81（69.68±7.37）歲。有吸煙史49例，有早發心血管疾病家族史23例。兩組性別、年齡、吸煙史、早發心血管疾病家族史比較差異無統計學意義（P均＞0.05）。所有受試者簽署知情同意書，本研究經醫院倫理委員會批準（2019-倫審第21號）。

1.2 血清miR-503測定采用實時熒光定量PCR（RT-qPCR）法。觀察組于入院后PCI術前、對照組于體檢時，采集空腹外周靜脈血5 mL，靜置后離心，分離血清，于-70℃冰箱內保存。取出血清樣本并解凍，按TRIzol試劑盒（北京拜爾迪生物技術有限公司，批號DEM201-47）說明書提取血清總RNA，異丙醇沉淀濃縮后，用75%乙醇洗滌，干燥后加入100μL焦碳酸二乙酯水，檢測所得RNA的純度及完整度；然后將RNA反轉錄為cDNA，產物置于-20℃保存。正反向引物、內參基因由上海恒斐生物科技有限公司設計并合成，miR-503以U6為內參，U6正向引物：5＇-TACCCTGTCGAACCGAATTTGTG-3＇，反向引物：5＇-TGGTGTCGTGGAGTCG-3＇；miR-503正向引物：5＇-CCTATTTCCCATGATTCCTTCATA-3＇，反 向 引物：5＇-GTAATACGGTTATCCACGCG-3＇。RT-qPCR反應（反應體系25μL）：cDNA（50 ng/μL）模板2.5μL，熒光定量試劑（SYBR Premix Ex Taq）5μL，正反向引物各1μL，Taq酶0.3μL，水15.2μL，每個樣本設置3個平行。反應條件：95℃預變性3 min；95℃變性45 s、60℃退火30 s，72℃延伸40 s，30個循環。采用2-ΔΔCt法計算血清miR-503相對水平。

1.3 血清Apelin-13測定采用ELISA法。多功能酶標儀（北京拜爾迪生物技術有限公司，型號Varioskan LUX）測定450 nm波長處吸光度并繪制標準曲線，計算標本中Apelin-13水平，操作步驟嚴格按照試劑盒（武漢華美生物工程有限公司，批號QS-1667）說明書進行。

1.4 隨訪和超聲心動圖指標觀察對老年AMI患者PCI術后隨訪1年，隨訪起始日期為術后第1天，術后1年對患者進行超聲心動圖檢查（彩色超聲心動儀購自荷蘭飛利浦公司，型號iE33）測量左心室舒張末期內徑（LVEDD）、室間隔厚度（IVST）、左心室后壁厚度（LVPWT）、左室射血分數（LVEF）。根據是否發生LVR［LVR判定標準：術后1年左心室收縮末期容積（LVESV）較出院時增加≥15%］［10］將患者分為LVR組61例、非LVR組82例。

1.5 統計學方法采用SPSS24.0統計軟件。計量資料符合正態分布以xˉ±s表示，比較行t檢驗。Pearson法分析LVR患者術前血清miR-503、Apelin-13、術后1年超聲心動圖指標的相關性；多因素Logistic回歸分析影響老年AMI患者PCI術后1年發生LVR的因素。采用受試者工作特征（ROC）曲線分析術前血清miR-503、Apelin-13對老年AMI患者PCI術后1年發生LVR的預測價值，曲線下面積（AUC）比較采用Z檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 觀察組與對照組血清miR-503和Apelin-13水平比較觀察組與對照組血清miR-503水平分別為1.64±0.19、1.00±0.03，血清Apelin-13水平分別為（23.06±3.14）、（37.82±4.93）ng/mL，兩組血清miR-503和Apelin-13水平比較差異均有統計學意義（P均＜0.05）。

2.2 LVR組與非LVR組術前血清miR-503、Apelin-13水平和術后1年超聲心動圖指標比較與非LVR組比較，LVR組術前血清miR-503水平、術后1年LVEDD、IVST、LVPWT升高，術前Apelin-13水平、術后1年LVEF降低（P均＜0.05）。見表1。

表1 LVR組與非LVR組術前血清miR-503、Apelin-13水平和術后1年超聲心動圖指標比較（xˉ±s）

2.3 LVR患者術前血清miR-503、Apelin-13、術后1年超聲心動圖指標的相關性分析Pearson相關性分析顯示，LVR患者術前血清miR-503與Apelin-13呈負相關（r=-0.544，P＜0.05）。術前血清miR-503與術后1年LVEDD、IVST、LVPWT呈正相關（r分別為0.491、0.628、0.477，P均＜0.05），與LVEF呈負相關（r=-0.562，P＜0.05）；術前血清Apelin-13與術后1年LVEDD、IVST、LVPWT呈 負 相 關（r分 別 為-0.514、-0.583、-0.609，P均＜0.05），與LVEF呈正相關（r=0.465，P＜0.05）。

2.4 影響老年AMI患者PCI術后1年發生LVR的因素分析以PCI術后1年是否發生LVR為因變量，術前血清miR-503、Apelin-13水平及術后1年LVEDD、IVST、LVPWT、LVEF為自變量，進行多因素Logistic回歸分析結果顯示，血清miR-503水平及LVEDD、IVST、LVPWT均是影響老年AMI患者PCI術后1年發生LVR的危險因素，血清Apelin-13水平及LVEF則為其保護因素（P均＜0.05）。見表2。

表2 影響老年AMI患者PCI術后1年發生LVR的多因素Logistic回歸分析

2.5 術前 血清miR-503和Apelin-13對老 年AMI患者PCI術后1年發生LVR的預測價值ROC曲線分析顯示，術前血清miR-503、Apelin-13水平及二者聯合預測老年AMI患者PCI術后1年發生LVR的AUC分別為0.803、0.839、0.927。二者聯合AUC高于血清miR-503、Apelin-13單獨預測（Z分別為2.824、2.219，P均＜0.05）。見表3。

表3 術前血清miR-503和Apelin-13對老年AMI患者PCI術后1年發生LVR的預測價值

3 討論

AMI具有病情發展迅速、合并癥多、變化快等特點，及時發現并施以救治，能極大提高患者的生存率。LVR對于AMI進展是極其危險的并發癥，嚴重威脅心臟病患者人身健康安全，給預后康復帶來很大障礙［11-12］。曹波等［13］研究認為，急診PCI對抑制LVR、改善左心功能優于擇期PCI，能夠盡早實現血管再通、血流供應，使瀕死心肌得到拯救，從而限制心肌梗死范圍進一步擴大。

AMI的病理基礎是動脈粥樣硬化，NGUYEN等［14］從人類以及經氧化低密度脂蛋白處理小鼠體內巨噬細胞分離出細胞外囊泡，發現動脈粥樣硬化的細胞外囊泡中miR-503表達升高。ZHU等［15］研究發現，miR-503通過靶向H9c2心肌細胞中的胰島素樣生長因子1受體，通過磷脂酰肌醇-3激酶/絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶途徑促進細胞凋亡。本研究發現，老年AMI患者術前血清miR-503水平高于健康體檢者，且LVR組術前血清miR-503水平高于非LVR組，提示術前血清miR-503可能與AMI發病及PCI術后1年LVR發生有關，猜測AMI引起缺氧缺血過程中，機體為適應這一過程處于炎性應激狀態，巨噬細胞分泌增多導致miR-503表達升高，從而通過靶向某些物質參與調控心肌梗死邊緣血管新生或抑制脂質代謝、促進細胞凋亡，進而發生LVR。

Apelin是一種新型、具有極短半衰期的內源活性肽，可參與調節內皮損傷、心血管重構、氧化應激、炎性反應等病理生理過程，對高血壓、心力衰竭和冠狀動脈性心臟病有一定保護作用［16-18］。Apelin基因的變異可能會影響周圍循環或心臟的血管張力，從而易患心血管疾病。馬萍等［19］研究發現，正常組、冠心病組、冠心病合并糖尿病組血清Apelin-13表達水平依次降低，Apelin-13水平變化可反映患者冠狀動脈病變狹窄程度。另有研究發現，Apelin-13可抑制心肌梗死所致心力衰竭大鼠的氧化應激，改善心臟功能障礙，并有利于減輕心臟纖維化［20］。本研究結果顯示，老年AMI患者術前血清Apelin-13水平低于健康體檢者，且LVR組術前血清Apelin-13水平低于非LVR組，猜測在AMI過程中Apelin-13低表達可增強血管收縮導致血壓升高，加重左心室負擔進而導致LVR，加重AMI患者病情。

為進一步探究miR-503與Apelin-13是否具有相關性，經Pearson分析顯示，兩者呈負相關，這可能與miR-503直接靶向Apelin-13有關。可能原因是miR-503過表達抑制內皮祖細胞中Apelin-13表達，從而抑制AMI過程中新生血管生成［8］。本研究發現，LVR組術后1年LVEDD、IVST、LVPWT高于非LVR組，術后1年LVEF低于非LVR組，各超聲心動圖指標均能說明發生LVR，且LVEF降低，說明LVR導致一定程度的心臟射血障礙。術前血清miR-503與術后1年LVEDD、IVST、LVPWT呈正相關，與LVEF呈負相關；術前血清Apelin-13與術后1年LVEDD、IVST、LVPWT呈負相關，與LVEF呈正相關。這些結果進一步說明，miR-503、Apelin-13與心室收縮能力、心臟內壁厚度以及射血能力有關。另外，本研究還發現，血清miR-503是影響老年AMI患者PCI術后1年發生LVR的危險因素，Apelin-13是保護因素，且二者聯合預測老年AMI患者PCI術后1年發生LVR的AUC高于術前血清miR-503、Apelin-13單獨預測，具有更高的預測價值。提示術前聯合檢測血清miR-503、Apelin-13水平有助于評估老年AMI患者PCI術后1年LVR發生情況。

綜上所述，老年AMI患者術前血清miR-503呈高水平、Apelin-13呈低水平，二者與患者PCI術后1年LVR存在一定相關性，二者聯合檢測對預測老年AMI患者PCI術后1年LVR發生有較高價值。