急性髓系白血病患者血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平與病理特征和預后的關系

尹薇，王欣

遂寧市中心醫院血液內科，四川 遂寧 629000

白血病是早期造血前體細胞基因突變和未成熟成髓細胞增殖不良導致的惡性克隆性疾病。2022年癌癥統計數據顯示，中國白血病發病8.8萬例，死亡6.4萬例［1］。急性髓系白血病（AML）是成人急性白血病最常見類型，盡管近年來AML診治取得一定進展，但長期生存率仍較低［2］。因此還需進一步了解其發生和進展機制，以促進臨床診斷和新療法的開發。近年研究表明，長鏈非編碼RNA（lncRNA）、微小RNA（miRNA）等非編碼RNA參與AML發生、發 展［3-4］。lncRNA小 核 仁RNA宿 主 基 因16（SNHG16）是lncRNA SNHG家族重要成員。研究報道，lncRNA SNHG16在宮頸癌、腎母細胞瘤等惡性腫瘤中發揮致癌作用［5-6］。miR-183-5p是miRNA家族重要成員。研究報道，miR-183-5p在乳腺癌、結腸癌等惡性腫瘤中異常水平，與腫瘤進展有關［7-8］。筆者通過StarBase數據庫預測發現，lncRNA SNHG16與miR-183-5p存在靶向結合位點，但目前關于lncRNA SNHG16、miR-183-5p在AML患者血漿中水平及與病理特征和預后的關系尚未可知。2018年1月—2019年6月，我們通過檢測AML患者血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平，分析二者與病理特征和預后的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取2018年1月—2019年6月我院收治的93例AML患者為AML組，其中男50例、女43例，年齡18～83（56.85±7.62）歲；血紅蛋白：≥80 g/L者87例、＜80 g/L者6例；白 細 胞 計 數：≥30×109/L者45例、＜30×109/L者48例；血小板計數：≥50×109/L者37例、＜50×109/L者56例；骨髓原始細胞比率：≥70%者55例、＜70%者38例；髓外病變：有15例、無78例；法美英分型：M1型9例、M2型41例、M4型9例、M5型28例、M6型6例；預后危險分層［9］：高危11例、中危48例、低危34例。選取同期40例體檢中心查體健康者為對照組，男23例、女17例，年齡18～77（55.87±7.25）歲；兩組性別、年齡比較差異無統計學意義（χ2/t分別為0.158、0.690，P均＞0.05）。納入標準：①經病理檢查確診為AML，符合《成人急性髓系白血病（非急性早幼粒細胞白血病）中國診療指南（2017年版）》［10］診斷標準；②初次確診，入院前未接受任何抗腫瘤治療；③臨床資料齊全；④可接受隨訪；⑤患者及家屬知情并簽署同意書。排除標準：①法美英分型M3型（急性早幼粒細胞白血病）；②合并骨髓增生異常綜合征；③合并全身性感染性疾病、自身免疫性疾病、其他部位惡性腫瘤；④年齡＜18歲。本研究經醫院倫理委員會批準（2018-0129）。

1.2 血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p檢測收集AML組入院時和對照組體檢時3 mL靜脈血，枸櫞酸鈉抗凝，3 000 r/min離心15 min（離心半徑10 cm），棄血清，留取血漿。采用TRIzol法（北京百奧萊博科技有限公司，編號：ALH011）提取血漿總RNA，微量分光光度計（賽默飛世爾科技有限公司，型號：Nano-Drop）驗 證 純 度、濃 度，OD260/OD280為1.8～2.0，TaKaRa反轉錄試劑盒（北京智杰方遠科技有限公司，編號：RR036A）合成cDNA。以cDNA為模板，采用PCR擴增儀（賽默飛世爾科技有限公司，型號：ABI 9700）按照SYBR?Premix Ex Taq?試劑盒（上海赫果生物科技有限公司，編號：DRR820A）進行擴增：lncRNA SNHG16正向引物：5'-GTGCCTCAGGAAGTCTCTTGCC-3'，反向引物5'-ATCCAAACAAGTTATCACACAGCAC-3'；lncRNA SNHG16內參GAPDH正向引物：5＇-AGAAGGCTGGGGCTCATTTG-3'，反 向 引 物5＇-AGGGGCCATCCACAGTCTTC-3'；miR-183-5p正 向 引 物：5＇-GCGGCTATGGCACTGGTAGAA-3'，反向引 物5＇-GTGCAGGGTCCGAGGTATTC-3'；miR-183-5p內參U6正向引物：5＇-CTCGCTTCGGCAGCACA-3＇，反向引物5＇-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3＇；引物設計和合成由上海生工生物工程股份有限公司完成。反應條件：95℃90 s，95℃30 s、63℃30 s、72℃15 s，循環40次 后 收 集Ct值，采 用2-ΔΔCT法 計 算 血 漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p相對水平。

1.3 隨訪和分組AML患者出院后通過門診或電話隨訪3年，根據血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平分為lncRNA SNHG16高水平組（≥1.90，n=47）、lncRNA SNHG16低水平組（＜1.90，n=46）和miR-183-5p高水平組（≥1.03，n=49）、miR-183-5p低水平組（＜1.03，n=44），統計不同組別患者的生存情況。

1.4 統計學方法采用SPSS28.0統計軟件。計數資料以例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料呈正態分布以±s表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用F檢驗，事后多重比較采用Bonferroni校正；Pearson相關系數分析AML患者血漿lncRNA SNHG16與miR-183-5p水平的相關性；Kaplan-Meier法繪制AML患者生存曲線，組間生存率比較采用Log-rank檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平比較AML組、對照組血漿lncRNA SNHG16相對表達量分別為1.90±0.44、1.29±0.23，miR-183-5p相對表達量分別為1.03±0.24、1.60±0.31，兩組血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平比較差異有統計學意義（t分別為10.635、10.304，P均＜0.01）。

2.2 AML患者血漿lncRNA SNHG16與miR-183-5p水平的相關性Pearson相關性分析顯示，AML患者血漿lncRNA SNHG16與miR-183-5p水平呈負相關（r=-0.704，P＜0.01）。

2.3 AML患者血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平與病理特征的關系AML患者血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平與白細胞計數、骨髓原始細胞比率、預后危險分層有關（P均＜0.05）。見表1。

表1 血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平與AML患者病理特征的關系（±s）

表1 血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平與AML患者病理特征的關系（±s）

病理特征性別男 女年齡≥60歲＜60歲血紅蛋白≥80 g/L＜80 g/L白細胞計數≥30×109/L＜30×109/L血小板計數≥50×109/L＜50×109/L骨髓原始細胞比率≥70%＜70%髓外病變有 無法美英分型M1、M2 M4、M5 M6預后危險分層高危中危低危n 50 43 20 73 87 6 45 48 37 56 55 38 15 78 50 37 6 11 48 34 lncRNA SNHG16images/BZ_7_1777_1203_1802_1246.png±s 1.92±0.45 1.88±0.43 1.92±0.37 1.90±0.45 0.90±0.42 1.97±0.64 2.01±0.44 1.80±0.41 1.83±0.36 1.95±0.48 2.00±0.43 1.76±0.40 2.02±0.47 1.88±0.43 1.93±0.43 1.91±0.45 1.67±0.37 2.24±0.57 1.92±0.37 1.76±0.42 t/F 0.454 0.242 0.367 2.396 1.275 2.683 1.119 0.908 13.448 P＞0.05＞0.05＞0.05＜0.05＞0.05＜0.05＞0.05＞0.05＜0.05 miR-183-5pimages/BZ_7_1777_1203_1802_1246.png±s 1.02±0.24 1.04±0.24 1.02±0.19 1.04±0.25 1.04±0.24 0.97±0.30 0.97±0.18 1.09±0.28 1.07±0.21 1.01±0.25 0.98±0.23 1.12±0.23 0.95±0.24 1.05±0.24 1.04±0.27 1.03±0.19 1.04±0.27 0.76±0.23 1.03±0.18 1.12±0.25 t/F 0.402 0.367 0.624 2.530 1.270 2.874 1.456 0.023 14.790 P＞0.05＞0.05＞0.05＜0.05＞0.05＜0.05＞0.05＞0.05＜0.05

2.4 AML患者血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平與預后的關系93例AML患者中位隨訪25個月，失訪7例，死亡42例，3年總生存率為54.84%（51/93）。Kaplan-Meier生存曲線分析顯示，lncRNASNHG16高水平組3年總生存率40.43%（19/47）低于lncRNA SNHG16低水平組69.57%（32/46）；miR-183-5p高水平組3年總生存率67.35%（33/49）高于miR-183-5p低水平組40.91%（18/44），差異均有統計學意義（χ2分別為8.895、6.409，P均＜0.05）。

3 討論

AML是造血干細胞或祖細胞中特定細胞轉錄、表觀遺傳、點突變、遺傳突變等變化轉變形成的惡性腫瘤，主要表現為髓系前體細胞增殖失控和骨髓衰竭引起的白細胞增加、血小板減少、貧血［11］。目前，造血干細胞移植仍然是AML最有效的治療手段，但受限于造血干細胞來源和經濟條件的影響，未能有效開展［12］。盡管近年來國際上已有統一的AML系統治療方案，完全緩解率可達50%～80%，但仍有部分AML患者不能達到完全緩解或多次復發，發展為復發性難治性AML，通常于數周或數月內死亡［13］。因此，有必要進一步探索AML相關調控機制，以改善患者預后。

表觀遺傳學是生命科學研究熱點之一。近年越來越多研究證實，表觀遺傳學能通過影響組織學中多種致癌與抑癌基因途徑和免疫系統參與白血病發生、發展［14］。非編碼RNA在表觀遺傳學調控中發揮重要作用。lncRNA是一類轉錄本＞200個核苷酸的非編碼RNA，能通過直接或海綿miRNA間接調節調控基因水平［15］。lncRNA SNHG16定位于人17號染色體長臂25.1，最初由YU等［16］在神經母細胞瘤中發現，并證實其參與促進神經母細胞瘤細胞生長和侵襲。因此，近年來諸多學者致力于研究其在不同腫瘤中的作用。XIAO等［17］研究報道，lncRNA SNHG16在骨肉瘤中高表達，通過miR-1285-3p促進骨肉瘤細胞增殖、侵襲、遷移和抑制凋亡。XU等［18］研究報道，lncRNA SNHG16在胰腺癌中高水平，通過調控miR-302b-3p/溶質載體家族22成員4軸促進胰腺癌細胞增殖、侵襲和遷移。本研究結果顯示，AML患者血漿lncRNA SNHG16水平顯著上調，提示lncRNA SNHG16高水平可能與AML發生有關，其高水平機制可能與lncRNA SNHG16被癌基因激活而大量轉錄有關［17-18］。另外，AML患者血漿lncRNA SNHG16水平與白細胞計數、骨髓原始細胞比率、預后危險分層有關，提示lncRNA SNHG16高水平參與AML發展，其機制可能與lncRNA SNHG16能調控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路有關。腫瘤發生、發展涉及多條信號通路激活或失活，PI3K/Akt信號通路異常激活可改變AML細胞周期，促進AML細胞增殖、遷移、存活和耐藥［19］。lncRNA SNHG16水平上調能通過降低第10號染色體上缺失的磷酸酶和緊張素同源物活性，促進PI3K/Akt信號通路激活，進而促進AML細胞增殖和遷移［20］。

miRNA是一類長度18～25個核苷酸的非編碼RNA，通過與mRNA的3'-非翻譯區結合而降解或抑制其翻譯而參與基因調控［21］。miR-183-5p定位于人7號染色體長臂23.2，水平高度保守，作為視網膜高度水平特異性miRNA，既往研究多報道其與眼科疾病有關。近年研究發現，miR-183-5p亦參與癌癥過程［22］。HU等［23］研究報道，miR-183-5p在膀胱癌中低水平，能靶向調控多核糖核苷酸核苷轉移酶1，促進膀胱癌細胞凋亡。MO等［24］研究報道，miR-183-5p在肺腺癌中高水平，能靶向河馬/Yes相關蛋白信號通路，促進肺腺癌細胞增殖、遷移、侵襲和血管生成。上述研究提示，miR-183-5p在不同惡性腫瘤中發揮不同作用。本研究結果顯示，AML患者血漿miR-183-5p水平顯著下調，與白細胞計數、骨髓原始細胞比率、預后危險分層有關，提示miR-183-5p低水平參與AML發生、發展。miR-183-5p在AML中低水平可能與啟動子甲基化有關［23］。隨著miR-183-5p水平下調，通過ErbB2相互作用，蛋白激活PI3K/Akt等信號通路增強AML細胞增殖和分化能力，促進AML進展［25］。本研究通過相關性分析發現，AML患者血漿lncRNA SNHG16與miR-183-5p水平呈負相關，提示lncRNA SNHG16與miR-183-5p可能共同參與AML發生、發展，但尚需進一步實驗證實。本研究通過隨訪和繪制不同血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平AML患者生存曲線發現，lncRNA SNHG16高水平和miR-183-5p低水平的AML患者3年總生存率低于lncRNA SNHG16低水平與miR-183-5p高水平患者，說明血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平與AML患者預后密切相關，可能成為AML患者預后評價指標。

綜上所述，AML患者血漿lncRNA SNHG16高水平和miR-183-5p低水平與白細胞計數、骨髓原始細胞比率、預后危險分層和預后有關。但本研究結果還需多中心研究證實，并需進一步延長隨訪時間分析二者與AML患者長期預后的關系。