輪鐘花果實(shí)化學(xué)成分的研究Ⅱ

王建霞， 郭洪偉， 劉一涵， 田云剛， 李 明， 魏 華,2,3*

(1.吉首大學(xué)生物資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，湖南 吉首 416000；2.湖南省土家醫(yī)藥研究中心，湖南 吉首 416000；3.吉首大學(xué)藥學(xué)院，湖南 吉首 416000)

輪鐘花Cyclocodonlancifolius(Roxburgh) Kurz為桔梗科輪鐘花屬草本植物，又名蜘蛛果、肉算盤(pán)等，主要生長(zhǎng)于我國(guó)云南、廣西、四川、湖南及國(guó)外菲律賓等地[1]，漿果形可食用，肉質(zhì)根可藥用，《中華本草》記載其根具有治療腸絞痛、跌打損傷、勞倦氣虛乏力等作用[2]，而且作為湘西、貴州等地少數(shù)民族傳統(tǒng)藥物，具良好的滋補(bǔ)效果，有“南方人參”之稱。但國(guó)內(nèi)外鮮有輪鐘花果實(shí)化學(xué)成分的深入研究，僅通過(guò)試劑反應(yīng)發(fā)現(xiàn)它主要含有機(jī)酸、甾體、酚類、糖類、生物堿、黃酮、蒽醌、三萜等成分[3]，其中多糖、黃酮、花青素具良好的抗氧化活性[4-7]。因此，本實(shí)驗(yàn)開(kāi)展輪鐘花果實(shí)化學(xué)成分的系統(tǒng)研究，首次從輪鐘花屬植物中分離得到8個(gè)化合物，主要為黃酮、聚乙炔醇、苯丙素[8]。

1 材料

AVANCE Ⅲ-600型核磁共振儀(德國(guó)Bruker公司)；LTQ-Obitrap XL液質(zhì)聯(lián)用儀(美國(guó)賽默飛公司)；Rotavapor R-210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士Buchi公司)；LE204E分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司)；WFH-203B三用紫外分析儀(上海精科實(shí)業(yè)有限公司)；柱色譜用硅膠、薄層色譜用硅膠GF254(青島海洋化工有限公司)；SephadexLH-20凝膠(美國(guó)Pharmacia公司)；HW-40C凝膠(美國(guó)H&E公司)。所用試劑均為分析純。

輪鐘花于2018年12月采自云南省曲靖市沾益區(qū)炎方鄉(xiāng)小古山村，經(jīng)吉首大學(xué)張代貴教授鑒定為桔梗科輪鐘花屬植物輪鐘花Cyclocodonlancifolius(Roxburgh) Kurz，憑證標(biāo)本(JIU.WU20181201)保存于湖南省土家醫(yī)藥研究中心。

2 提取與分離

將35 kg輪鐘花果實(shí)搗碎后，加70%乙醇40 L，在70 ℃下提取4次，每次2.5 h，合并提取液，減壓濃縮、回收乙醇，得總浸膏3 668 g，硅膠拌樣，經(jīng)硅膠柱，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮梯度洗脫，減壓濃縮，得二氯甲烷與乙酸乙酯部位總浸膏74.9 g、丙酮部位浸膏46.5 g。

二氯甲烷與乙酸乙酯部位總粗浸膏經(jīng)硅膠柱，二氯甲烷-乙酸乙酯(15∶1～2∶1)、二氯甲烷-甲醇(15∶1～8∶1)梯度洗脫，TLC檢測(cè)合并，得到5個(gè)流分Fr.A1～Fr.A5，F(xiàn)r.A3經(jīng)硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯(14∶1～2∶1)梯度洗脫，得化合物1(56 mg)、化合物2(2.9 g)、化合物3(3.4 mg)；Fr.A4經(jīng)硅膠柱，二氯甲烷-甲醇(30∶1～10∶1)梯度洗脫后再用SephadexLH-20柱(甲醇)洗脫，得化合物4(40.0 mg)、5(38.9 mg)、6(3.5 mg)；Fr.A5經(jīng)硅膠柱，石油醚-二氯甲烷(30∶1～15∶1)梯度洗脫，得化合物7(10.1 mg)。

丙酮部位浸膏(46.5 g)經(jīng)硅膠柱，二氯甲烷-甲醇(40∶1～2∶1)梯度洗脫，TLC檢測(cè)合并，得到4個(gè)流分Fr.B1～Fr.B4，F(xiàn)r.B3經(jīng)硅膠柱色譜層析，二氯甲烷-甲醇(20∶1～1∶1)梯度洗脫，TLC檢測(cè)合并，得到5個(gè)流分Fr.B3-1～Fr.B3-5，F(xiàn)r.B3-1經(jīng)硅膠柱、HW-40C柱(甲醇)、HPLC(甲醇-水，13∶87)，保留時(shí)間為18.6 min，得化合物8(12.2 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末，ESI-MSm/z：435.5[M+Na]+，分子式C29H48O。1H-NMR(600 MHz, CDCl3)δ：5.36(1H, dd,J=5.4, 1.8 Hz, H-6)，5.14(1H, ddd,J=15.0, 9.0, 6.6 Hz, H-22)，5.00(1H, ddd,J=15.0, 8.4, 6.6 Hz, H-23)，3.56(1H, m, H-3)，1.01(3H, s, H-21)，0.85～0.83(3H, m, H-26)，0.81(3H, d,J=2.4 Hz, H-29)，0.80(3H, d,J=1.8 Hz, H-19)，0.79～0.78(3H, m, H-27)，0.69(3H, s, H-18)；13C-NMR(150 MHz, CDCl3)δ：12.7(C-18)，12.8(C-29)，19.4(C-26)，19.9(C-19)，21.5(C-21)，21.6(C-11)，21.6(C-27)，24.8(C-15)，25.9(C-28)，29.1(C-16)，31.9(C-25)，32.0(C-2)，32.1(C-7)，32.3(C-8)，35.9(C-10)，37.7(C-1)，38.7(C-12)，40.3(C-20)，41.0(C-4)，42.7(C-13)，50.6(C-9)，51.7(C-24)，56.5(C-17)，57.0(C-14)，72.3(C-3)，122.2(C-6)，129.6(C-23)，138.8(C-22)，141.2(C-5)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道一致，鑒定為豆甾醇。

化合物2：白色粉末，ESI-MSm/z：434.9[M+Na]+，分子式C29H48O。1H-NMR(600 MHz, CDCl3)δ：5.17～5.13(1H, m, H-7)，5.02(1H, dd,J=15.0, 8.4 Hz, H-22, 23)，3.61～3.58(1H, m, H-3α)，1.02(3H, d,J=6.6 Hz, H-21)，0.85(3H, d,J=6.0 Hz, H-29)，0.81(3H, s, H-19)，0.81～0.79(6H, m, H-26, 27)，0.54(3H, s, H-18)；13C-NMR(150 MHz, CDCl3)δ：12.2(C-18)，12.4(C-29)，13.2(C-19)，19.1(C-27)，21.3(C-26)，21.5(C-21)，21.7(C-11)，23.2(C-15)，25.6(C-28)，28.7(C-16)，29.8(C-6)，31.6(C-4)，32.0(C-25)，34.3(C-10)，37.3(C-1)，38.1(C-2)，39.6(C-12)，40.4(C-5)，41.0(C-20)，43.4(C-13)，49.5(C-9)，51.4(C-24)，55.2(C-14)，56.0(C-17)，71.2(C-3)，117.6(C-7)，129.5(C-23)，138.3(C-22)，139.7(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道一致，鑒定為α-菠甾醇。

化合物3：無(wú)色油狀物，ESI-MSm/z：241.2[M+Na]+，分子式C14H18O2。1H-NMR(600 MHz, DMSO-d6)δ：6.29(1H, dd,J=16.2, 4.8 Hz, H-9)，5.72(1H, dt,J=16.2, 0.8 Hz, H-8)，4.55(1H, t,J=4.8 Hz, H-3)，4.18～4.03(1H, m, H-14a)，3.90～3.83(1H, m, H-10)，3.42(1H, q,J=6.0 Hz, H-14b)，2.41～2.37(1H, m, H-12a)，2.18～2.15(1H, m, H-2a)，1.75(1H, q,J=12.6 Hz, H-2b)，1.61～1.58(1H, m, H-11a)，1.46～1.41(2H, m, H-13)，1.22(1H, s, H-12b)，1.17～1.14(1H, m, H-11b)，0.84(3H, t,J=6.6 Hz, H-1)；13C-NMR(150 MHz, DMSO-d6)δ：15.4(C-1)，22.8(C-12)，25.3(C-13)，31.0(C-2)，31.2(C-11)，59.2(C-3)，64.8(C-14)，67.4(C-5)，73.7(C-7)，74.9(C-6)，76.1(C-10)，85.1(C-4)，107.0(C-8)，148.4(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致，鑒定為9-(tetrahydropyran-2-yl)-non-trans-8-ene-4,6-diyn-3-ol。

化合物4：黃色粉末，ESI-MSm/z：293.5[M+Na]+，分子式C15H10O5。1H-NMR(600 MHz, DMSO-d6)δ：12.95(1H, s, 5-OH)，7.91(2H, dt,J=9.0, 1.8 Hz, H-2′, 6′)，6.90(2H, dt,J=9.0, 1.8 Hz, H-3′, 5′)，6.76(1H, s, H-3)，6.44(1H, d,J=1.8 Hz, H-8)，6.15(1H, d,J=1.8 Hz, H-6)；13C-NMR(150 MHz, DMSO-d6)δ：94.1(C-8)，99.0(C-6)，102.8(C-3)，103.4(C-10)，116.0(C-3′,5′)，121.1(C-1′)，128.5(C-2′, 6′)，157.4(C-9)，161.3(C-4′)，161.5(C-5)，163.7(C-7,2)，181.7(C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道一致，鑒定為芹菜素。

化合物5：黃色粉末，ESI-MSm/z：322.8[M+Na]+，分子式C16H12O6。1H-NMR(600 MHz, DMSO-d6)δ：12.94(1H, s, 5-OH)，10.84(1H, brs, 7-OH)，9.98(1H, brs, 3′-OH)，7.55(1H, dd,J=1.8, 9.0 Hz, H-6′)，7.54(1H, d,J=1.8 Hz, H-2′)，6.91(1H, dd,J=1.8, 9.0 Hz, H-5′)，6.90(1H, s, H-3)，6.49(1H, d,J=1.8 Hz, H-8)，6.17(1H, d,J=1.8 Hz, H-6)，3.87(3H, s, -OCH3)；13C-NMR(150 MHz, DMSO-d6)δ：56.0(OCH3)，94.1(C-8)，98.9(C-6)，103.2(C-3)，103.7(C-10)，110.2(C-2′)，115.77(C-5′)，120.4(C-6′)，121.5(C-1′)，148.1(C-3′)，150.8(C-4′)，157.4(C-9)，161.5(C-5)，163.7(C-2)，164.3(C-7)，181.9(C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道一致，鑒定為金圣草黃素。

化合物6：白色粉末，ESI-MSm/z：302.6[M+Na]+，分子式C14H16O6。1H-NMR(600 MHz, DMSO-d6)δ：6.61～6.60(2H, m, H-2′, 6′)，5.58(1H, t,J=6 Hz, H-2)，4.61(1H, d,J=3.6 Hz, H-6a)，4.50(1H, d,J=4.8 Hz, H-6b)，4.14～4.17(1H, m, H-3a)，3.76(1H, d,J=4.2 Hz, H-3b)，3.75(6H, s, OCH3-3′, 5′)，3.16(1H, d,J=5.4 Hz, H-4)，3.05～3.04(1H, m, H-1)；13C-NMR(150 MHz, DMSO-d6)δ：54.0(C-1,4)，56.3(OCH3-3′, 5′)，71.4(C-3, 6)，85.7(C-2)，103.8(C-2′, 6′)，131.7(C-1′)，135.1(C-4′)，148.2(C-3′, 5′)，178.3(C-5)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道一致，鑒定為浙貝素。

化合物7：無(wú)色油狀物，ESI-MSm/z：317.4[M+Na]+，分子式C19H34O2。1H-NMR(600 MHz, CDCl3)δ：5.38～5.28(4H, m, H-2, 3, 4, 5)，3.64(3H, s, H-6)，2.75(2H, t,J=7.2 Hz, H-16)，2.28(2H, t,J=7.8 Hz, H-6)，2.05～2.01(4H, m, H-14, 15)，1.59(2H, dd,J=14.4, 7.2 Hz, H-17)，1.35～1.26(14H, m, H-8, 9, 10, 11, 12, 13, 18)，0.87(3H, t,J=7.2 Hz, H-19)；13C-NMR(150 MHz, CDCl3)δ：13.5(C-19)，22.0(C-18)，24.3(C-17)，25.1(C-16)，26.6(C-15)，26.6(C-14)，28.5(C-13)，28.5(C-12)，28.6(C-11)，28.7(C-10)，29.0(C-9)，30.9(C-8)，33.5(C-7)，50.8(C-6)，127.3(C-5)，127.4(C-4)，129.4(C-3)，129.6(C-2)，173.7(C-1)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道一致，鑒定為亞油酸甲酯。

化合物8：無(wú)色油狀物，ESI-MSm/z：216.5[M+Na]+，分子式C7H14O6。1H-NMR(600 MHz, DMSO-d6)δ：5.12～3.81(sugar-H, H-1,3,4,5,6)，3.14(3H, s, -OCH3)；13C-NMR(150 MHz, DMSO-d6)δ：48.0(OCH3)，59.5(C-1)，61.3(C-6)，76.9(C-4)，80.8(C-3)，82.6(C-5)，107.4(C-2)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道一致，鑒定為甲基-O-α-D-呋喃果糖苷。

4 結(jié)論

本研究從輪鐘花果實(shí)中分離鑒定出8個(gè)化合物，均為首次從輪鐘花屬植物中分離得到，涉及糖及其糖苷、炔及聚炔、甾醇、黃酮等。其中，α-菠甾醇量多，可能是主要成分，它屬于植物甾醇類成分，具有抗炎、鎮(zhèn)痛等作用[17-18]，并對(duì)蘋(píng)果腐爛病菌、水稻紋枯病菌有抑制作用[19]。上述結(jié)果豐富了輪鐘花果實(shí)化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，為該植物開(kāi)發(fā)利用提供了參考依據(jù)。