腫瘤歸巢肽-近紅外熒光蛋白融合蛋白的制備及其熒光特性

楊馥旭, 胡楠楠, 郭 沖, 穆業(yè)騰, 薛 晗, 范宇鑫, 郭峰霖, 關(guān)新剛,2

（1. 北華大學(xué)醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院醫(yī)藥生物工程重點實驗室, 吉林 吉林132013；2. 臺州學(xué)院醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)系, 浙江 臺州 318000）

近紅外光譜（near-infrared spectrum, NIR）的光學(xué)窗口為650～900 nm, 具有背景熒光低、光散射少和組織光透性較高等優(yōu)點, 是用于活體和深部組織成像的理想示蹤光譜[1-3］。近紅外熒光蛋白（near-infrared fluorescent protein, NIRFP） 是一種能發(fā)出近紅外熒光的新型蛋白質(zhì)。與傳統(tǒng)綠色熒光蛋白[4］（green fluorescent protein, GFP）和紅色熒光蛋白[5］（red fluorescence protein, RFP） 比較, NIRFP 由于其良好的生物相容性和可用于活體成像功能得到了越來越多的關(guān)注。已有研究者[6-8］制備出近紅外熒光蛋白720（near-infrared fluorescent protein 720, iRFP720）、單體近紅外熒光蛋白670（monomeric near-infrared fluorescent protein 670, miRFP670） 和具有光激活特性的多種NIRFP。AN 等[9］采用小型超紅熒光蛋白和牛血清白蛋白制備了用于腫瘤活體成像的熒光探針；HERBERT等[10］制備了載NIRFP 的病毒顆粒, 能夠?qū)崟r追蹤顆粒通過高通透性和滯留效應(yīng) （enhanced permeability and retention effect, EPR）靶向至腫瘤組織。然而, 目前關(guān)于具有腫瘤主動靶向功能NIRFP 的報道較少。

miRFP670 是一種激發(fā)波長為642 nm 和發(fā)射波長為670 nm 的單體近紅外熒光蛋白, 源自沼澤紅假單胞菌的細(xì)菌光敏色素感受器, 在哺乳動物細(xì)胞中具有較強(qiáng)光穩(wěn)定性和光強(qiáng)度[8］。腫瘤歸巢肽（tumor homing peptides, THPs） 是一類對腫瘤組織和血管具有歸巢效應(yīng)的短肽, 能夠與腫瘤細(xì)胞表面的特異性受體結(jié)合[11］。 LyP-1 （ 序 列CGNKRTRGC）就是采用噬菌體展示技術(shù)篩選得到 的THPs。LyP-1 能夠與乳腺癌[12］、胰 腺 癌[13］和卵巢癌[14］等腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)的p32 蛋白特異性結(jié)合, 從而靶向至腫瘤部位[15］, 因此LyP-1近年來被廣泛應(yīng)用于腫瘤的精準(zhǔn)診斷和靶向治療領(lǐng)域[16-18］。……