blaNDM-1 基因敲除對陰溝腸桿菌毒力的影響

代鵬飛, 楊 愷, 杜 艷, 劉淑敏

（昆明醫科大學第一附屬醫院醫學檢驗科 云南省檢驗醫學重點實驗室 云南省醫學檢驗臨床醫學研究中心, 云南 昆明 650032）

blaNDM-1 基因已經被發現存在于眾多動物和周圍環境中, 其能進行廣泛傳播的基礎是由于blaNDM-1 基因常位于可移動遺傳元件上, 介導耐藥基因的水平轉移, 在陰溝腸桿菌中, blaNDM-1基因常位于IncFⅡA 型質粒中[1-2］。病原性細菌致病能力的強弱程度稱為毒力, 通常病原菌毒力越大, 其致病性就越強, 若攜帶blaNDM-1 基因的可移動遺傳元件轉移至毒力和適應能力更強的菌株或存在固有耐藥性的菌株中, 將會對公共衛生造成嚴重威脅, 這可能導致攜帶blaNDM-1 基因的細菌既具有高毒力, 又具有廣泛耐藥性。有研究[3］顯示：blaNDM-1 基因可能與細菌的毒力有關。然而關于blaNDM-1 基因對陰溝腸桿菌毒力的影響目前尚不明確。本研究比較攜帶blaNDM-1 基因的陰溝腸桿菌T2 及其blaNDM-1 基因敲除菌株ΔT2 毒力的差異, 探討blaNDM-1 基因對陰溝腸桿菌毒力的影響, 為進一步論證blaNDM-1 基因是否有助于高毒力高耐藥菌株的形成提供依據。

1 材料與方法

1.1 菌株、細胞、主要試劑和儀器

攜帶blaNDM-1 基因的陰溝腸桿菌T2 和blaNDM-1 基因敲除的陰溝腸桿菌ΔT2 均為本實驗室前期構建和保存。小鼠巨噬細胞（RAW264.7 細胞）購自中國BNCC 公司。細胞培養相關試劑購自以色列Biological Industries 公司, PCR 相關試劑購自北京博邁德生物科技有限公司。CO2培養箱購自美國Thermo Scientific 公司, IG603 二級生物安全柜購自美國Baker 公司, 恒溫搖床和紫外分光光度計購自美國Thermo 公司, 麥康凱平板購自英國OXOID 公司, 細菌比濁儀購自法國梅里埃公司。……