超高效液相色譜-串聯質譜法檢測蒸餾酒中的3種非法添加物質的方法學驗證結果

◎ 楊 針，黎姝蔓

（重慶市永川食品藥品檢驗所，重慶 402160）

我國白酒多以高粱、小麥等谷物為原料發酵后蒸餾儲藏所制，以蒸餾酒為主導[1]。大多數白酒中含有一定比例的醛類、甲醇和雜醇油等物質易引發飲酒者的上頭、口干等不適反應，一些不法商販違規在白酒中添加頭痛粉（主要成分為對乙酰氨基酚、乙酰水楊酸和咖啡因）以緩解劣質白酒引起的頭痛等不適，以次充好。目前，將白酒中對乙酰氨基酚、乙酰水楊酸和咖啡因作為食品中的非法添加物進行檢測研究時，普遍采用高效液相色譜法和氣相色譜-串聯質譜法[2-7]，這些檢測方法存在靈敏度、分辨率、回收率不高，操作復雜等不足，無法滿足微量或痕量成分的檢測需求，因此筆者前期建立了蒸餾酒中對乙酰氨基酚、水楊酸、咖啡因的超高效液相色譜-串聯質譜（Ultra Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry，UPLC-MS/MS）檢測方法，為驗證該自制方法的適用情況，邀請3家相關檢驗檢測機構共同對該自制方法在不同環境、不同設備下的精密度、線性、回收率進行驗證。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

水楊酸標準對照品（批號1921804，含量：99.7%），壇墨質檢-標準物質中心；對乙酰氨基酚標準對照品（批號1201801，含量：98.0%），壇墨質檢-標準物質中心；咖啡因標準對照品（批號0981904，含量：98.0%），壇墨質檢-標準物質中心；蒸餾酒酒樣：市售；甲酸（色譜純）；甲醇（色譜純）。

1.2 儀器與設備

超高效液相色譜儀-串聯三重四極桿質譜儀，配有電噴霧（ESI）離子源；萬分之一電子天平；千分之一電子天平；水浴鍋；超純水機。

1.3 標準物質溶液的配制

對照品儲備液：分別精密稱取水楊酸、對乙酰氨基酚、咖啡因標準對照品10 mg（精確至0.000 1 g）置于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。分別得到對乙酰氨基酚、咖啡因和水楊酸對照品儲備液，濃度為 400 μg·mL-1，-18 ℃低溫避光保存。

混合標準中間液：分別準確量取標準儲備液各2.5 mL于同一20 mL容量瓶中，用超純水稀釋定容至刻度，配制成濃度為50 μg·mL-1的混合標準中間液。

混合標準工作液：準確量取混合標準中間液2.0 mL于同一50 mL容量瓶中，用超純水稀釋定容至刻度，配制成濃度為2 μg·mL-1的混合標準工作液。

1.4 樣品前處理

準確稱取5 g試樣（精確至0.001 g）置于50 mL燒杯中，于60 ℃水浴加熱30 min，將燒杯中揮發后剩余殘渣全部轉移至50 mL容量瓶中，用純水定容至刻度并搖勻，經0.22 μm水相微孔濾膜過濾，供液相色譜-串聯質譜分析。

1.5 儀器參考條件

各實驗室按照自身條件選擇液相色譜柱，設定高效液相色譜儀流動相梯度洗脫程序；監測離子及對應檢測參數見表1。

表1 監測離子及對應參數表

2 結果與分析

2.1 重慶市永川食品藥品檢驗所相關數據

2.1.1 對乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標準曲線

儀器型號：Agilent 6420型三重四極桿質譜儀。由表2可知，對乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標準曲線符合GB/T 27404—2008中線性回歸方程的相關系數≥0.98的要求。

表2 對乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標準曲線表

2.1.2 檢測精密度及回收率

選用的蒸餾酒酒樣基質均為空白基質，本底值均為未檢出。由表3可知，3種非法添加物質在空白基質中按照對乙酰氨基酚 20.58 ng·mL-1、41.16 ng·mL-1、102.90 ng·mL-1，咖啡因 20.78 ng·mL-1、41.55 ng·mL-1、103.88 ng·mL-1，水楊酸 21.73 ng·mL-1、43.47 ng·mL-1、108.67 ng·mL-1進行添加，樣品經處理后上機檢測，實驗結果RSD均≤2.52%，符合GB/T 27404—2008中被測組分含量為1 mg·kg-1時，實驗室內變異系數≤11%的要求；3種物質在不同的加標濃度水平下的平均回收率在94.7%～105.0%，符合GB/T 27404—2008中被測組分含量為0.1～1.0 mg·kg-1時，回收率為80%～110%的要求。

表3 對乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸檢測結果表

2.2 重慶市計量質量檢測研究院第三分院相關數據

2.2.1 對乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標準曲線

儀器型號：API4000型三重四極桿質譜儀。由表4可知，對乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標準曲線符合GB/T 27404—2008中線性回歸方程的相關系數≥0.98的要求。

表4 對乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標準曲線表

2.2.2 檢測精密度及回收率

選用的蒸餾酒酒樣基質均為空白基質，本底值均為未檢出。由表5可知，3種非法添加物質在空白基質中按照 10 ng·mL-1、40 ng·mL-1、100 ng·mL-1進行添加，樣品經處理后上機檢測，實驗結果RSD均≤9.20%，符合GB/T 27404—2008中被測組分含量為1 mg·kg-1時，實驗室內變異系數≤11%的要求；3種物質在不同的加標濃度水平下的平均回收率在88.93%～105.62%，符合GB/T 27404—2008中被測組分含量為0.1～1.0 mg·kg-1時，回收率為80%～110%的要求。

表5 對乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸檢測結果表

2.3 重慶市黔江食品藥品檢驗所相關數據

2.3.1 對乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標準曲線

儀器型號：Agilent 6420型三重四極桿質譜儀。由表6可知，對乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標準曲線符合GB/T 27404—2008中線性回歸方程的相關系數≥0.98的要求。

表6 對乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標準曲線表

2.3.2 檢測精密度及回收率

選用的蒸餾酒酒樣基質均為空白基質，本底值均為未檢出。由表7可知，3種非法添加物質在空白基質中按照 20 ng·mL-1、40 ng·mL-1、100 ng·mL-1進行添加，樣品經處理后上機檢測，實驗結果RSD均≤5.45%，符合GB/T 27404—2008中被測組分含量為1 mg·kg-1時，實驗室內變異系數≤11%的要求；3種物質在不同的加標濃度水平下的平均回收率在87.0%～105.0%，符合GB/T 27404—2008中被測組分含量為0.1～1.0 mg·kg-1時，回收率為80%～110%的要求。

表7 對乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸檢測結果表

2.4 重慶市永川區農產品質量安全中心相關數據

2.4.1 對乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標準曲線

儀器型號：TRIPLE QuAD 4500型三重四極桿質譜儀。由表8可知，對乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標準曲線符合GB/T 27404—2008中線性回歸方程的相關系數≥0.98的要求。

表8 對乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸標準曲線表

2.4.2 檢測精密度及回收率

選用的蒸餾酒酒樣基質均為空白基質，本底值均為未檢出。由表9可知，3種非法添加物質在空白基質中按照對乙酰氨基酚 20 .58 ng·mL-1、41.16 ng·mL-1、102.90 ng·mL-1，咖啡因 20 .78 ng·mL-1、41.55 ng·mL-1、103.88 ng·mL-1，水楊酸 21.73 ng·mL-1、43.47 ng·mL-1、108.67 ng·mL-1進行添加，樣品經處理后上機檢測，實驗結果RSD均≤6.55%，符合GB/T 27404—2008中被測組分含量為1 mg·kg-1時，實驗室內變異系數≤11%的要求；3種物質在不同的加標濃度水平下的平均回收率在83.9%～95.8%，符合GB/T 27404—2008中被測組分含量為0.1～1.0 mg·kg-1時，回收率為80%～110%的要求。

表9 對乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸檢測結果表

3 結論

經4家實驗室驗證，該自制方法的標準曲線均能滿足線性回歸方程的相關系數不低于0.98的要求，滿足被測組分含量為1 mg·kg-1時，實驗室內變異系數≤11%的要求；滿足被測組分含量為0.1～1.0 mg·kg-1時，回收率為80%～110%的要求，確認該方法在不同檢測環境、不同儀器設備上普遍可行。