小麥粉中過氧化苯甲酰測定方法驗證

李鵬 李峰 馬宏偉 蔣梅峰

（山西省糧油科學研究所有限公司，山西太原 030024）

過氧化苯甲酰，俗名引發劑BPO，分子式為C14H10O4，常溫下為白色結晶性粉末，微有苦杏仁氣味，能溶于苯、氯仿、乙醚，微溶于乙醇及水。過氧化苯甲酰常用作聚氯乙烯、不飽和聚酯類、聚丙烯酸酯等的單體聚合引發劑，也可作聚乙烯交聯劑、橡膠硫化劑，還可在化工生產中作為漂白劑、氧化劑使用。過氧化苯甲酰對小麥粉有增白效果，2011年2 月11 日我國衛生部等六部委發布通告，自2011年5 月1 日起，禁止在面粉生產中添加過氧化苯甲酰、過氧化鈣；食品添加劑生產企業不得生產、銷售過氧化鈣和過氧化苯甲酰。

過氧化苯甲酰是一種強氧化劑，易燃燒，性質極不穩定，遇到摩擦、撞擊、明光、高溫、硫及還原劑等均有引起著火爆炸的危險，加入硫酸時也能引發生燃燒。為防止爆炸，一般用碳酸鈣、磷酸鈣、硫酸鈣等不溶性鹽或滑石粉、皂土等將其稀釋至20%左右使用，或儲存時注入25%～30%的水。過氧化苯甲酰低毒，誤服有害，對眼睛、皮膚和黏膜有刺激作用，應避免直接接觸。本試驗主要采用液相色譜法對小麥粉中的過氧化苯甲酰進行測定，其原理是用甲醇提取過氧化苯甲酰，用碘化鉀將其還原為苯甲酸，高效液相色譜法分離，在230 nm處測定。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

L2000 高效液相色譜儀，（日立）天美有限公司，附L-2420 紫外檢測器；QL-866 旋渦混合器，海門市其林貝爾儀器有限公司；MS204S 天平，感量0.1 mg，梅特勒-托利多國際有限公司。

乙酸銨，優級純，天津光復科技發展有限公司；甲醇，DiKMA 色譜級；苯甲酸標準品，質量濃度1.00 mg/mL，中國計量科學研究院；孔徑0.22μm濾膜等。

1.2 色譜條件

色譜柱：Hypersil ODS2（5μm,4.6×250 mm）；紫外檢測器波長：230 nm；流動相：甲醇∶水（含0.02 mol/mL 乙酸胺）=10∶90；流速：1 mL/min；柱溫：40 ℃；進樣體積：10μL。

1.3 標準溶液配制及校準曲線

分別稱取8 份5 g 不含苯甲酸的小麥粉于8 支50 mL具塞比色管中，加10 mL 甲醇，在漩渦混合器上混勻1 min，靜置5 min，加入5 mL50%碘化鉀水溶液，然后充分振搖1 min，放置10 min，加水至50 mL，混勻靜置待樣液分層后，取上清液用孔徑0.22μm 濾膜過濾后備用。將標準品（1 000μg/ml）用過膜濾液稀釋配制成0μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、100μg/mL、200μg/mL 的標準工作液，并按照本方法的儀器條件進行測定，以苯甲酸峰面積為縱坐標，以苯甲酸質量濃度為橫坐標繪制標準曲線。

1.4 樣品前處理

稱取小麥粉樣品5 g（準確至0.1mg）于50 mL具塞比色管中，加10 mL 甲醇，在漩渦混合器上混勻1 min，靜置5 min，加入5 mL50%碘化鉀水溶液，然后充分振搖1 min，放置10 min，加水至50 mL，混勻靜置待樣品液分層后，取上清液用孔徑0.22μm濾膜過濾，取濾液注入液相色譜儀進行分析。

2 結果與分析

2.1 校準曲線范圍

以苯甲酸峰面積為Y軸，苯甲酸質量濃度為X軸繪制標準曲線（如圖1），得到一次線性回歸方程如下：Y=33 591X+24 384，相關系數R2=0.999。

圖1 苯甲酸標準曲線

按照GB/T 27404—2008 附錄F 的要求，本標準溶液系列由8 個點（≥5 個）組成，其質量濃度范圍0μg/mL～200μg/mL，線性回歸方程的相關系數為0.999（＞0.99），滿足方法要求。

2.2 精密度

在3 份小麥粉空白基質中添加苯甲酸標準溶液，使其苯甲酸含量分別為0.5 mg/kg、1.0 mg/kg、2.0 mg/kg，每份樣品進行6 次平行測定，試驗結果見表1。

表1 苯甲酸精密度

按照GB/T 27404—2008 附錄F 的要求，當被測含量≤10 mg/kg 時，實驗室內變異系數≤7.5%，當被測含量≤1 mg/kg 時，實驗室內變異系數≤11%。由表1 可知，該方法測試結果滿足方法精密度要求。

2.3 方法測定低限

方法的檢測限即為方法的測定低限，由于基質空白信號值過低，通過對小麥粉加標使其苯甲酸的含量為1.0 mg/kg，對其進行20 次測定，根據公式CL=3Sb/b計算結果，其中Sb為20 組空白值標準偏差，b 為方法校準曲線的斜率，結果見表2。由表2 結果分析可知，按照GB/T 27404-2008附錄F 的要求，該方法測定低限符合標準要求。

表2 苯甲酸測定方法測定低限

2.4 準確度

在小麥粉空白基質中添加苯甲酸標準溶液，使其含量為0.5 mg/kg、1.0 mg/kg、2.0 mg/kg、5.0 mg/kg，每個含量做3 次平行試驗，測得的回收率表示本方法的準確度，回收率測定結果見表3。

表3 苯甲酸加標回收率

按照GB/T 27404—2008 附錄F 要求，被測組分含量為0.1mg/kg～1mg/kg 時，回收率在80%～110%之間，被測組分含量為1 mg/kg～100 mg/kg 時，回收率在90%～110%之間，測定結果符合方法要求。

3 結論

試驗結果表明，該方法在校準曲線范圍、精密度、測定低限、準確度方面均符合相關要求，確認此方法在實驗室適用。