多種有機(jī)磷農(nóng)藥在GC和GC-MS/MS中的回收率對(duì)比研究

鄭樂濤，李 琰，趙迎春，李國(guó)富，胡嘉敏

（鶴山市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心，廣東 鶴山 529700）

追求高效、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便的農(nóng)殘檢測(cè)技術(shù)和方法，是每個(gè)農(nóng)殘檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室努力的方向。在農(nóng)殘檢測(cè)中，前處理方法和檢測(cè)儀器設(shè)備是檢測(cè)過(guò)程重點(diǎn)中的重點(diǎn)，應(yīng)深入研究和改善。早些年，農(nóng)檢實(shí)驗(yàn)室引入的第一臺(tái)大型檢測(cè)設(shè)備多為氣相色譜儀（GC）[1]，因其性能穩(wěn)定，操作和維護(hù)較為簡(jiǎn)單，被從業(yè)者所青睞；農(nóng)殘檢測(cè)一般運(yùn)用《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》（NY/T 761-2008）的前處理方法[2]。近段時(shí)間，更為先進(jìn)的三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀（GC-MS/MS）[3]越來(lái)越被農(nóng)檢實(shí)驗(yàn)室采購(gòu)使用，普及率逐步提高，多運(yùn)用《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)植物源性食品中208種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》（GB 23200.113-2018）中QuEChERS（Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe）[4]前處理方法。

本次試驗(yàn)選取的試驗(yàn)基質(zhì)品種為冬瓜和柑。在我國(guó)，冬瓜種植面積大，消費(fèi)量大，是餐桌上的常見農(nóng)產(chǎn)品；而柑在南方地區(qū)種植居多，其不僅可以新鮮食用，還可以后期深加工為其他干制類產(chǎn)品。選取這兩種果蔬，具有較好的代表性和現(xiàn)實(shí)意義。通過(guò)添加甲胺磷、乙酰甲進(jìn)行研究胺磷、甲拌磷、毒死蜱、甲基對(duì)硫磷、水胺硫磷、丙溴磷、三唑磷、樂果、殺螟硫磷這10種有機(jī)磷農(nóng)藥，進(jìn)行方法和儀器對(duì)比研究，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，驗(yàn)證其差異。

1 材料和方法

1.1 試劑和耗材

甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、毒死蜱、甲基對(duì)硫磷、水胺硫磷、丙溴磷、三唑磷、樂果、殺螟硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 μg/mL）、乙腈（色譜純）、硫酸鎂、氯化鈉、檸檬酸鈉、檸檬酸氫二鈉、乙

二胺-N-丙基硅烷化硅膠、丙酮（色譜純）、乙酸乙酯（色譜純）、濾膜（0.2 μm，有機(jī)溶劑膜）、陶瓷均質(zhì)子。

1.2 設(shè)備

三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀（型號(hào)：Agilent 8890-7000D）、氣相色譜儀（型號(hào)：Agilent 7890B）、電子天平（型號(hào)：梅特勒托利多ME4002E）、離心機(jī)（型號(hào)：天美VELOCITY18R）、勻漿機(jī)（型號(hào)：天津恒奧HFJ-10）、水浴氮吹儀（型號(hào)：北京成萌偉業(yè)CM-24）、組織搗碎機(jī)（日本松下MX-151SG1）、漩渦振蕩器（型號(hào)：德國(guó)IKA MS3 control）。

1.3 主要設(shè)備運(yùn)行條件

氣相色譜儀Agilent7890B運(yùn)行條件：氣體流量：載氣20 mL/min、氫氣100 mL/min、空氣80 mL/min、加熱溫度：柱溫50℃～280℃、進(jìn)樣口200℃、檢測(cè)器240℃。

檢測(cè)器類型：FPD色譜柱：DB-1701P。

三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀Agilent7000D運(yùn)行條件：氣體流量：1.2 mL/min、加熱溫度：柱溫60℃～310℃、進(jìn)樣口280℃、接口280℃、離子源280℃、質(zhì)譜類型：MSD色譜柱：HP-5MS UI。

兩部設(shè)備運(yùn)行良好，狀態(tài)正常。

1.4 試驗(yàn)基質(zhì)樣品

冬瓜、柑（市場(chǎng)購(gòu)買），各3 kg。

2 試驗(yàn)步驟

2.1 樣品前處理

2.1.1 試驗(yàn)樣品制備

將冬瓜和柑分別按以下方法制備：去柄，取全瓜或全果，切碎后，用四分法縮分，用組織搗碎機(jī)打成漿狀，封裝標(biāo)記后備用。

2.1.2 試驗(yàn)樣品農(nóng)藥添加

對(duì)試驗(yàn)樣品進(jìn)行農(nóng)藥添加，稱量數(shù)量和農(nóng)藥添加情況見表1。

表1 試驗(yàn)樣品農(nóng)藥添加濃度情況表Tab.1 The pesticide addition concentration of experimental samples

2.1.3 試驗(yàn)樣品提取和凈化

（1）NY/T 761—2008第1部分方法二的提取和凈化方法[5]：在稱量好的25 g試樣中加入50 mL的乙腈，通過(guò)勻漿機(jī)勻漿2 min，過(guò)濾到裝有6 g氯化鈉的具塞量筒中，手壓緊具塞量筒劇烈震蕩1 min后靜置30 min，使乙腈相和水相分層。靜置結(jié)束后，用刻度吸管吸取10 mL上層乙腈溶液，放入燒杯中，將燒杯放置在80℃的水浴氮吹儀中氮吹，蒸發(fā)至近干，加入2 mL丙酮，轉(zhuǎn)移至玻璃離心管，并用3 mL丙酮沖洗燒杯，再繼續(xù)轉(zhuǎn)移至玻璃離心管，定容至5 mL，漩渦混勻后用有機(jī)膜過(guò)濾到檢測(cè)樣品小瓶，約1 mL。

（2）GB 23200.113—2018 QuEChERS的提取和凈化方法[6]：稱量10 g試樣置于50 mL的離心管中，加入10 mL的乙腈，再加入0.5 g檸檬酸氫二鈉、1 g氯化鈉、4 g硫酸鎂、1 g檸檬酸鈉和一顆陶瓷均質(zhì)子。劇烈振蕩1 min，離心5 min（4 200 r/min）。準(zhǔn)確吸取6 mL上清液到15 mL離心管中，加入885 mg硫酸鎂、150 mg乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠，旋渦1 min，再離心5 min（4 200 r/min），用刻度吸管吸取2 mL上層清液于試管中，放置在40℃的水浴氮吹儀中氮吹，蒸發(fā)至近干，加入1.0 mL乙酸乙酯，漩渦混勻后用有機(jī)膜過(guò)濾到檢測(cè)樣品小瓶，約0.8 mL。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

將濃度為100 μg/mL的甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、毒死蜱、甲基對(duì)硫磷、水胺硫磷、丙溴磷、三唑磷、樂果、殺螟硫磷，用丙酮稀釋配制至10 μg/mL，再分別用2.1.3制備出來(lái)的冬瓜和柑基質(zhì)[7]，稀釋配制成這10種農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，濃度分別為0.005 μg/mL、0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.1 μg/mL、0.5 μg/mL、1 μg/mL。

2.3 上機(jī)檢測(cè)

按試劑空白、試樣、混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（基質(zhì)）的順序在氣相色譜儀（GC）和三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀（GC-MS/MS）檢測(cè)。

3 試驗(yàn)結(jié)果與分析

3.1 定量的線性關(guān)系

在氣相色譜儀（GC）上0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.1 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL系列濃度混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀（GC-MS/MS）上0.005 μg/mL、0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.1 μg/mL、0.5 μg/mL系列濃度混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。從表2中可以看出，兩種方法的10種有機(jī)磷農(nóng)藥的線性相關(guān)系數(shù)均＞0.990，線性關(guān)系良好。

表2 線性方程和相關(guān)系數(shù)Tab.2 The linear equation and correlation coefficient

3.2 冬瓜基質(zhì)的回收率和精密度

冬瓜基質(zhì)下，兩種方法的不同添加濃度的回收率和精密度情況見表3。

表3 兩種方法的回收率和精密度（冬瓜基質(zhì)）Tab.3 The recovery rate and precision of the two methods(wax gourd matrix)

總體數(shù)據(jù)為：GB 23200.113—2018 QuEChERS法的回收率在47.0%～120.0%，總體平均回收率為79.6%，精密度在2.5%～8.3%。NY/T 761—2008第1部分方法二的回收率在43.0%～106.0%，總體平均回收率為77.7%；精密度在0.8%～5.1%。

對(duì)分析部分異常試驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，添加濃度為0.01 mg/kg的各種農(nóng)藥回收率起伏較大，精密度較大；GB 23200.113—2018 QuEChERS法中的甲拌磷的回收率較低，NY/T 761—2008第1部分方法二的丙溴磷、毒死蜱、甲胺磷回收率偏低；其他農(nóng)藥的回收率均能落在60.0%～100.0%的理想?yún)^(qū)間且精密度良好。

總體分析可知，兩種方法的回收率差別不大。

3.3 柑基質(zhì)的回收率和精密度

柑基質(zhì)下，兩種方法的不同添加濃度的回收率和精密度情況見表4。

表4 兩種方法的回收率和精密度（柑基質(zhì)）Tab.4 The recovery and precision of the two methods(citrus matrix)

總體數(shù)據(jù)為：GB 23200.113—2018 QuEChERS法的回收率在51.0%～120.0%，總體平均回收率為76.9%；精密度在2.3%～9.8%。NY/T 761—2008第1部分方法二的回收率在45.0%～102.0%，總體平均回收率為77.6%；精密度在0.9%～6.2%。

對(duì)部分異常試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析可知，添加濃度0.01 mg/kg的各種農(nóng)藥回收率起伏較大，精密度較大；GB 23200.113—2018 QuEChERS法中的甲胺磷、甲拌磷的回收率偏低；其他農(nóng)藥的回收率均能落在60.0%～100.0%的理想?yún)^(qū)間且精密度良好。

總體分析可知，NY/T 761—2008第1部分方法二的回收率稍微好一些。

4 結(jié)論

通過(guò)10種有機(jī)磷農(nóng)藥運(yùn)用NY/T 761—2008第1部分方法二和GB 23200.113—2018 QuEChERS法分別在GC和GCMS/MS得出的數(shù)據(jù)和分析結(jié)果可知，兩種試驗(yàn)方法在冬瓜和柑這兩種果蔬基質(zhì)上NY/T 761—2008第1部分方法二的回收率稍高一點(diǎn)，兩種方法的精密度均符合試驗(yàn)要求。但GB 23200.113—2018 QuEChERS法所用試劑較安全，操作較簡(jiǎn)便，高效，GC-MS/MS的樣品檢測(cè)時(shí)間較短。希望以后通過(guò)眾多科研人員對(duì)GB 23200.113—2018 QuEChERS法在GC-MS/MS上進(jìn)行不斷摸索、研究、優(yōu)化、改進(jìn)，逐步提高農(nóng)藥回收率，為農(nóng)殘檢測(cè)探索出一種優(yōu)良的試驗(yàn)路徑。