合歡皮的化學成分研究

楊靜，崔曉雪，陳娜，孫皓，鄭永麗

（天津渤海職業(yè)技術(shù)學院，天津 300211）

合歡皮為豆科植物合歡的干燥樹皮，別名合昏皮、夜合皮、合歡樹皮[1]，合歡皮中含有三萜、黃酮、木脂素、生物堿、鞣質(zhì)及多糖等多種化學成分[2]。為了開發(fā)利用其藥用資源，本文選擇中國四川產(chǎn)合歡皮作為原料，對其化學成分進行系統(tǒng)分離及結(jié)構(gòu)鑒定。

1 儀器

分析型高效液相色譜儀為Waters 2695 Alliance Separations Module，Empower Pro 工 作站，色譜柱：Agilent zorbax C18柱(5μm，250 mm×4.6 mm)，檢測器：Alltech 2000 ELSD，溫度：110℃，氣流量：2.4 L/min；制備型高效液相色譜儀為：PRIMELINE pump (5mL/min)，KNAUER RID，Hanbon licheoshper C18柱（5μm，250 mm×10 mm）;ESI-MS 測定儀器為ABI 公司API 3000 液質(zhì)色譜儀。 超導核磁共振儀為VarianUNITYINOVA600 超導核磁共振譜儀。 核磁測定所用溶劑為氘代吡啶。

合歡皮藥材2006 年8 月采集于四川省，經(jīng)天津渤海職業(yè)技術(shù)學院孫皓教授鑒定為豆科植物合歡干燥樹皮。

2 提取分離

2.1 提取粗分

取合歡皮飲片藥材5 kg，加10 倍量的體積分數(shù)為50%的乙醇，回流提取兩次，合并濾液，減壓濃縮得干燥浸膏1145 g；取1000 g 浸膏，加適量水溶解，經(jīng)AB-8 大孔吸附樹脂柱分離，依次用水（6倍量柱體積）、30%乙醇（6 倍量柱體積）、50%乙醇（6 倍量柱體積）、80%乙醇（6 倍量柱體積）、95%乙醇（4 倍量柱體積）洗脫，分別收集洗脫液，經(jīng)薄層展開及理化鑒別，其中80%乙醇洗脫部位主要為皂苷類成分。

2.2 皂苷部分分離純化

將80%乙醇洗脫部位回收乙醇后，濃縮干燥得干膏56 g，加500 mL 50%乙醇溶解，離心，上清經(jīng)SP825 大孔吸附樹脂柱，依次用50%乙醇、70%乙醇（記為HH-70）以及95%乙醇洗脫，分別收集各洗脫液，濃縮，干燥，得到：HH-70（35.3 g）。 取HH-70 部分30 g，經(jīng)上行硅膠柱色譜分離，分成20 份，甲醇溶解后TLC 檢測，合并相同組分得Fr.A（10.4 g）。

組分Fr.A 經(jīng)C18開放柱色譜，甲醇－水（63%～100%）梯度洗脫，收集流份308 份（Fr.A-C18-1-308）。 取流份Fr. A-C18-60-65（270 mg）經(jīng)過開放C18柱（100 mL）由56%甲醇洗脫，收集27～29 流份合并蒸干，得化合物1（11.3 mg）。 組分Fr. A-C18-26-30（185.7 mg）經(jīng)開放C18 柱54%甲醇洗脫，收集流份63 份。 合并46 ～49 流份得化合物2（17.36mg）。 合并64～77 流份（16mg）經(jīng)制備液相（61%甲醇）HPLC 分別得化合物6（3.55mg）。 取流份Fr. A-C18-39-42（235 mg）經(jīng)開放C18柱54%甲醇洗脫后， 再經(jīng)100%甲醇洗脫， 得流份118（123.2mg）, 經(jīng)過液相60%甲醇制備得化合物4（12.67mg）。 取組分Fr.A-C18-20-25（120.4 mg），經(jīng)液相60%HPLC 制備， 收集流份1 得化合物3（7.17mg），收集流份4（15.98mg）經(jīng)液相55%甲醇HPLC 制備，得化合物5（7.39mg）。

3 化合物結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 化合物1

白色無定形粉末， 易溶于水。 Liebermann-Burchard 反應和Molish 反應均呈紫紅色。 在正離子ESI-MS 譜中， 可以看到準分子離子峰m/z：949.2[M+K]+,933.1[M+Na]+,911.1[M+H]+和特征碎片峰m/z：779.1[M+H-132]+,633.2[M+H-132-146]+和471.2 [M+H-132-146-162]+，推測化合物1 含有1 個六碳糖基，1 個甲基五碳糖基，1 個五碳糖。結(jié)合碳譜數(shù)據(jù)，推測其分子式為C47H74O17。

在1H -NMR 譜高場區(qū)， 甲基質(zhì)子信號δ0.80，0.84，0.88，1.03，1.04，1.35，1.41 歸屬為苷元上7 個甲基質(zhì)子的信號；δ1.49（d）歸屬為甲基五碳糖上的甲基質(zhì)子信號，在1H-NMR 譜低場區(qū)，δ 4.94 (1H, d, J = 7.2 Hz)， 5.03 (1H, d, J = 7.8 Hz)，δ5.07(1H, d, J = 6.6 Hz) 為3 個糖基端基質(zhì)子的信號。δ5.29(1H,br)為1 個烯基質(zhì)子的信號。 在13C-NMR譜上也出現(xiàn)3 個相應的糖基端基碳信號：δ 103.5，106.8 和107.1； 一對烯碳信號δ 124.6 和140.2；一個羰基碳信號δ181.3。 同時，將化合物1與文獻報道[3]的Julibroside A2進行比較，發(fā)現(xiàn)其核磁數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定為Julibroside A2。

3.2 化合物2

白色無定形粉末， 易溶于水。 Liebermann-Burchard 反應和Molish 反應均呈紫紅色。

在1H -NMR 譜高場區(qū)， 甲基質(zhì)子信號δ0.96，1.01，1.05，1.08，1.16，1.29，1.88 歸屬為苷元上7 個甲基質(zhì)子的信號；δ1.59（d），1.76（d）歸屬為甲基五碳糖上的甲基質(zhì)子信號。 在13C-NMR 譜上出現(xiàn)8 個糖基端基碳信號：δ106.8,102.3,106.3,95.8,101.8,105.8,111.1 和99.4；并且在δ174.5 和167.6出現(xiàn)兩個羰基信號。 同時，將化合物2 與化合物1進行比較，發(fā)現(xiàn)其糖端基碳數(shù)據(jù)只有δ102.3 與化合物1 的δ103.4 不一致，故推測可能C-3 糖鏈有差異，經(jīng)與文獻對照可能是葡萄糖C-6 位連接的糖變?yōu)榘⒗牵?另外氫譜上MT 殘基上的兩個甲基單峰變?yōu)橐粋€，提示可能其中一個甲基上有取代，經(jīng)與文獻對照[5]，發(fā)現(xiàn)其與Julibroside J25波譜數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定為Julibroside J25。

3.3 化合物3

白色無定形粉末， 易溶于水。 Liebermann-Burchard 反應和Molish 反應均呈紫紅色。

在1H -NMR 譜高場區(qū)， 甲基質(zhì)子信號δ0.97，1.02，1.05，1.08，1.16，1.30，1.88 歸屬為苷元上7 個甲基質(zhì)子的信號；δ1.77（d）歸屬為甲基五碳糖上的甲基質(zhì)子信號。 在13C-NMR 譜上出現(xiàn)8個糖基端基碳信號：δ106.9,102.3,106.3,95.8,101.9,105.8,111.1 和100.3；并且在δ174.6 和167.7 出現(xiàn)兩個羰基信號。 同時， 將化合物3 與化合物2 進行比較，發(fā)現(xiàn)其糖端基碳數(shù)據(jù)只有δ100.3 與化合物2 的δ99.4 不一致，故推測可能C-21 糖鏈有差異，經(jīng)與文獻對照可能是C-21 MT 殘基C-6 位連接的糖變?yōu)槟咎牵?jīng)與文獻對照[4]，發(fā)現(xiàn)化合物3與Julibroside J20波譜數(shù)據(jù)基本一致， 故化合物3鑒定為Julibroside J20

3.4 化合物4

白色無定形粉末， 易溶于水。 Liebermann-Burchard 反應和Molish 反應均呈紫紅色。

在1H -NMR 譜高場區(qū)， 甲基質(zhì)子信號δ0.97，1.03，1.04，1.08，1.16，1.31，1.90 歸屬為苷元上7 個甲基質(zhì)子的信號；δ1.48（d），1.59（d），1.76（d）歸屬為三個甲基五碳糖上的甲基質(zhì)子信號。 在13C -NMR 譜上出現(xiàn)8 個糖基端基碳信號：δ106.8,103.4,107.0,95.8,101.8,105.8,111.1 和99.4；并且在δ174.5 和167.6 出現(xiàn)兩個羰基信號。 經(jīng)與文獻對照[5]，發(fā)現(xiàn)其與Prosapogenin-10 波譜數(shù)據(jù)基本一致，故化合物4 鑒定為Prosapogenin-10。

3.5 化合物5

白色無定形粉末， 易溶于水。 Liebermann-Burchard 反應和Molish 反應均呈紫紅色。

在1H -NMR 譜高場區(qū)， 甲基質(zhì)子信號δ0.93，1.00，1.05，1.08，1.16，1.87 歸屬為苷元上6個甲基質(zhì)子的信號；另一個甲基信號可能重疊在δ 1.16 上，δ1.59（d），1.77（d）歸屬為兩個甲基五碳糖上的甲基質(zhì)子信號。 在13C-NMR 譜上出現(xiàn)8 個糖基端基碳信號：δ104.9,102.2,106.3,95.7,101.8,105.8 ,111.1 和99.4；并且在δ174.5,170.1 和167.6出現(xiàn)三個羰基信號。 同時，將化合物5 與化合物4進行比較，發(fā)現(xiàn)其糖端基碳數(shù)據(jù)只有δ104.9,102.2與化合物4 的δ106.8,103.4 不一致， 故推測可能C-3 糖鏈有差異， 經(jīng)與文獻對照可能是葡萄糖2位脫氧連上乙酰胺基，并在C-6 位連接的糖由呋糖變?yōu)榘⒗牵?jīng)與文獻對照[4]，發(fā)現(xiàn)其與Julibroside J22波譜數(shù)據(jù)基本一致，故化合物5 鑒定為Julibroside J22。

3.6 化合物6

白色無定形粉末， 易溶于水。 Liebermann-Burchard 反應和Molish 反應均呈紫紅色。

在1H -NMR 譜高場區(qū)， 甲基質(zhì)子信號δ0.95，0.98，1.04，1.08，1.15，1.30,1.35 歸屬為苷元上6 個甲基質(zhì)子的信號；另一個甲基信號可能重疊在δ0.98 上，δ1.59（d），1.80（d）歸屬為兩個甲基五碳糖上的甲基質(zhì)子信號。 在13C-NMR 譜上出現(xiàn)8 個糖基端基碳信號：δ106.8,102.4,106.4,95.6,101.7,105.8,111.0 和99.4； 并且在δ174.9 和167.4 出現(xiàn)兩個羰基信號。 同時， 將化合物6 與化合物5 進行比較，發(fā)現(xiàn)其糖端基碳數(shù)據(jù)只有δ106.8 與化合物5 的δ104.9 不一致， 同時苷元上C-16 位明顯發(fā)生高場位移（δ73.9→δ24.8）,故推測可能C-3 糖鏈有差異且C-16 脫氧，經(jīng)與文獻對照[4]，發(fā)現(xiàn)其與Julibroside J26波譜數(shù)據(jù)基本一致， 故化合物6鑒定為：Julibroside J26。

總之，通過對合歡皮化學成分的系統(tǒng)研究，分離得到6 個化合物，根據(jù)理化測定、波譜數(shù)據(jù)分析等方法鑒定它們均為β－香樹脂醇型三萜皂苷。