參藿五味顆粒制備工藝及其質量標準研究

劉 明， 張美玉， 吳泳錫， 王一竹， 孫玥琦， 劉 智， 鄭 飛， 越 皓

(長春中醫藥大學，吉林省人參科學研究院，吉林 長春 130117)

參藿五味顆粒是長春中醫藥大學附屬醫院臨床驗方，由醋五味子、紅參、炙淫羊藿3味中藥組成。方中五味子醋制后酸澀收斂作用增強，善于滋養肝腎，為君藥[1-3]；人參蒸制后為紅參，其功偏溫補、補氣安神、滋陰生津，為臣藥[4-6]；淫羊藿由羊油炮制后其藥性由寒轉溫，補益腎陽、溫散寒邪、溫腎助陽為佐藥[7-10]，三藥配伍，可增強補益氣血、壯陽益腎的功效，從而起到緩解體力疲勞、提高免疫力的作用[11-16]。

課題組前期用超高壓技術對參藿五味顆粒的提取工藝進行研究，在此基礎上，本實驗對其成型工藝及質量標準進行研究，以期為今后工業化生產及保健食品申報提供理論基礎。

1 材料

1.1 儀器 Thermo U-3000型高效液相色譜儀(美國Thermo Fisher Scientific公司)；電熱恒溫鼓風干燥箱(上海精宏實驗設備有限公司)；HH-6數顯恒溫水浴鍋(常州智博瑞儀器制造有限公司)。

1.2 試劑與藥物 乳糖、淀粉、糖粉、糊精購自山東聊城華陽醫藥輔料有限公司。醋五味子、紅參、炙淫羊藿購自安徽援康中藥飲片股份有限公司，經長春中醫藥大學王淑敏教授鑒定為2020年版《中國藥典》收載品種。五味子醇甲對照品(批號110857～201815)，五味子、人參、淫羊藿對照藥材(批號110703～201933、120917～201712、121632～201502)購自中國食品藥品檢定研究院；五味子甲素、五味子乙素(批號R12O8F45508、Y26F11Y17148)對照品購自上海源葉生物科技有限公司。甲醇、乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純；水為超純水。

2 制備工藝

2.1 提取物制備 前期采用超高壓提取技術進行制備，最佳提取工藝為提取溶劑70%乙醇，提取壓力300 MPa，料液比1∶40，保壓時間5 min。

2.2 成型工藝優化

2.2.1 藥物與輔料比例 分別選擇糊精、乳糖、糖粉作為輔料，結果見表1。由此可知，藥物與糊精比例為1∶4、1∶5時顆粒成型性最好，故以糊精為輔料，兩者比例為1∶4。

表1 藥物與輔料比例考察結果

2.2.2 潤濕劑(乙醇)體積分數 表2顯示，75%乙醇制粒效果最好，故以75%為乙醇體積分數。

表2 乙醇體積分數考察結果

2.3 制備工藝 見圖1。

2.4 中試試驗 將醋五味子、紅參、炙淫羊藿進行適度破碎后，按“2.3”項下制備工藝進行3批中試試驗，結果見表3。由此可知，3批中試產品的成品率接近，印證了該制備工藝的可行性及所得成品的穩定性，并符合大生產一般要求。

表3 3批中試產品生產數據(n=3)

3 質量標準

3.1 TLC定性鑒別

3.1.1 五味子 取本品3 g，加20 mL三氯甲烷超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，加1 mL三氯甲烷溶解，即得供試品溶液；取五味子對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液；除去五味子，按處方制成陰性樣品，同法制成陰性樣品溶液；取五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲對照品適量，甲醇制成1 mg/mL對照品溶液。吸取上述4種溶液，點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(30～60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，置于254 nm紫外燈下檢視，結果見圖2。由此可知，供試品色譜在與對照藥材色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。

取上述4種溶液適量，分別點于不同來源(青島海洋化工廠、上海盛亞化工有限公司)同一硅膠GF254薄層板上，考察方法專屬性和條狀點樣，結果見圖3。

取上述4種溶液適量，分別點于高溫高濕、低溫低濕條件下同一硅膠GF254薄層板上，以考察方法耐用性，結果見圖4。

3.1.2 紅參 取本品5 g，加1 mL水攪拌均勻，再加水飽和正丁醇10 mL超聲處理30 min，取正丁醇層，加3倍量氨試液(400→1 000)，振搖，靜置分層，取正丁醇層蒸干，加1 mL甲醇溶解，作為供試品溶液；取紅參對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液；除去紅參，按處方制成陰性樣品，同法制成陰性樣品溶液；取人參皂苷Rb1、Re、Rf、Rg1對照品適量，甲醇制成2 mg/mL對照品溶液。吸取上述4種溶液，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)的下層溶液為展開劑，展開，噴10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃下加熱至斑點清晰，分別在日光、365 nm紫外燈下檢視，結果見圖5。由此可知，供試品色譜在與對照藥材色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性無干擾。

取上述4種溶液適量，分別點于不同來源(青島海洋化工廠、上海盛亞化工有限公司)同一硅膠G薄層板上，以考察方法專屬性和條狀點樣，結果見圖6。

取上述4種溶液適量，分別點于高溫高濕、低溫低濕條件下同一硅膠G薄層板上，以考察方法耐用性，結果見圖7。

3.1.3 淫羊藿 取本品0.5 g，加10 mL乙醇溫浸30 min，濾過，濾液蒸干，加1 mL乙醇溶解，作為供試品溶液；取淫羊藿對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液；除去淫羊藿，按處方制成陰性樣品，同法制成陰性樣品溶液；取淫羊藿苷對照品適量，甲醇制成1 mg/mL對照品溶液。吸取上述4種溶液適量，點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(15∶10∶10)為展開劑，展開，噴三氯化鋁試液，在365 nm紫外光燈下檢視，結果見圖8。由此可知，供試品色譜在與對照藥材色譜相應位置上顯相同熒光斑點，陰性無干擾。

取上述4種溶液適量，分別點于不同來源(青島海洋化工廠、上海盛亞化工有限公司)同一硅膠G薄層板上，以考察方法專屬性和條狀點樣，結果見圖9。

取上述4種溶液適量，分別點于高溫高濕、低溫低濕條件下同一硅膠G薄層板上，以考察方法耐用性，結果見圖10。

3.2 檢查 按2020年版《中國藥典》規定，進行水分、裝量差異、粒度、微生物限度檢查，結果見表4，可知均符合相關要求。

3.3 含量測定

3.3.1 色譜條件 Thermo Scientific Syncronis C18反相色譜柱(150 mm×3.0 mm，5 μm)；流動相乙腈(A)-水(B)，梯度洗脫，程序見表5；體積流量0.3 mL/min；柱溫30 ℃；檢測波長217 nm；進樣量10 μL。

表4 顆粒檢查結果

表5 梯度洗脫程序

3.3.2 對照品溶液 精密稱取各對照品適量，置于量瓶中，甲醇定容，即得(含五味子醇甲10.20 μg/mL、五味子甲素4.95 μg/mL、五味子乙素6.50 μg/mL)。

3.3.3 供試品溶液 精密稱取本品0.25 g，置于20 mL量瓶中，精密加入18 mL甲醇，超聲處理20 min，放冷，甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

3.3.4 陰性樣品溶液 按處方制備不含五味子的陰性樣品，按“3.3.3”項下方法制備，即得。

3.3.5 專屬性試驗 精密吸取對照品、供試品、陰性樣品溶液適量，在“3.3.1”項色譜條件下進樣測定，結果見圖11。由此可知，分離度符合要求，陰性無干擾。

3.3.6 線性關系考察 精密吸取“3.3.2”項下對照品溶液1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0、12 μL，在“3.3.1”項色譜條件下進樣測定。以溶液質量濃度為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)進行回歸，結果見表6，可知各成分在各自范圍內線性關系良好。

表6 各成分線性關系

3.3.7 穩定性試驗 取同一份供試品溶液，于0、2、4、8、12、24 h在“3.3.1”項色譜條件下進樣測定，測得五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素峰面積RSD分別為0.14%、0.06%、0.01%，表明溶液在24 h內穩定性良好。

3.3.8 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 μL，在“3.3.1”項色譜條件下進樣測定6次，測得五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素峰面積RSD分別為0.86%、2.64%、1.94%，表明儀器精密度良好。

3.3.9 重復性試驗 精密稱取同一批本品約0.25 g，共6份，按“3.3.3”項下方法制備供試品溶液，在“3.3.1”項色譜條件下進樣測定，測得五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素峰面積RSD分別為1.68%、1.24%、1.39%，表明該方法重復性良好。

3.3.10 加樣回收率 取各成分含量已知的本品約0.2 g，加入對照品溶液(五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素質量濃度分別為2.598、0.412、0.510 mg/mL)，置于50 mL量瓶中，精密加入48 mL甲醇，超聲處理20 min，放冷，甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，在“3.3.1”項色譜條件下進樣測定，計算回收率，見表7。

表7 各成分加樣回收率試驗結果(n=6)

3.3.11 中試產品含量測定 取中試產品3批，每批5 g，按“3.3.3”項下方法制備供試品溶液，在“3.3.1”項色譜條件下進樣測定，計算含量，見表8，可知均符合2020年版《中國藥典》標準。

表8 各成分含量測定結果(mg/g，n=3)

4 討論

4.1 檢測波長選擇 本實驗進行全波長掃描時發現，五味子醇甲在217 nm處有較大吸收。由于五味子甲素、五味子乙素最大吸收波長五味子醇甲其相差不大[17-19]，故確定兩者檢測波長也為217 nm。

4.2 中試生產 為了保證生產工藝的可行性，本實驗對參藿五味顆粒進行3批中試生產，以實際成品率為評價指標，考察其制備生產工藝中各環節及參數。結果，該工藝穩定可行，適合工業化生產，所制備的成品符合相關質量標準要求。

5 結論

本實驗確定了參藿五味顆粒的制備工藝，并進行3批中試生產，發現該工藝穩定性良好。同時，建立了參藿五味顆粒質量標準，發現TLC法能清晰分辨出各藥材特征斑點，而HPLC法簡便快速，重復性好，結果準確可靠，可為今后該制劑工業化生產及保健食品申報提供理論依據。