孕婦血清IgG型抗A(B)抗體效價聯合新生兒網織紅細胞水平在新生兒溶血病診斷中的應用價值

黃 進，吳海燕，汪光斌

新生兒溶血病(hemolytic disease of newborn， HDN)是因母體與新生兒血型不合導致的溶血，母體產生抗體后通過胎盤輸入胎兒體內，引起胎兒紅細胞破壞，以ABO溶血較為常見。HDN可引起患兒貧血、黃疸、肝脾大、水腫等癥狀，嚴重者可導致神經系統后遺癥或死亡[1]。目前HDN的常規治療以補液、藍光照射、靜脈注射免疫球蛋白等為主，嚴重者需要接受換血治療[2]。早期預測HDN的發生有助于臨床早期給予積極的治療，對患兒預后有益。血清IgG抗A(B)抗體是紅細胞膜上抗原簇誘導產生的抗體，可形成免疫性復合物，誘導紅細胞膜的破壞、溶解，與HDN的發生密切相關[3]。網織紅細胞是外周血中尚未成熟的紅細胞，溶血發生時，骨髓造血細胞代償性增生，導致血液循環中網織紅細胞增多，因此在HDN早期網織紅細胞水平會升高[4]。既往研究只針對單一指標，而二者聯合檢測的研究報道較少，故本研究探討孕婦血清IgG型抗A(B)抗體效價聯合新生兒網織紅細胞水平檢測在HDN診斷中的應用價值。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取2021年1月—2022年1月在我院進行全程產檢的O型血孕婦270例，年齡21～40(29.92±4.11)歲；胎齡37～41(39.20±1.21)周；配偶血型A型105例，B型91例，AB型74例。納入標準：單胎妊娠；配偶ABO血型為A型、B型或AB型；夫妻Rh血型均為陽性；孕婦無輸血史；孕婦及家屬知情同意。排除標準：有妊娠高血壓綜合征等并發癥；合并有肝腎功能障礙、惡性腫瘤、血液系統疾病等嚴重疾病。

1.2IgG型抗A(B)抗體效價檢查 采用微柱凝膠法檢測孕婦IgG型抗A(B)抗體效價。入院后當日或次日清晨抽取孕婦空腹狀態下靜脈血標本3 ml，置于EDTA抗凝管，離心處理，轉速3000 r/min，離心10 min，取上層血清50 μl，加入巰基乙醇50 μl。充分混勻后密封放置于37 ℃水浴，充分破壞IgM抗體。吸取經2-ME處理后的血清，加入生理鹽水稀釋，稀釋度分別為1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1024、1∶2048，采用微柱凝膠抗人球蛋白檢測卡檢測IgG抗體效價，采用DiaMed公司的空白微柱，將生理鹽水稀釋的血清加入微柱孔，25 ℃孵育30 min，離心、洗滌，加入50 μl MASPAT抗人IgG，加入指示細胞，震蕩、離心后觀察結果。將效價≥1∶64定義為陽性。

1.3網織紅細胞水平檢查 于新生兒娩出后次日采集新生兒末梢血標本檢測網織紅細胞水平，取試管加入堿性染料2滴，加入新鮮全血2滴混勻，室溫放置15 min，取染色血標本1滴制成薄血涂片，自然干燥后于顯微鏡低倍鏡下選擇紅細胞分布均勻、著色好的部位。將Miller窺盤放置于目鏡內，在Miller窺盤的小格A內計數成熟紅細胞，在大格B內計數網織紅細胞。

2 結果

2.1HDN發生情況 270例新生兒中，最終確診HDN 22例，發生率為8.15%。HDN組和非HDN組產婦年齡、新生兒胎齡、性別、出生體質量、出生時C反應蛋白、白細胞、中性粒細胞、總膽紅素、血紅蛋白水平等比較差異無統計學意義(P>0.05)；HDN組出生時網織紅細胞水平高于非HDN組(P<0.01)。見表1。

表1 發生和未發生HDN新生兒一般資料比較

2.2不同血清IgG型抗A(B)抗體效價產婦HDN發生情況比較 IgG型抗A(B)抗體效價<1∶64、1∶64、1∶128、≥1∶256的產婦HDN發生率分別為2.22%(4/180)、12.50%(7/56)、27.27%(6/22)、41.67%(5/12)。IgG型抗A(B)抗體效價<1∶64的產婦HDN發生率低于IgG型抗A(B)抗體效價1∶64、1∶128和≥1∶256的產婦(P<0.05)；IgG型抗A(B)抗體效價1∶64、1∶128和≥1∶256的產婦HDN發生率比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.3IgG型抗A(B)抗體陽性的影響因素 經產婦IgG型抗A(B)抗體陽性率高于初產婦(P<0.05)；年齡≥30歲孕婦IgG型抗A(B)抗體陽性率高于年齡<30歲孕婦(P<0.01)；不同體質量指數、母-父血型組孕婦IgG型抗A(B)抗體陽性率比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 孕婦IgG型抗A(B)抗體陽性的影響因素[例(%)]

2.4HDN發生的影響因素 不同產次、年齡、體質量指數及母-父血型產婦HDN發生率比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 HDN發生的影響因素分析[例(%)]

2.5IgG型抗A(B)抗體效價聯合網織紅細胞水平預測HDN的價值 IgG型抗A(B)抗體效價聯合網織紅細胞水平預測HDN的ROC曲線下面積為0.981，明顯大于二者單獨預測的0.764[IgG型抗A(B)抗體效價]和0.876(網織紅細胞水平)，差異有統計學意義(P<0.05)，其預測HDN的敏感度和特異度分別為91.00%和96.00%，見圖1。

圖1 IgG型抗A(B)抗體效價聯合網織紅細胞水平預測HDN價值的ROC曲線

3 討論

HDN屬于同種免疫性溶血性疾病，輕癥者癥狀不明顯或僅出現黃疸，嚴重者可導致中樞神經系統永久性損傷[5]。分析原因，由于溶血發生后過量的紅細胞被破壞，產生大量的膽紅素等代謝產物，而新生兒肝臟功能尚不成熟，不能及時將代謝產物排出體外，可引起高膽紅素血癥。而血液中膽紅素水平過高時，會沉積在腦干、基底核等中樞神經系統重要部位，損傷神經細胞[6]。本研究發現，270例O型血孕婦中確診HDN 22例，發生率為8.15%。提示HDN在臨床中比較常見。

HDN的發生機制與抗原抗體反應有關，胎兒從父體得到母體沒有的紅細胞抗原，經胎盤進入母體血液循環，誘導母體產生IgG類抗體。IgG類抗體通過胎盤進入胎兒體內，引起胎兒紅細胞發生抗原抗體反應而遭到破壞[7]。鄧虹艷等[8]研究認為，隨著孕婦血清IgG抗A(B)抗體效價的升高，HDN的發生率隨之增高，本研究結果與其報道一致。有報道認為，與初產婦相比，經產婦HDN的發生風險更高[9]。本研究還發現，IgG型抗A(B)抗體陰性孕婦HDN發生率明顯低于IgG型抗A(B)抗體陽性孕婦。經產婦IgG型抗A(B)抗體陽性率明顯高于初產婦，年齡≥30歲孕婦IgG型抗A(B)抗體陽性率明顯高于年齡<30歲孕婦。提示妊娠次數、孕婦年齡與血清IgG抗A(B)抗體效價具有一定的相關性，也可能與HDN的發生有關。這可能是由于每次妊娠結束，胎盤絨毛膜受損，胎兒紅細胞進入母體血液循環中，并刺激其產生抗體，而多次妊娠可受到抗原的反復刺激，導致IgG類抗體水平較高，引起胎兒紅細胞抗原抗體反應更加嚴重[10-11]。對于本研究中得出的高齡產婦血清IgG抗A(B)抗體陽性率更高的結果，推測可能與高齡產婦機體免疫功能較差、接觸抗原的機會較多有關，但目前有關年齡對血清IgG型抗A(B)抗體陽性率影響的相關報道較少，確切機制尚有待于進一步研究闡釋。

網織紅細胞是反映骨髓造血能力的常規指標，臨床常用于貧血、骨髓抑制后造血功能的評估[12]。有研究發現，當HDN發生時，其網織紅細胞計數有所升高[13]。本研究發現，HDN患兒出生時網織紅細胞水平明顯高于非HDN患兒。這是由于溶血發生時，可導致骨髓造血細胞代償性增生，未成熟細胞參與血液循環，從而引起血中網織紅細胞水平升高[14-15]。

本研究采用ROC曲線分析發現，IgG型抗A(B)抗體效價聯合網織紅細胞水平預測HDN的ROC曲線下面積高于二者單獨預測，其預測HDN的敏感度和特異度分別為91.00%和96.00%。提示IgG型抗A(B)抗體效價監測聯合新生兒網織紅細胞水平檢測有助于預測HDN，具有較高的敏感度和特異度。在今后的臨床工作中，應對O型血孕婦進行IgG型抗A(B)抗體效價監測，并對新生兒進行網織紅細胞水平檢測，以便及早發現HDN風險，并及時處理。

綜上所述，IgG型抗A(B)抗體效價監測聯合新生兒網織紅細胞水平檢測有助于預測HDN，同時IgG型抗A(B)抗體效價與孕婦年齡、產次有關。