牛奶中黃曲霉毒素M1殘留檢測技術的研究進展

高寶龍，范春剛，王 震，鄭瑋麗，王妙姝,2，楊 賽

（河北新希望天香乳業有限公司，河北保定 072150；2.河北省益生功能性乳制品技術創新中心，河北保定 072150）

黃曲霉毒素是由真菌類生物所產生的一種代謝產物，在人們生活中比較常見[1]。人們食用含有黃曲霉毒素的食物，毒素便會在身體中逐漸積累，進而威脅人體健康，其主要體現在：①對人類以及動物的組織器官產生損傷，進而抑制免疫功能；②對人類以及動物的肝、胃、腎等致畸、致癌、致突變而引發癌的發生等；③對于嬰幼兒的健康也會產生影響，嬰幼兒的一些解毒器官尚未發育完善，如果食用的乳汁或奶粉等食品中含有黃曲霉素殘留，將嚴重威脅嬰幼兒健康[2]。

黃曲霉毒素M1有時也在原料奶中出現，但是在牛奶中的含量遠遠低于其他食品中的含量，如果不及時排查原因降低其風險也會對消費者造成一定潛在威脅。牛奶中黃曲霉毒素的產生主要為奶牛采食發霉變質飼料（霉變飼料黃曲霉毒素以黃曲霉毒素B1形式存在）后，體內的飼料會發生轉化，黃曲霉毒素由B1形式轉化為另一種黃曲霉毒素M1形式并隨奶牛產奶而進入牛奶及奶制品當中[3]。因此在奶牛飼喂過程中需要保證飼料的質量及品質，對消費者負責。

隨著人們生活水平的提高，牛奶在人們的飲食結構中占據非常重要的地位，人們對于健康的重視度也越來越高，因此為了有效保證牛奶的食品安全，必須建立起有效的黃曲霉毒素M1殘留檢測方法，從國家標準來看，牛奶中黃曲霉毒素M1的最大允許量為0.5 μg/kg，而河北新希望天香乳業有限公司企業內部標準牛奶中黃曲霉毒素M1的最大允許量為0.2 μg/kg[4]。目前有關牛奶中黃曲霉毒素M1殘留檢測技術有金標試紙法、原位衍生熒光法、液相色譜法電子鼻法和光學免疫傳感器法。

1 牛奶中黃曲霉毒素M1殘留的檢測技術

1.1 金標試紙法

金標試紙法是一種快速檢測方法，其原理是基于抗體抗原結合反應，因其檢測方法快速而受到企業的青睞，也成為企業檢測牛奶中黃曲霉毒素M1殘留檢測的主要技術之一。企業使用的試紙條應用競爭抑制免疫層析的原理，只需在商品化的檢驗試劑盒上觀察結果，操作簡便、快速，并且不受場地條件的約束，操作過程中不需其他儀器設備的輔助，已成為一種應用最為廣泛和發展最為成熟的生物檢測與分析方法，同時也在研究制造人工抗體，提升金標試紙法的靈敏性和穩定性，進一步擴大金標試紙法在檢測牛奶中黃曲霉毒素M1殘留中的應用。

1.2 原位衍生熒光法

黃曲霉毒素具有熒光特性，根據其熒光特性在365 nm波長紫外光激發下，G族黃曲霉毒素在450 nm波長處為黃綠色熒光，B族黃曲霉毒素發射波長425 nm處為藍色熒光，這是檢測黃曲霉毒素的基本原理之一。但是此方法需要大型精密儀器，成本相對較高，同時也需要專業性要求高的檢測人員。由于檢測時間相對較長，很難滿足現場快速檢測需求[5]。利用黃曲霉毒素基線平穩、熒光信號強的特性，在儀器內對黃曲霉毒素進行原位光化學衍生，增強黃曲霉毒素的熒光效應，提高檢測靈敏度，將光化學衍生模塊與檢測器集成于一體，儀器檢測時間為10 s，縮短了檢測時間，簡化了檢測步驟，大大提高了檢測效率。

1.3 液相色譜法

液相色譜法具有相對準確性好、靈敏度高的特性，因而得到業內的廣泛認可。液相色譜法根據溶解度及吸附作用的不同，采用高壓輸液系統，將不同極性的緩沖液及溶劑泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內分離，將目標化合物從被檢測的樣品中完全提取出來，進而利用熒光檢測計在一定的波長條件下對食品中黃曲霉毒素的含量進行測定，以達到檢測黃曲霉毒素殘留的目的。根據前處理的不同，基本分為液液萃取、多功能凈化、C18硅膠柱純化、免疫親和柱純化。液相色譜法可以做到高提取率，高純化，因除去了內源干擾，可以發揮出色譜準確定性定量的優勢。

1.4 電子鼻法

電子鼻是一種電子感官儀，由傳感系統和自動化識別系統兩大系統組成，也是近年來新興的一種檢測方法。其將物理、神經、數學、材料以及生理等方面的理論運用到一起，建立一種識別氣味的數學模型，這樣可以通過快速的識別復雜氣味、氣體來檢測霉變食物。該法是間接檢測黃曲霉毒素的一種方法，即檢測受黃曲霉毒素污染后一些揮發性物質的改變，比如烷烴、芳香烴、酮、醛類物質，而不是直接檢測黃曲霉毒素。傳感器對不同氣味響應值有差異，利用對特征性氣味感知而檢測這些物質的變化，然后建立偏最小二乘法判別分析等數學方法[6]。如果要檢測牛奶中黃曲霉毒素殘留也可利用電子鼻法，但是由于牛奶中黃曲霉含量相對較低，因此檢測結果準確度較其他方法也相對低一些。

1.5 光學免疫傳感器法

近來新興起的利用傳感器檢測的方法-光學免疫傳感器法是一種非標記光學檢測法，具體原理是通過光敏元件利用光學對生物分子（黃曲霉毒素）產生的光學信號來識別其變化，然后進一步通過檢測免疫反應來進行確認，其中光敏元件是重要的元件組成部分[7]。也可利用傳感器（生物傳感器、酶傳感器）與電化學方法相結合來檢測生物分子（黃曲霉毒素），再通過分析樣品與傳感器響應之間的線性關系得出檢測結果。此方法檢測下限低、相對簡便快速，但也會受到活性保留程度、生物分子固定量等因素的影響，使得生物傳感器的制備技術不成熟，未來還需再做進一步改善。

2 結語

總之隨著國際食品貿易的日益擴大，人們需求量和消費能力不斷提高，奶制品市場消費也隨之擴大，因此為人類提供健康、營養、鮮活的奶制品就顯得尤為重要。①奶牛養殖業從業主體應當加強學習行業內先進的養殖技術，加強對奶牛飼養過程中飼料質量的把控和預防，規范奶牛養殖過程管理，從源頭減少牛奶中黃曲霉毒素含量[8]，從而保證奶產品的安全性。②企業以及科研機構仍要持續的對黃曲霉毒素的檢測進行研究。以上幾種黃曲霉毒素M1殘留的檢測技術在該領域內有著很大的應用價值和發展前景，但是這幾種方法各自有不足之處。因此，新型黃曲霉毒素殘留的檢測技術會取代原來傳統的檢測技術，在該領域發揮更大的作用。