高粱秸稈栽培紫丁香蘑技術探索

蔣洪久，李朝云，黃億，黃旋，王蕾，唐平華

（仁懷醬香白酒科研所，564500，貴州仁懷）

紫丁香蘑（Lepista nuda）又名紫晶蘑、裸口蘑，在真菌分類地位屬于擔子菌亞門、層菌綱、傘菌目、白蘑科、香蘑屬。紫丁香蘑的傘肉鮮嫩甜美，有彈性，菇香濃郁，口感獨特，子實體中含有人體必需的氨基酸、礦質元素及維生素，經常食用具有增強機體免疫力、抗炎抑菌、抗癌、抗氧化等多種功效[1]。紫丁香蘑作為中低溫型藥食皆用的名貴野生真菌，具有較高的研究開發價值，但是目前為止主要來源為野外采集，其天然資源有限，且質量不能保證，在國內市場上極缺，市場潛力大，產業化前景好。不少研究者成功培養了紫丁香蘑液體菌種、栽培種，但是在生產中很少出菇或不出菇，種植技術難度大，經濟效益低，無法進行產業化推廣。

筆者在貴州省仁懷市當地采集野生紫丁香蘑進行形態學和分子生物學種屬鑒定，分離得到純培養菌株，采用液體和固體菌種相結合的方法來制備紫丁香蘑栽培種，利用高粱秸稈、牛糞為主料來種植紫丁香蘑，既解決了農村高粱秸稈的出路問題和牛糞污染環境的問題，提高了種植業、畜牧業副產品的附加值，又建立了一套快速而有效的紫丁香蘑栽培技術，為紫丁香蘑的人工馴化栽培提供參考。

1 材料與方法

1.1 母種培養及鑒定

采集當地野生新鮮紫丁香蘑子實體，采用組織分離法提取無菌子實體放在PDA 培養基上，于25 ℃下培養大約10 d 獲得母種，于4～6 ℃冰箱中保存備用。ITS 序列分析采用引物ITS1（上游引物）：5′→3′TCCGTAGGTGAACCTGCGG；ITS4（下游引物）：5′ →3′TCCTCCGCTTATTGATATGC 。送生工生物工程（上海）有限公司進行測序鑒定[2]。

1.2 液體菌種培養

挑取3～5 塊長勢好的母種放入裝有200 mL 加富PDA 液體培養基的錐形瓶中。加富PDA 液體培養基配方：馬鈴薯300 g，酵母粉2 g，豆胨1 g，葡萄糖15 g，硫酸鎂0.3 g，磷酸二氫鉀0.5 g，加水定容至1 000 mL 。pH 值為7.0。在恒溫搖床溫度25 ℃、轉速150 r/min 條件下培養[3-4]。

1.3 栽培種制備

選用650 mL 組培瓶，內置大半瓶小麥固體培養基。小麥培養基配方（質量）：小麥98%，碳酸鈣1%，石膏1%。吸取8～12 mL 液體菌種轉接到高溫滅菌后的小麥固體培養基，小麥培養基充分搖勻，在溫度25 ℃的黑暗環境下培養。

1.4 出菇管理

栽培料按以下質量百分比堆積發酵制成：高粱秸稈50%～60%，牛糞35%～50%，過磷酸鈣0.5%～1.5%，碳酸氫銨0.5%～1.5%，石膏0.5%～2%，石灰0.5%～1.5%。栽培場地要求畦寬1 m，高10 cm，畦間距40 cm，畦上鋪料8～12 cm。將紫丁香蘑栽培種撒播在栽培料表層，菌種使用量0.5 kg/m2，播種后料面蓋上地膜保溫保濕發菌，菌絲基本長滿栽培料表層時即可蓋土，保持適宜的濕度、溫度、光照培育出菇。

1.5 營養成分指標

選取新鮮紫丁香蘑子實體烘干打磨后留樣備用。蛋白質檢測采用GB5009.5—2016《食品安全國家標準食品中蛋白質的測定》，粗多糖檢測采用NY/T1676—2008《食用菌中粗多糖含量的測定》，氨基酸檢測采用GB5009.124—2016 《食品安全國家標準 食品中氨基酸的測定》，粗脂肪檢測采用GB5009.6—2016《食品安全國家標準 食品中脂肪的測定》。[5]

2 結果與分析

2.1 母種培養及鑒定結果

采集紫丁香蘑菌蓋未開散的子實體，在子實體表面擦拭少量75%酒精消毒后，掰開挑取小塊無菌子實體在PDA 培養基上25 ℃下培養10 d 左右，即菌絲長滿平板，呈淡紫色，輻射狀生長，形成大量氣生菌絲。通過ITS 序列測定，其ITS 序列長度594 bp，將獲得的紫丁香蘑ITS 序列與NCBI 的GenBank 數據庫進行BLAST 檢索比對，ITS 序列與基因庫中的L.nuda txid64659 菌株的序列相似性高達99.66%，結合形態學和分子鑒定，將分離得到的菌株鑒定為紫丁香蘑。

2.2 液體菌種培養結果

紫丁香蘑母種在加富PDA 液體培養基恒溫搖床溫度25℃、轉速150 r/min 條件下，2～3 d 小塊母種上長滿菌絲，4～5 d 開始逐漸增多小菌絲球，培養8～10 d出現大量菌絲球，11 d 過后菌絲球逐漸變紫，菌絲開始老化。選用8～10 d 指數生長期的液體菌種接種到栽培培養基上最佳。

2.3 栽培種制備結果

吸取8～12 mL 液體菌種接種到小麥固體培養基，在溫度25 ℃下培養5～7 d，待表層培養基大部分長滿菌絲開始搖瓶，使長有菌絲的小麥顆粒充分混勻在整個培養瓶中，菌絲繼續培養10 d 左右，菌絲滿瓶即可使用。

2.4 出菇結果

紫丁香蘑小麥栽培種撒播在栽培料上2～5 d，菌絲開始萌發并開始吃料，12～15 d 菌絲基本長滿基料表層即可蓋土，大棚土粒要進行消毒處理，以避免受到雜菌污染。覆土后保持溫度在15～27 ℃為宜，促進菌絲生長。超過30 ℃菌絲會老化、死亡，在栽培中要避開高溫[6];溫度低于10 ℃菌絲生長顯著減慢。筆者在10 月中旬基料表層長滿菌絲蓋土后，在低海拔500 多m 的蔬菜大棚試驗地，11 月中旬紫丁香蘑開始出菇，平均鮮菇產量在1.75 kg/m2;但在高海拔900 多m 的蔬菜大棚試驗地，12 月上旬紫丁香蘑才出菇:可見適宜的溫度對于紫丁香蘑出菇很重要。

2.5 營養成分

通過對干品紫丁香蘑營養成分含量檢測，紫丁香蘑含人體必需的8 種氨基酸，分別為：纈氨酸12 849.86 mg/kg、異亮氨酸12 870.75 mg/kg、蛋氨酸3 067.18 mg/kg、色氨酸6 106.85 mg/kg、蘇氨酸12236.56 mg/kg、賴氨酸18 664.54 mg/kg、苯丙氨酸13 280.59 mg/kg、亮氨酸21 098.63 mg/kg。另外，100 g 干品紫丁香蘑含粗多糖1.87 g、脂肪0.7 g，蛋白質37.0 g 。紫丁香蘑粗多糖具有抗氧化能力，可見紫丁香蘑是一種低脂肪、高蛋白的很有開發價值的食用菌[7]。

3 結論與討論

紫丁香蘑是一種很有開發價值的食藥菌種，具有抗菌活性、抗氧化性、抗病毒及腫瘤等多種功效。筆者采用液體和固體培養基相結合的方式大大縮短了制種周期，紫丁香蘑栽培種菌絲生長均勻一致和菌齡整齊，提高了栽培種質量。利用高粱秸稈為主料栽培紫丁香蘑生長周期較短，成本低，經濟效益好，但是在栽培紫丁香蘑試驗過程中遇到蛞蝓、螨蟲等蟲害，以及鬼傘菌、胡桃肉狀菌、白色石膏霉等雜菌污染。因此，還需要進一步研究紫丁香蘑生長最佳的溫度、濕度、光照等環境條件，建立科學有效的病蟲害防治措施，才能得到產量高、菇形正、色澤好的紫丁香蘑子實體。