降鈣素原檢測(cè)方法以及其臨床意義研究的進(jìn)展

唐柳琳

恭城瑤族自治縣人民醫(yī)院 廣西 桂林 542500

降鈣素原(PCT)水平可在感染(infection)性疾病患者中出現(xiàn)特異性上升趨勢(shì)，臨床多將PCT指標(biāo)用于鑒別細(xì)菌性與非細(xì)菌性、敗血癥、bacterial infection、膿毒癥、其他感染性疾病，同時(shí)PCT水平可作為臨床制定抗生素治療方案、預(yù)測(cè)疾病預(yù)后的重要指標(biāo)[1-2]。相較于其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)而言，PCT水平在診斷bacterial infection性疾病特異性較高，臨床診斷價(jià)值高，是診斷infection狀態(tài)重要的微生物學(xué)指標(biāo)[3]。PCT水平可輔助診斷多種infection性疾病、監(jiān)測(cè)病程、指導(dǎo)用藥，臨床發(fā)展PCT檢測(cè)方法迅速，可進(jìn)行快速定性[4]。

一、PCT實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法

1.免疫化學(xué)發(fā)光法

利用膠體金免疫層析技術(shù)，在標(biāo)準(zhǔn)品上結(jié)合有膠體金的綿羊克隆抗降鈣素抗體、小鼠單克隆抗降鈣素抗體，加入待檢標(biāo)本中，標(biāo)本中的PCT結(jié)合膠體金元素[5]，由此標(biāo)記的抗原抗體復(fù)合物即可結(jié)合到固定的抗降鈣素抗體上，最后形成復(fù)合物，呈現(xiàn)“三明治式”，再通過(guò)發(fā)光比色評(píng)價(jià)PCT濃度，方法特異性高，且不會(huì)產(chǎn)生交叉反應(yīng)，檢測(cè)的最低限度為10ng/L，具有10-60ng/L的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍，臨床均應(yīng)用全自動(dòng)化儀器進(jìn)行免疫熒光法、免疫化學(xué)發(fā)光法，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性高、特異性高，尤其適用于監(jiān)測(cè)重度infection患者的PCT水平[6]。

2.放射免疫學(xué)分析法

利用人工合成PCT多抗特異的連接并識(shí)別合成氨基酸PCT，該方法可將檢測(cè)的血清PCT濃度精確到4pg/ml，但檢測(cè)結(jié)果是游離、結(jié)合型PCT、CT基因相關(guān)肽前體的混合物，導(dǎo)致無(wú)法有效區(qū)分該三種物質(zhì)，雖然放射免疫學(xué)分析法檢測(cè)具有高靈敏度，但需要花費(fèi)較長(zhǎng)的檢測(cè)用時(shí)，一般在10h左右，同時(shí)檢測(cè)中存在放射性元素污染，因此在臨床應(yīng)用限制較大[7]。

3.免疫熒光法

該方法是一種定量的免疫學(xué)檢測(cè)法，通過(guò)將PCT和下鈣素結(jié)合2種鼠單克隆抗體，將抗體經(jīng)熒光標(biāo)記在管壁上固定，PCT分子與血漿分別結(jié)合2種抗體，形成“雙抗體夾心復(fù)合物”[8-9]。

4.透射免疫濁度法

該方法的原理是通過(guò)試劑的PCT單抗與樣本中的PCT產(chǎn)生抗原-抗體反應(yīng)，增加體系濁度，而標(biāo)本中的PCT濃度與濁度在一定的濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)線性正比[10-11]。臨床應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀適用于透射免疫濁度法，應(yīng)用優(yōu)勢(shì)包括可快速獲得結(jié)果、操作步驟簡(jiǎn)單、可同時(shí)大批量檢測(cè)[12]。

5.膠體金技術(shù)金標(biāo)法

在檢測(cè)孔內(nèi)加入樣本后，金標(biāo)單抗結(jié)核樣本中的PCT，獲得帶金標(biāo)記的抗原抗體復(fù)合物，復(fù)合物可在滲透作用下在反應(yīng)膜條上移動(dòng)，金標(biāo)記復(fù)合物與膜上固定的抗體結(jié)合后形成抗原抗體復(fù)合物。當(dāng)樣本PCT含量＞0.5ng/ml時(shí)呈現(xiàn)紅色反應(yīng)，而PCT濃度與顏色深淺度呈現(xiàn)正比，與標(biāo)準(zhǔn)比色板顏色進(jìn)行比對(duì)可獲得樣本PCT的濃度范圍[13-14]。檢測(cè)結(jié)果可分為四級(jí)，正常:＜0.5ng/ml；輕度上升:＞0.5ng/ml；明顯上升:＞2.0ng/ml；顯著上升:＞10.0ng/ml。金標(biāo)膠體方法可判斷顏色，方便觀察，無(wú)需檢測(cè)儀器，操作簡(jiǎn)單，快速，且結(jié)果與免疫熒光法結(jié)果一致性高，適合床邊檢測(cè)[15]。

6.凝膠層析法及高效液相色譜分析法

高效液相色譜分析法與凝膠層析法已經(jīng)被臨床研究開發(fā)，該2種方法均具有精確的檢測(cè)結(jié)果，但檢測(cè)耗時(shí)，且檢測(cè)費(fèi)用高昂、不易自動(dòng)化，因此限制了該方法在臨床的應(yīng)用[16]。

二、PCT檢測(cè)的臨床意義

1.臨床鑒別細(xì)菌性與非細(xì)菌性炎癥反應(yīng)的應(yīng)用

細(xì)菌會(huì)引起全身炎癥反應(yīng)，提高血清PCT濃度，而血清中PCT濃度在有無(wú)病毒infection、有無(wú)器官排斥、有無(wú)自身免疫性疾病等變態(tài)炎性反應(yīng)中處于較低水平，患者血清中PCT水平高低可幫助鑒別臨床非細(xì)菌與細(xì)菌性炎癥[17]。

2.敗血癥中的應(yīng)用

infection死亡率高，可引起全身infection綜合征，是ICU收治的危重癥患者死亡的主要原因，在infection時(shí)，常規(guī)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)與臨床癥狀診斷誤診風(fēng)險(xiǎn)高，相較于傳統(tǒng)檢測(cè)方法，PCT水平不受外界干擾，會(huì)影響檢測(cè)效果，相比較而言，infection初期即可出現(xiàn)PCT水平上升，診斷時(shí)準(zhǔn)確率較高，若PCT水平上升或持續(xù)維持高水平則可提示疾病預(yù)后效果較為不良，如果PCT水平迅速下降到正常水平則提示疾病預(yù)后效果良好。

3.在膿毒癥、全身嚴(yán)重bacterial infection中的應(yīng)用

ICU常見(jiàn)的嚴(yán)重疾病為膿毒癥，膿毒癥患者機(jī)體PCT水平明顯高于非infection膿毒癥患者的PCT水平，結(jié)果可幫助鑒別bacterial infection，全身infection后大部分炎癥因子會(huì)出現(xiàn)間歇性上升趨勢(shì)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析可發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重infection輔助診斷中PCT指標(biāo)可作為最佳的檢測(cè)指標(biāo)，臨床將PCT水平作為膿毒癥的早期標(biāo)志物，尤其可輔助診斷新生兒膿毒癥，PCT的敏感性、特異性均較高。

4.其他疾病中的應(yīng)用

下呼吸道infection中可將PCT水平作為抗生素治療方案的參考依據(jù)，輔助降低使用抗生素的頻率，尤其是慢阻肺急性發(fā)作、急性支氣管疾病中較為顯著，PCT檢測(cè)指標(biāo)是臨床預(yù)測(cè)急性infection心內(nèi)膜炎的唯一指標(biāo)，infection壞死胰腺時(shí)PCT水平較無(wú)菌壞死胰腺炎明顯升高，相比較之下，PCT指標(biāo)與臨床有無(wú)infection壞死性胰腺炎指標(biāo)接近，infection性休克疾病經(jīng)敏感抗生素治療后PCT水平也隨之迅速下降，說(shuō)明血清PCT水平對(duì)早期診斷bacterial infection性休克、評(píng)估疾病發(fā)展速度意義重大。

小結(jié)

PCT是無(wú)激素活性的蛋白質(zhì)，與傳統(tǒng)炎癥指標(biāo)比較而言，PCT優(yōu)勢(shì)包括敏感性、特異性高、反應(yīng)簡(jiǎn)單快速，健康人體內(nèi)PCT含量＜0.1μg/L，含量極低。當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)真菌、細(xì)菌、寄生蟲等infection情況下即可出現(xiàn)明顯上升趨勢(shì)，病毒或局部infection后PCT值僅出現(xiàn)輕微上升，對(duì)鑒別真菌、細(xì)菌、病毒性infection、評(píng)估infection嚴(yán)重程度、判斷疾病預(yù)后意義重大。體內(nèi)外的PCT水平具有良好的穩(wěn)定性，可作為新型的炎性標(biāo)志物，隨著臨床不斷發(fā)展檢測(cè)技術(shù)，PCT也在臨床應(yīng)用范圍越來(lái)越廣。