牛布魯氏菌病的臨床癥狀及其防控

劉守福 王艷 丁鵬 李強(qiáng) 劉炳偉

（1.山東省青島市西海岸新區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局六汪動物衛(wèi)生與產(chǎn)品質(zhì)量工作站，山東青島 266400；2.山東省青島市西海岸新區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，山東青島 266400）

牛布魯氏菌病是一種傳染性較強(qiáng)的疾病，也是在養(yǎng)牛場內(nèi)多發(fā)的一種疾病，被我國規(guī)定為二類傳染病[1]，本病也是感染人最多的一種人畜共患病。因此，本病可以對養(yǎng)殖業(yè)甚至公共衛(wèi)生方面帶來嚴(yán)重危害，在養(yǎng)殖中要注意本病的防控。

1 病原簡介

本病病原為布魯氏菌，是一種革蘭氏陰性短小桿菌，外觀呈卵圓形或短桿狀。無鞭毛，也不會形成芽孢和莢膜。本病根據(jù)宿主的不同可以分為羊種布魯氏菌、牛種布魯氏菌、豬種布魯氏菌、犬種布魯氏菌、綿羊布魯氏菌、森林鼠種布魯氏菌及海洋哺乳動物布魯氏菌種等7 個種[2]，不同的布魯氏菌又可以分為不同的生物型，其中牛布魯氏菌主要引起牛的感染，但對其他少數(shù)動物也具有一定的易感性。也有一些其他布魯氏菌可以感染牛。牛布魯氏菌感染后出現(xiàn)的臨床癥狀相對較輕，這是由于牛布魯氏菌的毒力相對較弱。

本病原對光和溫度比較敏感，通常陽光照射4h 就會被殺死。用巴氏消毒法也可在10min 之內(nèi)將本病原殺死。病原對常規(guī)消毒藥物敏感，應(yīng)用常規(guī)消毒藥物均可在較短時間內(nèi)使布魯氏菌滅活。

2 流行病學(xué)

牛布魯氏菌病的傳染源為發(fā)病牛和帶菌牛，病牛會通過糞便、尿液等方式向體外排毒，當(dāng)健康牛接觸到這些污染物時就可引起感染。這些糞污可對周圍環(huán)境造成污染，使周圍環(huán)境中的病原微生物長期存在，給養(yǎng)殖場造成潛在威脅。處于妊娠期的母牛發(fā)生本病后，通過流產(chǎn)胎兒、羊水和胎衣等也可向體外排毒，甚至通過乳汁也可將病原排出體外。公牛在發(fā)生本病后，其精液中也含有病原菌。此外，具有關(guān)節(jié)炎癥狀的病牛在關(guān)節(jié)液中也含有病原。本病的傳播途徑是水平傳播，主要是經(jīng)過破損的皮膚黏膜、呼吸系統(tǒng)和消化系統(tǒng)傳播。健康牛出現(xiàn)皮膚或黏膜破損后，當(dāng)其接觸到病原菌時就有可能造成本病的感染。當(dāng)病牛呼吸到具有病原菌的空氣或采食到被病原菌污染的飼料和飲水時也可造成本病感染。本病還可通過蚊蟲叮咬的方式傳播。牛布魯氏菌病的易感動物有多種，如牛、羊、豬和馬等，可以感染人。但其中牛的易感性最高，不同年齡、性別和品種的牛均有易感性，且隨著年齡的增長，易感性也隨之增大，幼齡動物易感性較低。初產(chǎn)母牛比經(jīng)產(chǎn)母牛的易感性高。發(fā)病牛通常會終身帶毒，并且能向體外排毒，當(dāng)牛自身體質(zhì)升高后，本病也可能會自行康復(fù)。

本病的發(fā)生沒有明顯的季節(jié)性，一年四季均可發(fā)生，但當(dāng)養(yǎng)殖場飼養(yǎng)管理不良時，發(fā)病率會有所升高，如環(huán)境潮濕和氣溫較低時，病牛自身免疫力下降，會造成本病發(fā)病率上升。營養(yǎng)供給不足和牛使用年限較長時也可引發(fā)本病。

3 臨床癥狀

本病的臨床癥狀可以根據(jù)不同的年齡和性別的牛所表現(xiàn)出來有些差別。通常在發(fā)病前具有一定時間的潛伏期，為0.5～6月。在潛伏期內(nèi)不表現(xiàn)出任何臨床癥狀，母牛也不會出現(xiàn)流產(chǎn)。

3.1 母牛癥狀

母牛發(fā)病后臨床最為明顯和典型的癥狀是流產(chǎn)，但也有母牛不表現(xiàn)出流產(chǎn)。母牛在出現(xiàn)流產(chǎn)前會有乳房和陰道癥狀，乳房通常表現(xiàn)為腫大明顯，陰道黏膜出現(xiàn)紅腫，且在陰道黏膜上還可見有大量結(jié)節(jié)，米粒大小，顏色為紅色。且在陰道內(nèi)有大量黏膿性分泌物，分泌物多呈現(xiàn)灰白色，在此之后，母牛會出現(xiàn)流產(chǎn)。流產(chǎn)母牛還會出現(xiàn)胎衣不下情況，從陰道內(nèi)持續(xù)排出灰色或棕紅色分泌物。經(jīng)過1～2 周后癥狀才會消失。母牛流產(chǎn)后胎兒多是死胎，即使產(chǎn)出的胎兒為活胎，但胎兒經(jīng)過一段時間也會死亡，這是由于胎兒體質(zhì)較弱，對外界環(huán)境的抵抗力較差，自身體質(zhì)發(fā)育不良導(dǎo)致的。

3.2 公牛癥狀

公牛發(fā)病后臨床癥狀為睪丸炎和附睪炎，有時還表現(xiàn)為陰莖紅腫的情況。如果病牛的發(fā)病急，則睪丸的癥狀典型，表現(xiàn)為睪丸出現(xiàn)腫大并伴隨著腫大有劇烈的痛感，而且此時病牛還可以出現(xiàn)高熱情況。

3.3 其他癥狀

有的病牛在發(fā)病后表現(xiàn)為關(guān)節(jié)炎，可見病牛前肢出現(xiàn)不同程度的水腫，還可見有滑囊炎的情況，而后表現(xiàn)為后肢腫脹。病牛在病程發(fā)展后期周身淋巴結(jié)和關(guān)節(jié)均會出現(xiàn)炎癥。

4 病理變化

剖檢發(fā)病牛可見病牛的病變主要在卵巢和子宮等部位，子宮內(nèi)可見有內(nèi)膜的充血和腫脹，子宮體肥大，子宮絨毛還可見一些壞死灶。母牛卵巢可見有硬化和發(fā)炎情況，有的病牛卵巢內(nèi)可見有不同程度的囊腫。剖檢流產(chǎn)胎兒可見胎兒具有明顯的敗血癥情況。公牛睪丸有明顯腫大，陰莖有紅腫情況，陰莖黏膜上有多樣結(jié)節(jié)，切開后可見有大量化膿點(diǎn)和壞死灶。

5 診斷方法

本病通過對臨床癥狀和病理變化的觀察，很難確診，確診需通過實(shí)驗(yàn)室檢查。目前在實(shí)驗(yàn)室主要應(yīng)用免疫學(xué)方法進(jìn)行診斷，常用的檢測方法為凝集試驗(yàn)，也可應(yīng)用補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和膠體金免疫層析技術(shù)等。除了免疫學(xué)試驗(yàn)，還可應(yīng)用分子生物學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行檢測，常用的技術(shù)為PCR 技術(shù)。

5.1 免疫學(xué)方法

在檢測本病過程中，應(yīng)用較多的免疫學(xué)方法有試管凝集法、平板凝集法和全乳環(huán)狀試驗(yàn)。試管凝集法是將病牛血清樣本用石碳酸生理鹽水按1∶12.5、1∶25、1∶50 和1∶100 稀釋后加入稀釋的抗原，混勻后37℃恒溫放置20～22h 取出放室溫靜置2 小時后判定結(jié)果。在試管內(nèi)出現(xiàn)凝集情況時可以判定為陽性，但如果結(jié)果為陰性，需在3～4 周進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)，如果結(jié)果還是陰性，才能確定牛未受到病原感染。

平板凝集是在無菌玻璃平板上用記號筆劃出邊長為4cm 的方形格子，在每個方格中均要滴加抗原和待檢血清，在室溫（22～25℃）條件下放置5～8min 后進(jìn)行觀察，如果在平板上出現(xiàn)有凝集塊或顆粒狀物質(zhì)，可以判定牛受到布魯氏菌病的感染，而且凝集塊的大小和感染病毒的數(shù)量呈正相關(guān)性。沒有出現(xiàn)凝集則可以判定結(jié)果為陰性。

全乳環(huán)狀試驗(yàn)是通過對乳樣進(jìn)行檢測，通常在檢測前要將奶牛的乳房清洗干凈，而后將疑似發(fā)病的奶牛乳汁放置于試管中，并向其中加入抗原液，充分混勻后，37℃恒溫培養(yǎng)，在1h后判定結(jié)果，通過凝集情況判定結(jié)果，從而可以確診本病。

5.2 分子生物學(xué)方法

分子生物學(xué)方法中比較常用的就是PCR 法，從發(fā)病牛的乳汁、分泌物和排泄物中取病料進(jìn)行檢測，對病死牛還可取內(nèi)臟進(jìn)行檢測，將病料加入生理鹽水后研磨，離心取上清液，對上清液進(jìn)行裂解，提取核酸，對布魯氏菌核酸的保守序列設(shè)計引物對其進(jìn)行擴(kuò)增，而后通過瓊脂糖凝膠電泳對結(jié)果進(jìn)行檢測，如果在瓊脂糖凝膠上可見有特異性大小的條帶，可確認(rèn)本病。本病具有較高的敏感性和靈敏度，而且特異性好，能對病料中的微量病原進(jìn)行檢測，但由于本方法所需要的技術(shù)和試驗(yàn)條件較高，通常不適合臨床應(yīng)用。

6 防控措施

6.1 預(yù)防措施

通過免疫接種的方法預(yù)防本病，提升牛對本病的抵抗力。這也是預(yù)防本病最有效的方法。當(dāng)前應(yīng)用較多的疫苗為布魯氏菌弱毒苗，本疫苗可通過注射或口服的方式來進(jìn)行接種，也有養(yǎng)殖場通過氣霧的方式進(jìn)行免疫。通常種牛場和奶牛場每年都應(yīng)進(jìn)行免疫接種，部分肉牛場也應(yīng)對本病疫苗進(jìn)行接種，尤其是處于疫區(qū)的肉牛場，一定要接種疫苗。在母牛分娩前和公母牛配種前也需要接種疫苗。在接種疫苗前要注意疫苗的正確運(yùn)輸和保存，確保疫苗沒有因保存不當(dāng)而出現(xiàn)失效的情況，在疫苗使用過程中也要保證接種方式正確，避免因接種方式的問題而導(dǎo)致病牛出現(xiàn)免疫失敗。由于本疫苗是細(xì)菌苗，在應(yīng)用疫苗前要避免使用抗生素藥物，否則會影響疫苗的使用效果。發(fā)病牛或處于亞健康的牛要在治療痊愈后或機(jī)體免疫力得到提升時再接種疫苗，避免牛群出現(xiàn)應(yīng)激情況，甚至使牛群造成感染。接種疫苗后的1 個月要采集牛群血液進(jìn)行抗體監(jiān)測，確定疫苗的接種效果，如果效果不理想，要及時對牛群進(jìn)行補(bǔ)免。

在接種疫苗的基礎(chǔ)上，要提升飼養(yǎng)管理水平，對牛群進(jìn)行分群飼養(yǎng)，而且在飼養(yǎng)過程中避免出現(xiàn)飼養(yǎng)密度過大，合理利用養(yǎng)殖空間。如果牛舍是全封閉，要考慮牛舍溫度、濕度和通風(fēng)情況。牛舍要保持適宜的溫濕度，保證不同季節(jié)舍內(nèi)溫度恒定，受外界氣溫影響較小，還要注意舍內(nèi)的通風(fēng)情況，及時排出舍內(nèi)有害氣體，確保舍內(nèi)空氣新鮮。但氣溫較低時要注意協(xié)調(diào)好溫度和通風(fēng)的關(guān)系，在保持溫度的情況下增加通風(fēng)。牛群要提供營養(yǎng)豐富的飼料，尤其是飼料中的各種營養(yǎng)物質(zhì)的搭配要合理，不會出現(xiàn)營養(yǎng)缺乏或營養(yǎng)過剩而引發(fā)營養(yǎng)代謝病。飼料品質(zhì)要好，尤其要避免飼料霉變，一旦飼料出現(xiàn)霉變必然會導(dǎo)致牛群免疫力下降，甚至?xí)霈F(xiàn)霉菌中毒情況，提高動物易感性。

6.2 治療措施

本病治療通常是使用鏈霉素和土霉素。鏈霉素是通過肌肉注射的方式進(jìn)行用藥，使用劑量為3 萬單位/kg 體重，每天用藥2 次，連續(xù)用藥5d。而土霉素用于拌料，應(yīng)用劑量為5～10mg/kg 體重，在飼料中混勻后給病牛采食。還可應(yīng)用合霉素和金霉素搭配治療，肌肉注射合霉素，每次注射量為900IU，每天用藥2 次，連續(xù)用藥7d。而金霉素是10～15mg/kg 體重的量拌入飼料中供病牛采食，也可起到良好的效果。