白頭翁皂苷B4調(diào)控去乙?；?對(duì)胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和放療敏感性的影響

劉磊

作者單位：濟(jì)南市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院脾胃肝膽科，山東 濟(jì)南 271100

胃癌是臨床常見(jiàn)的一種惡性腫瘤，由于胃癌細(xì)胞的遷移及侵襲能力較強(qiáng)導(dǎo)致胃癌病人預(yù)后差，目前臨床治療胃癌主要以手術(shù)、放射治療等手段為主，然而部分病人易產(chǎn)生放射耐受性導(dǎo)致其治療效果有限［1］。因而如何提高胃癌放射敏感性成為亟待解決的問(wèn)題。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)部分中藥可能成為放射增敏劑，但關(guān)于其具體作用機(jī)制尚未完全闡明［2］。相關(guān)報(bào)道指出胃癌細(xì)胞放射敏感性涉及多種基因異常表達(dá)［3］。因此積極探尋中藥藥物對(duì)胃癌細(xì)胞放射敏感性的影響及其可能作用靶點(diǎn)有助于提高放射治療效果及改善病人預(yù)后。白頭翁皂苷B4（AB4）源于白頭翁，白頭翁是一種毛茛科植物并具有清熱解毒的功效，研究表明白頭翁皂苷具有抗腫瘤作用，但白頭翁皂苷的主要活性成分AB4的抗癌活性及其作用機(jī)制尚未闡明［4-5］。研究表明去乙酰化酶6（SIRT6）在胃癌等多種腫瘤中呈低表達(dá)并可發(fā)揮抑癌作用［6-7］。但AB4是否可通過(guò)調(diào)控SIRT6從而發(fā)揮抗胃癌活性尚未可知。本研究于2018年4月至2019年10月觀察了AB4對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響，分析其對(duì)SIRT6表達(dá)的調(diào)控作用，并進(jìn)一步探究了其對(duì)胃癌細(xì)胞放射敏感性的影響，為臨床治療胃癌藥物的研發(fā)提供了理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑人正常胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1、人胃癌細(xì)胞HGC-27購(gòu)自美國(guó)ATCC細(xì)胞庫(kù)；AB4購(gòu)自上海鈺博生物科技有限公司；杜氏改良培養(yǎng)基（DMEM）購(gòu)自美國(guó)Hyclone公司；Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑盒購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher公司；RIPA裂解液、二喹啉甲酸（BCA）蛋白濃度測(cè)定試劑盒購(gòu)自陜西碧云天生物工程有限公司；SIRT6小干擾RNA（si-SIRT6）、亂序無(wú)意義陰性序列（si-NC）購(gòu)自廣州銳博生物科技有限公司；甲基噻唑基四唑（MTT）購(gòu)自上海澤葉生物科技有限公司；Transwell小室購(gòu)自北京優(yōu)尼康生物科技有限公司；兔抗人SIRT6抗體購(gòu)自美國(guó)Abcam公司；小鼠抗人DNA激活蛋白激酶催化亞基（DNA-PKcs）、DNA雙鏈修復(fù)蛋白R(shí)ad51與山羊抗人DNA修復(fù)酶Ku80抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司；兔抗人基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）抗體購(gòu)自上?？泼羯锟萍加邢薰?；驢抗山羊、山羊抗鼠以及山羊抗兔IgG二抗購(gòu)自碧云天公司。

1.2 方法

1.2.1 藥物處理 取GES-1細(xì)胞與HGC-27細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，分別用不同濃度（25、50、100μmol/L）的AB4處理24 h［8］，分別命名為AB4 25μmol/L組、AB4 50μmol/L組、AB4 100 μmol/L組。同時(shí)將未進(jìn)行藥物處理的細(xì)胞記作NC組。通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞存活率，選取白頭翁皂苷B4適宜濃度進(jìn)行后續(xù)研究。

1.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染與分組 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HGC-27細(xì)胞接種于24孔板，AB4 100μmol/L處理24 h后經(jīng)0，2，4，6，8 Gy照射劑量（Co60醫(yī)療裝置）進(jìn)行處理12 h，記作IR+AB4 100μmol/L組，同時(shí)將單獨(dú)照射組作為IR組。參照Lipofectamine2000說(shuō)明書(shū)分別將si-NC、si-SIRT6轉(zhuǎn)染至HGC-27細(xì)胞48 h，使用含有100μmol/L的AB4處 理24 h，分 別 記 作AB4 100 μmol/L+si-NC組、AB4 100μmol/L+si-SIRT6組。采用不同照射劑量處理AB4 100μmol/L+si-NC組、AB4 100μmol/L+si-SIRT6組細(xì)胞12 h，分 別記作IR+AB4 100μmol/L+si-NC組、IR+AB4 100μmol/L+si-SIRT6組。

1.2.3 MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖 收集各組細(xì)胞以3×103個(gè)/孔接種至96孔板，每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。于干預(yù)48 h后每孔加入20μL 5 g/L的MTT溶液，室溫條件下孵育4 h，棄上清液，加入150μL二甲基亞砜/孔，振蕩10 min，上多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)490 nm波長(zhǎng)處各孔吸光度值，計(jì)算細(xì)胞存活率。

1.2.4 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移與侵襲 取NC組、AB4 25μmol/L組、AB4 100μmol/L+si-NC組、AB4 100μmol/L+si-SIRT6組對(duì)數(shù)期HGC-27細(xì)胞分別接種至不含胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，制成5×104個(gè)/升的細(xì)胞懸液，按照每孔200μL接種至預(yù)先用Matrigel基質(zhì)膠包被的Transwell小室上室中，另取600μL完全培養(yǎng)基加至小室下室，常規(guī)培養(yǎng)24 h，棄去小室上室內(nèi)培養(yǎng)液，并用棉簽擦去上室內(nèi)未穿膜細(xì)胞，加入多聚甲醛處理細(xì)胞20 min，加磷酸緩沖鹽溶液（PBS）洗滌后用0.1%結(jié)晶紫染液染色10 min，光學(xué)顯微鏡下觀察侵襲細(xì)胞數(shù)。遷移實(shí)驗(yàn)中Transwell小室上室內(nèi)不鋪Matrigel基質(zhì)膠，其余步驟同侵襲實(shí)驗(yàn)。

1.2.5 細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞放射敏感性收 集IR組、IR+AB4 100μmol/L組、IR+AB4 100 μmol/L+si-NC組、IR+AB4 100μmol/L+si-SIRT6組對(duì)數(shù)期HGC-27細(xì)胞，按照3×104個(gè)/mL的密度接種于24孔培養(yǎng)皿，置于37℃、5%二氧化碳體積分?jǐn)?shù)、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)常規(guī)培養(yǎng)10~14 d，用PBS充分洗滌后，加入預(yù)冷的甲醇固定15 min，滴加吉姆薩染液染色30 min，于顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)大于50個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞集落數(shù)，克隆形成率（PE）=克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)×100%，細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)（SF）=照射劑量組的集落數(shù)/（照射劑量組細(xì)胞接種數(shù)×未照射組PE），同時(shí)采用多靶單擊模型模擬合細(xì)胞存活曲線，觀察細(xì)胞放射增敏比。

1.2.6 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)SIRT6、Rad51、DNAPKcs、Ku80、MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá) 分別收集各組HGC-27細(xì)胞，加入RIPA裂解液于冰上裂解30 min，通過(guò)蛋白提取試劑盒提取細(xì)胞總蛋白，BCA法進(jìn)行蛋白定量。每50μg蛋白樣液中加入5×上樣緩沖液，100℃水浴10 min使蛋白變性。十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝膠電泳，轉(zhuǎn)膜至PVDF膜，5%脫脂牛奶內(nèi)封閉1 h，TBST洗滌，將PVDF膜置于一抗稀釋液（SIRT6稀釋比1∶1 000、Rad51稀釋比1∶2 000、DNA-PKcs稀釋比1∶2 000、Ku80稀釋比1∶2 000、MMP-2稀釋比1∶1 000、MMP-9稀釋比1∶1 000），4℃孵育過(guò)夜，加TBST充分洗滌，加入二抗稀釋液（稀釋比1∶5 000），室溫孵育1 h，曝光、顯影，采用GIS-2020系統(tǒng)掃描并分析各蛋白條帶灰度值，以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）為內(nèi)參計(jì)算目的蛋白蛋白相對(duì)表達(dá)量，上述所有操作均重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以±s表示，數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布及方差齊性，以獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行兩組間比較；單因素方差分析進(jìn)行多組間比較，采用LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行多組間兩兩比較。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 白頭翁皂苷B4對(duì)人正常胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1與人胃癌細(xì)胞HGC-27存活率的影響用不同濃度的白頭翁皂苷B4處理GES-1細(xì)胞與HGC-27細(xì)胞，結(jié)果顯示，與NC組相比，AB4 25μmol/L組、AB4 50μmol/L組、AB4 100μmol/L組HGC-27細(xì)胞存活率顯著降低（P<0.05），白頭翁皂苷B4不同劑量組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），選取細(xì)胞存活率為50%左右時(shí)的白頭翁皂苷B4濃度（100 μmol/L）進(jìn)行后續(xù)研究，NC組與AB4 25μmol/L組、AB4 50μmol/L組、AB4 100μmol/L組間GES-1細(xì)胞存活率相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表1。

表1 白頭翁皂苷B4（AB4）對(duì)人正常胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1與人胃癌細(xì)胞HGC-27存活率的影響/（%，±s）

表1 白頭翁皂苷B4（AB4）對(duì)人正常胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1與人胃癌細(xì)胞HGC-27存活率的影響/（%，±s）

注：①與NC組相比，P<0.05。②與AB4 25μmol/L組相比，P<0.05。③與AB4 50μmol/L組相比，P<0.05。

組別NC組AB4 25μmol/L組AB4 50μmol/L組AB4 100μmol/L組F值P值重復(fù)次數(shù)3333 GES-1細(xì)胞存活率100.00±6.59 98.68±12.03 99.48±10.31 99.74±9.57 0.03 0.993 HGC-27細(xì)胞存活率100.01±9.57 86.57±6.58①65.45±8.45①②49.58±7.96①②③66.58<0.001

2.2 白頭翁皂苷B4對(duì)HGC-27細(xì)胞遷移及侵襲的影響相較于NC組，AB4 100μmol/L組遷移及侵襲細(xì)胞數(shù)均顯著減少（P<0.05），MMP-2、MMP-9蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著降低（P<0.05），見(jiàn)表2。

表2 白頭翁皂苷B4（AB4）對(duì)人胃癌細(xì)胞HGC-27遷移及侵襲的影響/±s

表2 白頭翁皂苷B4（AB4）對(duì)人胃癌細(xì)胞HGC-27遷移及侵襲的影響/±s

注：MMP-2為基質(zhì)金屬蛋白酶-2，MMP-9為基質(zhì)金屬蛋白酶-9。

組別NC組AB4 100μmol/L組t值P值重復(fù)次數(shù)3 3遷移細(xì)胞數(shù)98.47±8.79 43.57±6.53 15.04<0.001侵襲細(xì)胞數(shù)88.42±9.32 45.56±5.13 12.09<0.001 MMP-2蛋白0.86±0.13 0.43±0.08 8.45<0.001 MMP-9蛋白0.90±0.16 0.45±0.03 8.29<0.001

2.3 白頭翁皂苷B4對(duì)不同劑量照射下HGC-27細(xì)胞放射敏感性的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與IR組相比，IR+AB4 100μmol/L組HGC-27細(xì)胞在照射劑量為2、4、6 Gy時(shí)存活分?jǐn)?shù)顯著降低（P<0.05），增敏比為1.958，照射劑量為4 Gy時(shí)作用效果好，因而選用4 Gy用于后續(xù)研究，見(jiàn)表3，4。與IR組相比，IR+AB4 100μmol/L組HGC-27細(xì)胞中DNA修復(fù)蛋白R(shí)ad51、DNA-PKcs、Ku80的相對(duì)表達(dá)量顯著降低（P<0.05），見(jiàn)圖1，表5。

表5 兩組HGC-27細(xì)胞DNA修復(fù)蛋白相對(duì)表達(dá)量比較/±s

表5 兩組HGC-27細(xì)胞DNA修復(fù)蛋白相對(duì)表達(dá)量比較/±s

注：Rad51為DNA雙鏈修復(fù)蛋白，DNA-PKcs為DNA激活蛋白激酶催化亞基，Ku80為DNA修復(fù)酶。

組別IR組IR+AB4 100 μmol/L組t值P值重復(fù)次數(shù)3 3 Rad51蛋白0.98±0.13 0.46±0.08 10.22<0.001 DNA-PKcs蛋白1.01±0.16 0.50±0.09 8.33<0.001 Ku80蛋白0.96±0.15 0.41±0.03 10.79<0.001

圖1 HGC-27細(xì)胞DNA修復(fù)蛋白免疫印跡圖

表3 兩組不同照射劑量下人胃癌細(xì)胞HGC-27存活分?jǐn)?shù)比較/±s

表3 兩組不同照射劑量下人胃癌細(xì)胞HGC-27存活分?jǐn)?shù)比較/±s

組別IR組IR+AB4 100 μmol/L組t值P值重復(fù)次數(shù)3 3 0 Gy 100.00±3.12 100.00±2.56 0.00 1.000 2 Gy 79.95±9.16 41.62±6.59 5.88 0.004 4 Gy 46.44±5.38 9.16±1.20 11.71<0.001 6 Gy 13.97±2.05 2.37±0.24 9.73 0.001

2.4 白頭翁皂苷B4對(duì)HGC-27細(xì)胞中SIRT6表達(dá)量的影響蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示，與NC組相比，AB4 100μmol/L組HGC-27細(xì)胞中SIRT6蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著升高（0.42±0.03比1.03±0.15，t=11.96；P<0.001）。

表4 白頭翁皂苷B4（AB4）聯(lián)合照射HGC-27細(xì)胞單擊多靶模型的參數(shù)值

2.5 干擾SIRT6表達(dá)可逆轉(zhuǎn)白頭翁皂苷B4對(duì)HGC-27細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示，與AB4 100μmol/L+si-NC組相比，AB4 100μmol/L+si-SIRT6組HGC-27細(xì) 胞 中SIRT6蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著降低（P<0.05），見(jiàn)圖5、表6。提示成功降低HGC-27細(xì)胞中SIRT6蛋白表達(dá)。進(jìn)一步檢測(cè)結(jié)果顯示，相較于AB4 100μmol/L+si-NC組，AB4 100μmol/L+si-SIRT6組HGC-27細(xì)胞存活率顯著升高（P<0.05），遷移及侵襲細(xì)胞數(shù)顯著增多（P<0.05），MMP-2、MMP-9蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著升高（P<0.05），見(jiàn)圖2，表6。

表6 干擾SIRT6表達(dá)可逆轉(zhuǎn)AB4對(duì)HGC-27細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響/±s

表6 干擾SIRT6表達(dá)可逆轉(zhuǎn)AB4對(duì)HGC-27細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響/±s

注：SIRT6為去乙?；?，AB4為白頭翁皂苷B4，，MMP-2為基質(zhì)金屬蛋白酶-2，MMP-9為基質(zhì)金屬蛋白酶-9。

組別AB4 100μmol/L+si-NC組AB4 100μmol/L+si-SIRT6組t值P值重復(fù)次數(shù)33 SIRT6蛋白0.96±0.18 0.45±0.05 8.19<0.001細(xì)胞存活率/%50.12±9.13 98.15±10.47 10.37<0.001遷移細(xì)胞數(shù)/個(gè)44.25±5.52 86.47±11.16 10.17<0.001侵襲細(xì)胞數(shù)/個(gè)48.56±6.29 90.17±12.31 9.03<0.001 MMP-2蛋白0.44±0.09 0.90±0.16 7.52<0.001 MMP-9蛋白0.46±0.05 0.88±0.17 7.11<0.001

圖2 去乙?；?（SIRT6）蛋白與細(xì)胞遷移及侵襲相關(guān)蛋白質(zhì)印跡圖

2.6 干擾SIRT6表達(dá)可逆轉(zhuǎn)白頭翁皂苷B4對(duì)HGC-27細(xì)胞放射敏感性的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與IR+AB4 100μmol/L+si-NC組相比，IR+AB4 100 μmol/L+si-SIRT6組HGC-27細(xì)胞在照射劑量為2、4、6 Gy時(shí)存活分?jǐn)?shù)顯著升高（P<0.05），增敏比為0.37，見(jiàn)表7，8。進(jìn)一步檢測(cè)結(jié)果顯示，與IR+AB4 100 μmol/L+si-NC組相比，IR+AB4 100μmol/L+si-SIRT6組HGC-27細(xì)胞中Rad51、DNA-PKcs、Ku80蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著升高（P<0.05），見(jiàn)圖3，表9。

表9 各組HGC-27細(xì)胞DNA修復(fù)蛋白相對(duì)表達(dá)量比較/±s

表9 各組HGC-27細(xì)胞DNA修復(fù)蛋白相對(duì)表達(dá)量比較/±s

注：Rad51為DNA雙鏈修復(fù)蛋白，DNA-PKcs為DNA激活蛋白激酶催化亞基，Ku80為DNA修復(fù)酶。

組別IR+AB4 100μmol/L+si-NC組IR+AB4 100μmol/L+si-SIRT6組t值P值重復(fù)次數(shù)3 3 Rad51蛋白0.48±0.06 0.71±0.10 5.92<0.001 DNA-PKcs蛋白0.47±0.08 0.73±0.14 4.84<0.001 Ku80蛋白0.40±0.02 0.68±0.11 7.51<0.001

圖3 HGC-27細(xì)胞DNA修復(fù)蛋白免疫印跡圖

表7 HGC-27細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)/±s

表7 HGC-27細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)/±s

組別IR+AB4 100μmol/L+si-NC組IR+AB4 100μmol/L+si-SIRT6組t值P值重復(fù)次數(shù)3 3 0 Gy 100.00±2.24 100.00±2.81<0.001 1.000 2 Gy 44.62±5.20 82.05±8.49 6.51 0.003 4 Gy 7.94±1.13 51.83±6.11 12.23<0.001 6 Gy 1.55±0.12 11.67±1.86 9.40 0.001

3 討論

由于胃癌早期癥狀比較隱匿，大多數(shù)病人確診時(shí)已為中晚期，因此錯(cuò)過(guò)了最佳手術(shù)根治機(jī)會(huì)。隨著醫(yī)療水平的發(fā)展，放射治療成為治療胃癌的重要手段，但治療效果受到放射損傷及放射敏感性的影響，因而如何減少發(fā)生損傷并增強(qiáng)胃癌放射敏感性成為重點(diǎn)研究問(wèn)題［9］。近年來(lái)放射增敏實(shí)驗(yàn)研究主要集中于分子靶向治療，研究表明中草藥具有抗胃癌作用并可能通過(guò)調(diào)控作用靶點(diǎn)而增強(qiáng)胃癌細(xì)胞放射敏感性［10-11］。因此本研究積極探尋新型中草藥物并分析其可能作用靶點(diǎn)從而為探索新的放射增敏劑奠定理論基礎(chǔ)。

AB4可能通過(guò)上調(diào)細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)而誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡從而發(fā)揮抗癌作用［12］。研究表明白頭翁皂苷能夠通過(guò)調(diào)控相關(guān)基因表。

表8 干擾SIRT6表達(dá)與白頭翁皂苷B4聯(lián)合照射HGC-27細(xì)胞單擊多靶模型的參數(shù)值

達(dá)抑制口腔鱗癌等多種惡性腫瘤細(xì)胞增殖、遷移及侵襲，從而發(fā)揮抗癌作用［13-14］。相關(guān)報(bào)道指出AB4可減輕順鉑的腎毒性，但不會(huì)降低順鉑的抗腫瘤活性［15］。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)不同濃度的AB4處理后的胃癌細(xì)胞存活率顯著降低，提示AB4具有抑制胃癌細(xì)胞增殖的作用。研究表明上調(diào)MMP-2、MMP-9的表達(dá)可促進(jìn)胃癌細(xì)胞的遷移侵襲［16］。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)不同濃度的AB4處理后胃癌細(xì)胞的遷移及侵襲能力以及MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)水平顯著降低，提示AB4可能是通過(guò)下調(diào)MMP-2、MMP-9的表達(dá)抑制胃癌細(xì)胞的遷移及侵襲。且本研究結(jié)果表明AB4聯(lián)合放射處理可降低胃癌細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)，提高增敏比，提示AB4可增強(qiáng)胃癌細(xì)胞放射敏感性。研究表明DNA損傷修復(fù)能力是造成細(xì)胞放射敏感性的重要原因，放射治療后DNA修復(fù)蛋白R(shí)ad51、DNA-PKcs、Ku80表達(dá)水平升高可降低放射敏感性，降低Rad51、DNA-PKcs、Ku80表達(dá)水平可增強(qiáng)放射敏感性［17］。本研究結(jié)果顯示AB4聯(lián)合放射處理后胃癌細(xì)胞HGC-27中Rad51、DNA-PKcs、Ku80的表達(dá)水平明顯降低，提示AB4可通過(guò)破壞DNA損傷修復(fù)過(guò)程從而提高胃癌細(xì)胞放射敏感性。

SIRT6在卵巢癌組織中呈低表達(dá)，其低表達(dá)量與腫瘤組織浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［18］。研究表明SIRT6通過(guò)抑制JAK激酶2/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子3途徑而抑制胃癌的生長(zhǎng)［19］。相關(guān)報(bào)道指出SIRT6可抑制胰腺癌發(fā)生及發(fā)展［20］。本研究結(jié)果顯示AB4可明顯提高胃癌細(xì)胞中SIRT6的表達(dá)水平，進(jìn)一步研究結(jié)果顯示干擾SIRT6的表達(dá)可明顯降低AB4對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的抑制作用。提示AB4可能是通過(guò)上調(diào)SIRT6的表達(dá)發(fā)揮抑制胃癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲作用的。同時(shí)本研究結(jié)果顯示，干擾SIRT6的表達(dá)聯(lián)合AB4處理后經(jīng)不同劑量射線照射后，胃癌細(xì)胞HGC-27存活分?jǐn)?shù)明顯增多，增敏比明顯降低，Rad51、DNA-PKcs、Ku80的表達(dá)水平明顯升高，提示AB4可通過(guò)上調(diào)SIRT6的表達(dá)而增強(qiáng)胃癌細(xì)胞放射敏感性。

綜上所述，AB4能夠抑制胃癌細(xì)胞HGC-27增殖、遷移及侵襲并可增強(qiáng)胃癌細(xì)胞HGC-27的放射敏感性，其作用機(jī)制可能與上調(diào)SIRT6表達(dá)有關(guān)，并可能通過(guò)抑制DNA損傷修復(fù)相關(guān)蛋白表達(dá)從而發(fā)揮作用，可為AB4應(yīng)用胃癌的增敏治療提供理論依據(jù)，并可為AB4在臨床中的應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。