老年前期腦白質高信號患者髓過氧化物酶的表達

馮彩霞 王增帥 高麗芝 楊利清

1.內蒙古科技大學包頭醫學院第二附屬醫院神經內科，內蒙古 包頭 014030；

2.內蒙古科技大學包頭醫學院第二附屬醫院心血管內科，內蒙古 包頭 014030

腦白質高信號（white matter hyperintensities，WMH）的患者早期常無臨床癥狀，后期可出現認知障礙、步態障礙等。WMH 發生的具體機制尚不明確，慢性低灌注、血腦屏障通透性增加、血管內皮功能障礙、炎癥反應可能是其發病機制[1]。WMH 與大腦的退行性改變、年齡、腦血管的狹窄及腦灌注下降相關[2]。年齡每增加10 歲，WMH 的發生率可升高2 ～3 倍，80 歲以上的老年人90%存在WMH[2]。髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）可通過氧化應激修飾脂蛋白、降低一氧化氮生物利用度、誘導內皮功能障礙、損傷血管反應性以及增加斑塊易損性，參與動脈粥樣硬化的病理生理過程[3]，是卒中的炎癥標志物[4]。但關于MPO 與腦白質高信號的相關性尚未闡明。本研究旨在探討MPO與老年前期、無大動脈狹窄的腦白質高信號患者的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年9 月到2021 年1 月包頭醫學院第二附屬醫院神經內科門診及住院部的108 例老年前期WMH 患者作為WMH 組，男52 例，女56 例，年齡43 ～59 歲，平均（51.09±4.26）歲。51 例健康體檢者為對照組，男27 例，女24 例，年齡42 ～59 歲，平均（50.26±4.13）歲。兩組患者一般資料比較，差異無統計學意義（P＞ 0.05），具有可比性。WMH嚴重程度采用Fazekas 評分標準[5]，腦室周圍和深層白質兩個部分總分0 ～6 分，1 ～2 分輕度，3 ～4 分中度，5 ～6 分重度。輕度組38 例、中度組36 例、重度組34 例。WMH 組入選標準：符合2015 年中國腦小血管病診治共識中腦白質高信號的影像診斷標準[5-6]的40 ～59 歲患者。排除標準：①3 個月內新發腦梗死者；②影像學檢查提示顱內血管狹窄、頸部血管狹窄≥50%者；③感染、免疫、代謝、中毒、腦積水等其他病因導致的腦白質病變者；④有肝腎嚴重器質性疾病者。本研究獲得包頭醫學院第二附屬醫院醫學倫理委員會批準（2019 年科倫審第LW-004）。

1.2 方法

MPO 蛋白檢測：按ELISA 試劑盒步驟嚴格操作，測定血清中MPO 蛋白表達量。MPO mRNA檢測：按白細胞分離液（天津市灝洋生物制品科技有限公司）說明書步驟提取白細胞，-80 ℃保存。用TRIzol 試 劑 盒（日 本TaKaRa 公 司）提 取總RNA，反轉錄試劑盒按總RNA 1μg 為模板將RNA 反轉錄為cDNA，以cDNA 為模板進行PCR 擴增（試劑盒由美國Promega 北京分公司生產），檢測MPO 基因的相對表達量。上游引物序列：5’-TACACTTCCTGCATTGAACCTGGCT-3’，下游引物序列：5’-CCCAGATATACCCCTCACTGCTGC-3’。

1.3 統計學方法

采用SPSS 21.0 統計學軟件分析，符合正態分布的計量資料用均數±標準差（±s）表示，兩組間比較行t檢驗，三組間比較采用方差分析，三組均數間的多重比較采用最小顯著差異t檢驗，計數資料用[n（%）]表示，行χ2檢驗，相關性分析采用Pearson分析，采用ROC 曲線分析MPO 診斷WMH 的臨床效能，特異度=真陰性例數/（真陰性+假陽性）例數×100%；敏感度=真陽性例數/（真陽性+假陰性）例數×100%，P＜ 0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者MPOmRNA、MPO蛋白水平比較

WMH 組MPO mRNA、MPO 蛋白水平高于對照組，差異有統計學意義（P＜ 0.05），見表1。

表1 兩組患者MPO mRNA、MPO蛋白水平比較（x ± s）

2.2 WMH嚴重程度影響因素分析

輕度、中度、重度組之間MPO mRNA、MPO 蛋白表達量的差異有統計學意義（P＜ 0.05）。重度組MPO mRNA 表達量分別高于中度組（t=4.622，P=0.000）和 輕 度 組（t=6.816，P=0.000）；重 度組MPO 蛋白表達量分別高于中度組（t=3.093，P=0.003）和 輕 度 組（t=8.007，P=0.000），中 度 組MPO 蛋白表達量高于輕度組（t=4.946，P=0.000），差異有統計學意義（P＜ 0.05），見表2。

表2 WMH嚴重程度影響因素分析（x ± s）

2.3 MPOmRNA和MPO蛋白表達量的相關性分析及MPO蛋白的ROC曲線

Pearson 分析顯示MPO mRNA 和MPO 蛋白表達量呈正相關（r=0.637，P=0.000）。血清MPO 蛋白診斷WMH 的曲線下面積為0.680，最佳截斷值為72.29 pg/ml 時，對WMH 診斷的敏感度和特異度分別為60.20%和70.60%，見圖1。

圖1 MPO 的ROC 曲線

3 討論

WMH 的病理改變包括髓鞘脫失、少突膠質細胞受損、星形膠質細胞增殖以及血管周圍間隙擴大等[7-8]。WMH 的傳統危險因素（包括年齡、常見的血管危險因素包括原發性高血壓、糖尿病、高同型半胱氨酸、高纖維蛋白原、動脈粥樣硬化、遺傳易感性等）[2]。非傳統危險因素可能有偏頭痛、阻塞性睡眠呼吸暫停、暈厥等[9]。WMH 可以是腦小血管病的典型影像學表現之一，也可以單獨存在，單純的輕度WMH 不會出現臨床癥狀[1]。MPO 與動脈粥樣硬化及大動脈粥樣硬化型腦梗死關系緊密[4]。隨著年齡的增長，顱內大血管、小血管、穿支動脈病變往往伴隨發生，且動脈粥樣硬化的發生率亦逐年升高。為減少大動脈粥樣硬化及年齡對研究的干擾，本研究選擇了老年前期、無大動脈狹窄的WMH 患者作為研究對象，發現WMH 患者MPO mRNA 及蛋白表達水平均較正常對照組增高，且WMH 重度組MPO mRNA 及蛋白表達量均高于輕度組。血清MPO 蛋白的ROC 曲線發現，當MPO 蛋白最佳截斷值為72.29 pg/ml 時，對WMH 診斷的敏感度和特異度分別為60.20% 和70.60%。MPO 為WMH 的發生及治療提供了新的靶點。

WMH 發生的關鍵環節之一是作為中樞神經系統免疫活性細胞的小膠質細胞的激活[8]，氧化應激[1]、炎癥[1]均參與了WMH 的發生。MPO 是由兩條重鏈（55 ～64 kD）和兩條輕鏈（10 ～15 kD）組成，主要存在于單核細胞及中性粒細胞中，部分見于小膠質細胞和巨噬細胞中[10]。MPO 是連接炎癥反應與氧化應激的酶[11]，可催化氧化反應，產生大量具有細胞毒性的活性氧，降低一氧化氮生物利用度[12]、損害血管內皮功能[13]，造成組織氧化損傷，進而引起髓鞘破壞和神經傳導受損。Etwehi 等[12]提出，MPO 可以通過上調蛋白磷酸酶2A 的表達降低內皮細胞一氧化氮合酶的磷酸化，減少一氧化氮的生成，一氧化氮有引起鄰近血管平滑肌細胞舒張、擴血管的作用[14-15]。推測MPO 通過氧化應激、炎癥參與了WMH 的發生。

本研究發現，老年前期無大動脈狹窄的WMH患者，MPO mRNA 及蛋白表達量均增加，MPO 參與了WMH 的發生，且與WMH 嚴重程度相關。本研究不足之處，研究對象存在選擇偏倚，需設計嚴謹的大樣本的臨床研究加以驗證。