重慶酉陽縣山羊及人布魯氏菌抗體監測與分析

白運川，張海燕，郭秋枚，何承容，楊 柳，許國洋

(1.重慶市酉陽縣農業農村委員會，重慶 酉陽 409800；2.重慶市畜牧科學院，重慶 榮昌 402460 ;3.國家動物疫病重慶觀測實驗站，重慶 榮昌 402460)

布魯氏菌病(Brucellosis，以下簡稱布病)是由布魯氏菌屬細菌引起的一種人獸共患傳染病，易感動物主要包括牛、羊、豬，偶爾感染鹿、狗和其他哺乳類動物，也可感染人[1-2]。布魯氏菌主要包括6個種19個生物型，其中，羊種布魯氏菌有1型、2型和3型。動物感染該病后，母畜主要表現為胎膜發炎、不孕不育、流產、死胎等，頭胎流產率高達50%～80%，公畜主要出現睪丸炎、附睪炎、關節炎等癥狀[3-4]。人感染布病主要表現為發熱多汗、肝脾腫大、神經痛和關節痛，也可引起生殖障礙，同時引發全身多系統并發癥，導致喪失勞動力等[5]。世界動物衛生組織(OIE)將該病列為B 類傳染病，是必須報告疾病，而我國將其列為乙類傳染病[6]。該病流行廣泛，覆蓋面積大，已有160 多個國家和地區出現人和動物布病的發生和流行[7]，其嚴重危害養殖業發展和公共衛生安全。酉陽土家族苗族自治縣位于重慶市東南部，屬武陵山區腹地，具有豐富的資源和良好的生態優勢，為畜牧業發展提供了有利條件，其中，養羊業已成為酉陽縣支柱產業之一。近年來，重慶多個地區偶有布病流行，多數報道是關于動物單個偶發病例或是人間布病的監測[8-11]，而關于動物和人布病的長期性監測相關報道較少，且在2015 年發現酉陽縣有布病的流行趨勢，因此，本試驗針對易感羊群和風險人群開展布病的長期性監測和凈化分析，為酉陽縣布病的科學防控提供數據支撐。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 布魯氏菌虎紅平板試驗抗原，購自中國獸醫藥品監察所；布魯氏菌競爭酶聯免疫吸附法(cELISA)抗體檢測試劑盒，購自武漢科前生物股份有限公司。

1.2 樣本的采集 對酉陽縣布病易感羊群和風險人群進行抽樣調查，羊群進行頸前靜脈采血，養殖相關人員進行肘前靜脈采血，采集血液于37 ℃靜置30 min，3 000 r/min離心10 min，收集血清，-20 ℃保存備用。

1.3 布病的初篩 使用虎紅平板凝集試驗進行初篩。取30 μL布魯氏菌虎紅平板試驗抗原滴加在潔凈的載玻片上，再依次滴加血清樣本，用槍頭攪動使血清和抗原混合均勻，觀察凝集情況，并設陰性和陽性對照。結果判定：當陰性血清對照不出現凝集(-)，陽性血清對照出現凝集(+)時，則試驗成立，可以進行結果判定，否則試驗應重做；待檢血清在室溫條件下4 min內出現沙粒狀的凝集現象為陽性，出現均勻的粉紅色現象為陰性。

1.4 布病的確診 使用cELISA對初篩陽性的病例進行驗證。按照布魯氏菌cELISA抗體檢測試劑盒說明書進行操作，并對個體陽性率和群體陽性率進行統計分析。結果判定依據：抑制率(PI)≥30%判為陽性，PI<30%判為陰性。PI計算公式：PI/%=(空白對照OD450 nm-檢測樣品OD450 nm)/空白對照OD450 nm×100%。對照測定值要求：無血清空白對照OD450 nm為0.75～2.0；強陽性對照血清PI為80%～100%；陰性對照血清PI為-15%～15%。人初篩陽性樣本送重慶市疫病預防控制中心進行確診。

1.5 布病分布區域情況分析 依據布病檢測結果，分析2015—2021年布病在不同鄉鎮的累計檢出量，明確布病主要流行鄉鎮。

1.6 布病的凈化 按照農業部《高致病性禽流感等14個動物疫病防治技術規范》[12]要求，對布病陽性病例進行撲殺，根據具體情況對同群畜采取持續凈化或全群撲殺措施，統計布病陽性群體發展趨勢，分析布病凈化成效，并按照農業部《病死及病害動物無害化處理技術規范》[13]要求對撲殺的動物及污染物進行無害化處理。

2 結果

2.1 布病的初篩 通過對采集的30 472份山羊血清樣本進行檢測，發現共1 025份樣本初篩為陽性，最早出現時間為2015年；采集的1 442份人血清樣本中，22 份樣本為陽性，人感染布病最早出現時間為2017年。

2.2 布病的確診 利用cELISA對初篩陽性樣本進行檢測，發現共有853份山羊血清樣本為陽性，22份人血清樣本為陽性，結果見表1。2015—2018年羊布病檢出率呈明顯上升趨勢，2019年有所下降，2020年陽性率高達7.9%，而2020年人的布病檢出率也高達2.5%，結果見圖1。

圖1 布病陽性率分析

表1 酉陽縣 2015—2021年山羊和人布病檢測情況

2.3 布病分布區域情況分析 通過對不同鄉鎮2015—2021年期間布病陽性病例統計分析，發現板溪鎮、龍潭鎮、木葉鄉、楠木鄉、官清鄉、麻旺鎮和花田鄉累計檢出量較高，其中板溪鎮檢出量最高，共478 份陽性病例，結果見圖2。

圖2 不同鄉/鎮累計布病陽性檢出量分析

2.4 布病的凈化 通過開展羊群布病凈化，2015—2021年共對417個羊群進行監測，其中41個羊群出現陽性病例，共撲殺1 376只山羊，結果見表2；通過布病的持續凈化，布病群體陽性率整體呈下降趨勢，由40.0%(2015 年)降至3.8%(2021 年)，結果見圖3。

表2 酉陽縣2015—2021年山羊布病凈化處置情況

圖3 布病群體陽性率分析

3 討論

酉陽縣在2009—2014年間抽樣檢測中沒有發現布病陽性病例，本試驗結果顯示，自2015年發現有山羊感染布病后，每年都有新發陽性病例，2017 年首次發現人的布病陽性感染病例，山羊和人布病個體陽性率最高分別為7.9%和2.5%。2015—2021年，本課題組先后在酉陽縣13 個鄉鎮檢測出布病陽性病例，其中板溪鎮山羊累計陽性檢出量最高，共478 份陽性病例；2015—2020年山羊布病陽性率雖然在2019 年下降至2.5%，但整體呈逐年上升趨勢，盡管布病凈化同時開展，也未能有效控制疫情發展，可能與監測的區域范圍小和凈化淘汰速度慢有關；通過加大檢測范圍和力度，嚴格執行凈化撲殺，2021 年山羊布病檢出率下降至1.6%，2018—2021年群體陽性率由17.5%降至3.8%；在篩查過程中發現，感染群體數有所減少，但感染群體中個體陽性率仍然很高，導致全群撲殺的群體個數較多。對個體陽性率低的感染群體僅實施陽性病例凈化撲殺時，1個群體往往要全檢4、5 次，耗時1年才可能達到凈化標準，凈化失敗風險較大。2018年后，本課題組對經全群采樣檢測后個體陽性率高的陽性群體(經驗值5%以上)，均采取全群撲殺方式進行清除和無害化處理。此外，人感染布病具有職業特性，大部分與畜牧獸醫有關，而與年齡、性別等無關[14]。本試驗結果顯示，2017—2021年從重點人群中檢出布病陽性病例22 份(包括臨床發病和未發病的)，檢出率高達1.5%，主要包括基層養殖人員、肉羊屠宰加工人員和羊販運人員。

同時，本試驗在布病凈化過程中發現諸多制約因素，主要包括：(1)本縣山區丘陵較多、養殖區域分散且羊養殖模式多樣，開展羊布病篩查、凈化工作時，難以實現養殖群體監測和凈化的全覆蓋；(2)基層養殖人員老齡化嚴重，養殖技術缺乏，對布病認識不足，有疫情時未能及時采取科學、有效措施；(3)養殖相關人員法制意識薄弱，過度看重養殖成本，當疫情發生時存在瞞報僥幸心理，導致布病的擴散，加大人員感染布病風險。因此，因地制宜的防控措施是布病凈化的關鍵。首先，應嚴防染疫動物的輸入，杜絕染疫動物流動，防止疫情在酉陽的發生和擴散；其次，要加強宣傳培訓，提高養殖相關人員法律意識，對羊及其產品的密切接觸人員要加強生物安全知識培訓，提升自我防護水平；然后，相關部門應加強行政監督執法力度，嚴厲查處養殖、流通、屠宰等各環節的違法違規行為。同時，應做好日常監測，對布病陽性病例及時采取有效防控措施。

農業部聯合衛計委組織制定的《國家布魯氏菌病防治計劃(2016—2020 年)》[15]將全國劃分為三類區域，重慶被劃分為二類區域，二類區域劃定依據是本地有新發人間病例發生且報告發病率低于或等于1/10萬或畜間疫情未控制縣數占總縣數30%以下。依據2015—2021年布病陽性病例統計數據，酉陽縣重點人群人間布病累積發病率已達1.5%，雖然重慶屬于二類區域，但酉陽縣山羊和人的布病防控形勢依然嚴峻。盡管2021年酉陽縣布病陽性個體和群體陽性率整體均有所下降，布病凈化初步取得成效，但凈化仍然不徹底。總體來看，酉陽縣離實現凈化、根除布病的目標還有距離，還需加強布病的常態化監測與防控。