焦防風炮制工藝優化研究

李余先 張俊國

（1.吉林農業科技學院中藥學學院 吉林 132101 2.吉林省白山本苜藥業有限公司 長春 130600）

1 實驗儀器及材料

1.1 試驗材料

防風（河北福君堂藥業有限公司）、蘆丁標準品、5-O-甲基維斯阿米醇苷標準品、升麻素苷標準品、升麻素標準品、補骨脂素標準品、（標準品均為上海源葉生物科技有限公司）。

1.2 試驗儀器

炒藥機（南京海善制藥設備有限公司）、2H-200A型手提式粉碎機（西安寶正實業有限公司）、SB-5200DT型超聲波清洗機（寧波新藝超聲設備有限公司）、J-HH-6A型精密數顯恒溫水浴鍋（上海皓莊儀器有限公司）、AUW120D分析天平（日本島津）、高效液相儀器（日本島津）、SHB-IV型循環水式多用真空泵（鄭州長城科工貿有限公司）、N-1100型旋轉蒸發儀（上海愛朗儀器有限公司）、OSB-2100型水浴鍋（上海愛朗儀器有限公司）、SB-5200DT型超聲波清洗機、（寧波新藝超聲設備有限公司）、TS100恒溫振動儀（杭州瑞誠儀器有限公司）

2 方法與結果

2.1 焦防風炮制工藝優化研究

2.1.1 焦防風的制備

將凈選或切制后的防風飲片，置炒制容器中，用中火或武火加熱，炒至藥物表面呈焦黃色或焦褐色，內部顏色加深，并伴有焦香氣味。

2.1.2 HPLC法測定防風樣品中麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷）、補骨脂素的含量

2.1.2.1 色譜條件確立：色譜柱為Diamonsil C18柱（4.6mm×250 mm，5μm），流動相為乙腈-水（15∶85），檢測波長為254nm，流速為1.0mL/mim。

2.1.2.2 對照品溶液制備：用微量分析天平精密稱定0.99mg升麻素、0.72mg5-O-甲基維斯阿米醇苷、0.91mg升麻素苷、0.90mg補骨脂素，混合加入1mL的色譜甲醇制成每1mL含有3.52mg物質的標準品溶液。

2.1.2.3 樣品溶液處理：用分析天平分別精密稱定0.2500g生品防風、焦防風的細粉，各自放置在25mL具塞錐形瓶中，用移液管精密吸取10.00mL甲醇加入其中，稱定重量，水浴回流2h，靜置放涼，再稱定其重量。缺失的重量用甲醇補足，搖勻靜置，樣品圖譜見圖。

圖1 對照品（A）、生防風（B）、焦防風（C）分別在245NM波長下的色譜圖

2.1.2.4 方法學考察：線性關系考察：取2.1.2.2下的對照品溶液，按2.1.2.1的色譜條件進行測定，進樣體積分別為1、2、5、10和20 uL，進行標準曲線的繪制，升麻素苷：Y=7.063787e-007X+7.451957e-003，R2=0.9996，濃度范圍（mg/uL）0.091-0.91；升麻素：Y=5.016273e-007X+4.634783e-003，R2=0.9996，濃度范圍（mg/uL）0.099-0.99；5-O-甲基維斯阿米醇苷：Y=1.352315e-006X+7.793854e-003，R2=0.9995。

精密度實驗：精密吸取混合對照品溶液10μl，按上述色譜條件測定，選擇重復進樣6次，計算各目標化合物峰面積的RSD值，結果表明升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、補骨脂素RSD分別為1.321%、1.019%、0.984%、1.523%。

重現性實驗：取同一條件炮制的苦參樣品6份，按上述樣品處理方法將其制成供試品溶液，按上述色譜條件，分別進行進樣檢測，測得各色譜峰峰面積的RSD值，結果表明升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、補骨脂素RSD分別為0.978%、1.562%、1.041%、1.324%。

穩定性實驗：取上述樣品溶液，分別在0h、4h、8h、12h、24h，按上述液相色譜條件，分別進行進樣測定，測得各指標性成分色譜峰峰面積RSD值，結果表明升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、補骨脂素RSD分別為1.011%、1.232%、1.541%、1.421%。

加樣回收率試驗：分別精密稱取焦防風樣品3份，分別加入已精密稱定的升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、補骨脂素，按2.1.2.3方法將其制成供試品溶液，按2.1.2.1液相色譜條件測定測定含量，分別計算加樣回收率和RSD值，結果表明升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、補骨脂素RSD分別為2.011%、2.056%、1.968%、1.894%，平均加樣回收率分別100.5%、99.8%、98.7%、100.2%。

2.1.3 焦防風炮制工藝兩因素試驗

取大小均勻，色澤均一的焦防風9份，每份100g，以炒制溫度，炒制時間為考察因素，每個因素3個水平，通過兩因素方差分析試驗，篩選焦防風的最佳炮制工藝。將升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、補骨脂素的總含量作為主要評價指標，篩選優化炮制工藝。

實驗因素水平：炒制溫度分別為160℃、180℃、200℃；炒制時間分別為7、9、11min。焦防風兩因素試驗結果見表1。

表1 焦防風兩因素試驗結果

利用SPSS22.0對其進行方差分析。結果顯示，影響防風炒焦工藝因素因素A（炒制溫度），B（炒制時間），A溫度×B時間（交互作用）存在顯著性差異P＜0.05，對試驗結果具有一定的影響。各因素對試驗結果的影響，優選出防風炒焦的最佳工藝為A2B1，溫度180℃，炒制7min。

2.1.4 驗證試驗

按2.1.3優選的工藝制備3份樣品，測定升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、補骨脂素總含量，結果顯示升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、補骨脂素總含量（%）分別為1.369、1351、1.378。結果表明焦防風炮制工藝穩定可行。

3 結論與討論

本實驗對焦防風炮制工藝開展研究，利用兩因素實驗設計優選兩種炮制品最佳炮制工藝，優選出防風炒焦的最佳工藝為A2B1，溫度180℃，炒制7min。比較炮制前后升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、補骨脂素總含量變化，為防風炮制工藝和質量標準規范化奠定基礎。