白藜蘆醇通過下調(diào)CD44表達抑制膠質(zhì)瘤U251細胞增殖和侵襲

張 亮 王鳳鹿 李小強 王林林 陳 鵬 蔣小兵 趙海康

膠質(zhì)瘤是發(fā)病率非常高的原發(fā)性腦腫瘤，惡性膠質(zhì)瘤占一半以上[1]，預后非常差，即使選擇手術(shù)進行最大限度切除及聯(lián)合放化療治療，仍難以提高惡性膠質(zhì)瘤的預后[2]，中位生存期只有15 個月左右[3]。白藜蘆醇是一種天然多酚，對腫瘤細胞的發(fā)生、發(fā)展具有顯著的抑制作用[4]。CD44 是一種跨膜蛋白，定位于細胞膜，參與細胞遷移、細胞粘附以及細胞間相互作用等，其表達異常與腫瘤惡化具有密切聯(lián)系[5]。本文探討白藜蘆醇對膠質(zhì)瘤細胞增殖和侵襲的影響及CD44在其中的作用。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料U251 細胞購自上海一研生物科技有限公司；胎牛血清和RPMI1640細胞培養(yǎng)基購自美國Gibco公司；白藜蘆醇購自上海源葉生物科技有限公司；Lipofectamine2000TM 脂質(zhì)體購自美國Invitrogen公司；RNA提取試劑盒及逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自日本Takara公司；廣州銳博生物科技有限公司合成引物；Transwell 小室購自美國Coming-Costar 公司；細胞計數(shù)試劑盒（CCK-8）購自日本Dojindo公司，CD44、Cyclin D1、CDK4、MMP2、MMP9、GAPDH抗體購自英國Abcam公司，二抗購自美國ThermoFisher Scientific公司；引物和siCD44（GGACCUCUUUCAAUGACAATT）購自生工（上海）生物公司。

1.2 細胞培養(yǎng) 將U251 細胞置于含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)48 h，待細胞生長密度接近90%時，利用胰蛋白酶消化細胞，制備單細胞懸液。收集細胞待用。

1.3 白藜蘆醇干預 將單細胞懸液接種96孔板，每孔100 μl，加入白藜蘆醇，濃度分別為0 μmol/L（空白對照組）、50 μmol/L、100 μmol/L、150 μmol/L，培養(yǎng)48 h 進行細胞增殖和侵襲檢測，根據(jù)結(jié)果選擇最佳濃度進行CD44干預實驗。

1.4 細胞轉(zhuǎn)染 將U251細胞懸液接種6孔板，密度5×104個/孔。參 考Lipofectamine2000TM 說 明 書，將pcDNA3.1/CD44（CD44 過表達）、pcDNA3.1（過表達對照）等質(zhì)粒轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤U251 細胞，培養(yǎng)24 h 進行后續(xù)實驗。……