CCL2和CDCA5表達(dá)與黑色素瘤臨床病理特征及其預(yù)后的關(guān)系

李 敬 梁占捧 李 舒 符志坤

近年來我國黑色素瘤發(fā)病率一直呈現(xiàn)上升趨勢[1]，黑色素瘤起源于黑色素細(xì)胞的惡性腫瘤，常發(fā)生于皮膚、器官、肢端等部位[2]。當(dāng)皮膚黑色素瘤出現(xiàn)轉(zhuǎn)移時，其預(yù)后較差且致死率極高[3]，但是關(guān)于黑色素瘤的發(fā)病機(jī)制還不清楚。CCL2蛋白作為CC趨化因子家族的成員之一，參與調(diào)控多種腫瘤疾病的發(fā)生發(fā)展，其中包含了胃癌、乳腺癌等多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程[4-5]。CDCA5屬于細(xì)胞分裂周期相關(guān)基因家族成員，細(xì)胞分裂在生命過程中起著重要作用，細(xì)胞分裂過程中的任何失調(diào)都可能導(dǎo)致惡性腫瘤的發(fā)生[6]。CDCA5在肝癌、胃癌、口腔鱗癌和膀胱癌的增殖中發(fā)揮重要的作用[7]。CDCA5是成為肝癌診斷、治療及與預(yù)后的潛在生物性指標(biāo)[8]。 因此，本研究對皮膚黑色素瘤組織中CCL2、CDCA5的表達(dá)進(jìn)行檢測，分析其與臨床病理特征以及預(yù)后之間的關(guān)系，從而對皮膚黑色素瘤發(fā)生發(fā)展中的意義進(jìn)行探討。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2015年2月至2020年2月本院收治黑色素瘤患者76例，其中男性45例，女性31例。年齡28～79歲，平均(47.58 ±12.32)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《中國黑色素瘤診治指南(2011版)》中黑色素瘤標(biāo)準(zhǔn)[9]，經(jīng)病理學(xué)檢查確診為黑色素瘤； ② 臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并精神疾病患者；②合并其他惡性腫瘤患者；③合并其他器官嚴(yán)重性病變患者；④除皮膚外其他部位有黑色素瘤的患者。

1.2 免疫組織化學(xué)染色

使用10%甲醛溶液中固定組織 ，經(jīng)石蠟包埋后用二甲苯和酒精進(jìn)行脫蠟脫水；沖洗后浸泡于H2O2溶液中， 使用PBS沖洗3次；在檸檬酸鹽緩沖液中加熱15 min，使用PBS沖洗3次；甩干后滴加0.25%牛血清蛋白，室溫孵育30 min ；加入CCL2和CDCA5抗體作為一抗，4 ℃孵育14 h；復(fù)溫90 min后使用PBS清洗，加入二抗，38 ℃孵育30 min，使用PBS清洗3次； 使用DAB染色5 min ，沖洗后使用蘇木精復(fù)染1 min，經(jīng)沖洗、脫水后使用二甲苯固定，經(jīng)風(fēng)干后進(jìn)行封片。具體操作按照免疫組化染色試劑盒說明書進(jìn)行。使用顯微鏡觀察，并對其進(jìn)行圖像資料的采集。隨機(jī)選取5個高倍鏡視野來進(jìn)行陽性細(xì)胞的計數(shù)。通過免疫組化染色，陽性為細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色或者棕褐色。按照陽性細(xì)胞所占百分比和染色強(qiáng)度進(jìn)行記分。①陽性細(xì)胞所占百分比：4分為>75%，3分為51%～75%，2分為26%～50%，1分為5%～25%，0分為<5%。②染色強(qiáng)度：3分為棕褐色，2分為棕黃色，1分為淡黃色，0分為無色。兩者記分相乘，≤3分為陰性表達(dá)，>3分為陽性表達(dá)。

1.3 隨訪

經(jīng)門診復(fù)查或者電話隨訪等方式進(jìn)行隨訪 1 年，截止日期為 2021 年 2 月，觀察記錄患者隨訪期間生存情況，死亡患者以死亡時間作為截止日期。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 CCL2和CDCA5表達(dá)與黑色素瘤臨床病理特征的關(guān)系分析

CCL2和CDCA5表達(dá)與患者性別、年齡無關(guān)(P<0.05)，CCL2和CDCA5表達(dá)與黑色素瘤腫瘤直徑、分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征存在相關(guān)性(P<0.05)，腫瘤直徑≥1 cm、分化程度中和高、TNM分期Ⅲ～Ⅳ、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移黑色素瘤患者CCL2和CDCA5陽性表達(dá)率更高，見表1。

表1 CCL2和CDCA5表達(dá)與黑色素瘤臨床病理特征的關(guān)系/例

2.2 CCL2和CDCA5表達(dá)與皮膚黑色素瘤預(yù)后的關(guān)系

通過Kaplan-Meier生存分析可知，CCL2陰性表達(dá)患者生存期明顯長于陽性者(P<0.05)，CDCA5陰性表達(dá)患者生存期明顯長于陽性者(P<0.05)，見圖 1。

圖1 Kaplan-Meier生存分析

2.3 影響黑色素瘤預(yù)后危險因素分析

多因素logistic回歸分析顯示， CCL2和CDCA5表達(dá)陽性為影響黑色素瘤患者預(yù)后的獨(dú)立危險因素(P<0.05)，見表2。

表2 黑色素瘤患者影響預(yù)后的多因素logistic分析

3 討論

黑色素瘤發(fā)病率低，但發(fā)病率逐年增長[10]。早期癥狀多不顯著，表現(xiàn)為色素痣，進(jìn)而增大、變色、潰爛等，伴隨刺痛感[11]。多數(shù)患者就診時已為中晚期，已出現(xiàn)浸潤和轉(zhuǎn)移，淋巴結(jié)增大，死亡率較高[12-14]。因此提高臨床關(guān)于黑色素瘤患者早期診斷、早期治療是改善患者預(yù)后的關(guān)鍵手段。

黑色素瘤主要由遺傳因素包括種族遺傳、免疫缺陷等、環(huán)境因素包括化學(xué)污染、大氣污染等所導(dǎo)致[15]。生長因子和細(xì)胞因子有效參與了黑色素瘤的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程，生長因子表達(dá)水平上調(diào)將會進(jìn)一步造成黑色素瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移以及浸潤[16-17]。趨化因子能夠有效趨化細(xì)胞遷移、調(diào)控免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)的小分子蛋白[18]。CCL2 能夠有效趨化巨噬細(xì)胞以及單核細(xì)胞向炎癥區(qū)域的方向進(jìn)行聚集[19]。有研究發(fā)現(xiàn)，CCL2 與胃癌、乳腺癌等發(fā)生發(fā)展存在密切相關(guān)性[20]。研究發(fā)現(xiàn)，CCL2 蛋白的表達(dá)與胃癌的臨床病理資料存在密切相關(guān)[21]。CDCA5 避免從染色質(zhì)中去除凝聚力過早，有絲分裂期間維持姐妹染色單體在一起，參與黏附素分子與染色單體穩(wěn)定結(jié)合[22]。有研究發(fā)現(xiàn)，CDCA5 過表達(dá)與口腔鱗狀細(xì)胞癌、尿路上皮癌和肺癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切[23]。CDCA5 在局部晚期前列腺癌中表達(dá)失調(diào)[24]。CDCA5 可作為非小細(xì)胞肺癌診斷和治療的新靶點(diǎn)[25]。本研究中，CCL2和CDCA5表達(dá)與黑色素瘤腫瘤直徑、分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征存在相關(guān)性，腫瘤直徑≥1 cm、分化程度中和高、TNM分期Ⅲ～Ⅳ、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移黑色素瘤患者CCL2和CDCA5陽性表達(dá)率更高，CCL2 陽性表達(dá)患者生存期顯著低于陰性表達(dá)患者。CDCA5陽性患者生存期明顯高于陰性， CDCA5和CCL2表達(dá)陽性為影響黑色素瘤預(yù)后的獨(dú)立危險因素，這提示CCL2 和CDCA5有成為黑色素瘤預(yù)后生物性指標(biāo)的潛力。

綜上所述，CDCA5 和CCL2與黑色素瘤患者腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理參數(shù)及預(yù)后有關(guān)，可能參與黑色素瘤的發(fā)生發(fā)展。然而本研究存在偏移，首先是作為回顧性研究，中心單一以及樣本量偏少，以及隨訪時間短，因此未來還需要多中心以及更大擴(kuò)大樣本量的前瞻性試驗來證實(shí)此結(jié)果。