高密度脂蛋白膽固醇、鐵蛋白、整合素α3與Ⅳ期非小細胞肺癌病理特征及患者生存預后的相關性

鄧 青 程蔚蔚 陳 嵐

肺癌為目前常見惡性腫瘤，發病率與死亡率居惡性腫瘤首位[1]。肺癌根據不同組織病理類型和生物學特征分為非小細胞肺癌、小細胞肺癌兩類，其中非小細胞肺癌占肺癌80%[2]，主要有鱗癌、腺癌等類型，腫瘤細胞進展快且易擴散轉移。非小細胞肺癌以手術、放化療等為主要治療方式，但患者預后較差，5年生存率較低[3]。故確定與該腫瘤病理特征及預后相關機制可為臨床評估預后提供有效參考依據。高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)檢測簡便快速，其水平對化療后的Ⅳ期非小細胞肺癌患者療效有預測價值。鐵為機體中細胞增殖代謝所必需的營養物質，可參與呼吸、代謝、DNA合成等過程，血清鐵蛋白為新型腫瘤標志物，對肺癌診斷具有高度敏感性。4次跨膜蛋白超家族參與整合素介導黏附作用，可連接細胞信號轉導通路，調節細胞增殖轉移過程，為目前研究重點基因家族[4]。因腫瘤具有異質性，其生物學行為復雜且細胞多型性[5-6]，目前無有效標志物準確反映腫瘤發生發展。本研究通過分析96例Ⅳ期非小細胞肺癌患者HDL-C、鐵蛋白、整合素α3水平，探討其與非小細胞肺癌病理特征及預后關聯，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月至2021年1月我院收治的96例非小細胞肺癌，其中男性57例，女性39例；年齡為36～78歲；平均(61.28±11.37)歲；56例有吸煙習慣；病理類型：鱗癌37例、腺癌45例、其他14例；淋巴結轉移38例；分化程度：低中分化65例，高分化31例。納入標準：符合《2020年CSCO小細胞肺癌診療指南》標準[7]，且經病理檢查確診為非小細胞肺癌；參考《2017 ASCO Ⅳ期非小細胞肺癌指南解讀》標準[8]屬于Ⅳ期；接受化療，且預生存期超過6個月；對本研究知情并簽署同意書。排除標準：合并其他惡性腫瘤患者；服用影響免疫功能藥物患者；嚴重臟器損傷患者；精神疾病患者。

1.2 方法

患者于初次治療前抽取清晨空腹靜脈血干燥保存，采用全自動生化分析儀(美國Backman coulter，型號AU5400)檢測血清HDL-C水平；采用電化學發光免疫法檢測鐵蛋白水平，試劑與標準品來源于德國羅氏公司。采用免疫組化法檢測整合素α3表達，取病理組織切片后脫蠟脫水；使用過氧化氫甲醇將過氧化物酶阻斷，緩沖液抗原進行熱修復，冷卻至室溫后，滴加一抗孵育，倒出血清后加入鼠抗人整合素α3單抗(來源于美國Santa公司)，4 ℃孵育并用PBS洗滌；加入二抗孵育。使用DAB、蘇木精先后進行染色，用已知陽性組織作對照，PBS替代一抗作陰性對照。

1.3 血清判斷標準

HDL-C正常范圍為0.94～2.00 mmol/L，鐵蛋白正常范圍為23.9～336.2 ng/ml。本研究將血清水平高于正常值視為陽性，反之為陰性。

整合素α3陽性判斷標準：光鏡下顯示黃色顆粒為陽性細胞，由2位病理醫師經雙盲方式閱片，每張切片隨機選5個高倍視野，計算陽性細胞數占比，不足30%則為陰性，反之呈陽性[9]。

1.4 隨訪

隨訪時間截止到2021年7月31日，隨訪時間為6～30個月。總生存期(OS)是患者由登記入組至死亡、隨訪結束或失訪時間；無進展生存期(PFS)為患者入組至病情復發、進展、死亡及隨訪結束或失訪時間。

1.5 統計學方法

采用SPSS 20.0軟件分析數據，HDL-C、鐵蛋白、整合素α3陰陽性表達用(%)表示，χ2檢驗，各指標與患者病理特征相關性采用Fisher精確法。采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，Log-rank檢驗；使用Cox回歸分析各指標對預后的影響。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 患者HDL-C、鐵蛋白、整合素α3表達情況

96例患者HDL-C陰性51例、陽性45例；鐵蛋白陰性42例、陽性54例；整合素α3陰性33例、陽性63例。

2.2 患者病理特征與HDL-C、鐵蛋白、整合素α3的關系

患者性別、年齡、吸煙對HDL-C、鐵蛋白、整合素α3水平表達情況無顯著影響(P>0.05)；鱗癌、有淋巴結轉移患者HDL-C、鐵蛋白、整合素α3陽性表達更高(P<0.05)。見表1。

表1 患者HDL-C、鐵蛋白、整合素α3表達水平與病理特征的關系/例

2.3 患者HDL-C、鐵蛋白、整合素α3水平與預后關系

采用Kaplan-Meier法分析PFS與OS生存預后，結果顯示，整體中位PFS為7.3個月，HDL-C陰性組中位PFS為8.4個月，陽性組為4.1個月(P<0.05)；鐵蛋白陰性組中位PFS為7.8個月，陽性組為5.2個月(P<0.05)；整合素α3陰性組中位PFS為8.1個月，陽性組為3.9個月(P<0.05)。整體中位OS為22.1個月，HDL-C陰性組中位OS為22.5個月，陽性組為15.9個月(P<0.05)；鐵蛋白陰性組中位OS為22.7個月，陽性組為16.2個月(P<0.05)；整合素α3陰性組中位OS為24.7個月，陽性組為16.4個月(P<0.05)。見圖1。

圖1 HDL-C、鐵蛋白、整合素α3水平與PFS、OS關系

2.4 多因素分析

將各病理參數與HDL-C、鐵蛋白、整合素α3陰陽性表達納入Cox回歸模型分析，結果顯示，淋巴結轉移與HDL-C、鐵蛋白、整合素α3陽性表達為影響Ⅳ期非小細胞肺癌患者生存預后的獨立危險因素(P<0.05)。見表2。

表2 Cox回歸模型的多因素分析

3 討論

近年來肺癌發病與死亡率居于惡性腫瘤首位，且逐年上升[10]。早期肺癌的5年生存率可達到60%～90%，但Ⅳ期患者生存率不足20%[11]，故早期診斷治療肺癌患者對提高其預后極為重要。晚期肺癌患者已喪失手術最佳機會，主要治療以化療為主。HDL-C能反向調運膽固醇，對動脈粥樣硬化預防具有顯著效果。HDL-C為多功能脂蛋白，能影響細胞周期中促分裂原活化蛋白激酶信號轉導通路并調控細胞凋亡，具有抗氧化、抗凋亡、調節細胞因子合成、刺激細胞分化遷移作用，水平下降對腫瘤發生發展起到重要作用[12]。在關于肺癌研究的報道中，HDL-C被認為是非小細胞肺癌臨床預后因子[13]。癌細胞中膽固醇合成強于正常細胞，過量膽固醇及其合成途徑中間體使癌細胞處于高水平增殖狀態。

鐵在人體中參與氧運輸、能量代謝、DNA合成等途徑，發揮作用依賴于機體鐵穩態。缺鐵使血紅蛋白合成出現障礙而引發缺鐵性貧血，且影響含鐵酶活性，進而影響生理功能正常發揮。但鐵過載也易損傷機體，提高腫瘤發病風險。大量研究表明，鐵水平上升對肝癌、乳腺癌、肺癌發生風險有增加[14]。鐵蛋白能儲存體內多余鐵，將其聚集于細胞中阻止鐵介導自由基生成。研究顯示，鐵蛋白在乳腺癌、肝癌、胰腺癌等多種癌組織中過表達；乳腺癌組織中間質細胞鐵蛋白有較強表達[15]。進一步研究顯示，富含鐵蛋白基質細胞為腫瘤浸潤巨噬細胞，該類細胞于局部分泌的鐵蛋白經不依賴鐵機制對癌細胞增殖產生促進作用。鐵蛋白在骨髓、臟器中的分子量較大，其蛋白質含鐵豐富，由24個非共價鍵連接而成，鐵結合與儲備力較大，能為機體有效提供鐵物質。研究顯示，血清中的鐵蛋白微量，正常情況下含量穩定，腫瘤細胞中含量較多；鐵蛋白水平的上升，歸咎于其來源增加或清除發生障礙。非小細胞肺癌患者體內癌細胞合成而增加鐵蛋白含量，提高血清中鐵蛋白水平，其為輔助診斷惡性腫瘤指標。當鐵蛋白水平下降，可能為患者失血、貧血或長期腹瀉等使鐵吸收出現障礙[16]。血清鐵蛋白為評估癌癥患者體內鐵負荷過量或缺乏的有效指標。非小細胞肺癌患者不同病理類型、有無淋巴結轉移情況與血清鐵蛋白水平有一定差異，說明鐵蛋白陽性表達可能傾向于鱗癌、淋巴結轉移患者。

整合素為細胞黏附分子中成員，包括α與β亞群的糖蛋白，為癌細胞粘附外基質主要受體，能介導細胞粘附、轉移、傳導并調理外基質，其中整合素α3在正常肺部組織中無表達，肺癌組織中可有部分表達，整合素介導的基質中腫瘤細胞可發生擴散、凋亡[17-18]。體外實驗表明[19]，整合素對細胞凋亡過程有影響。本研究中整合素α3在非小細胞肺癌中表達過度，與病理類型及淋巴結轉移等特征有關，與性別、年齡等無關，該結果說明整合素α3異常表達參與腫瘤進展[20]。經Kaplan-Meier法分析顯示HDL-C、鐵蛋白、整合素α3水平與患者生存預后有一定關聯。

綜上所述，Ⅳ期非小細胞肺癌患者HDL-C、鐵蛋白、整合素α3陽性表達較高，高水平表達預示患者預后不良，可作為評估其預后的有效輔助指標。