平喘顆粒薄層色譜質量標準研究

馬春琳

平喘顆粒為醫院自制制劑，處方由蜜麻黃、杏仁、桔梗、甘草、葶藶子、細辛、地龍、石膏、五味子、枳殼、丹參、蜜枇杷葉12味中藥組成，具有清熱化痰，宣肺平喘功效。用于喘息性支氣管炎，支氣管哮喘急性發作，痰熱壅肺，肺失宣降等癥。該品種為醫院生產品種，共收集6個批次樣品，批號分別為150313、150314、150315、150316、150317、150318進行測定，薄層色譜結果均達到一致，該品種選取蜜麻黃、枇杷葉、丹參的有效成分分別為麻黃堿、熊果酸、丹酚酸B，在藥典及相關文獻中均用薄層色譜法（TLC）進行定性鑒別[1-13]，用于藥品質量控制。

1 儀器與試藥

ZF-2型三用紫外分析儀；328A分析天平；PQ3120超聲波清理器；青島海浪硅膠干燥劑廠制造硅膠G板；鹽酸麻黃堿對照品（171241-201007）為中國食品藥品檢定研究院提供，熊果酸對照品（110742-201421）為中國食品藥品檢定研究院提供，丹酚酸B對照品（11562-201615）為中國食品藥品檢定研究院提供。自制制劑供試品6批樣品；分別除去蜜麻黃、枇杷葉、丹參陰性對照樣品。

2 方法與結果

2.1 蜜麻黃的TLC鑒別

照TLC《中華人民共和國藥典》2020年版四部通則0502試驗。1）供試品溶液制備：取3批次本品各10 g，分別研細，加濃氨試液5 ml使濕潤，加三氯甲烷20 ml，超聲處理15 min后，過濾并將濾液干燥。用1 ml甲醇將殘渣溶解，制成供試品溶液。點樣量：5 μl。2）對照品溶液制備：精密稱取鹽酸麻黃堿對照品10 mg，加甲醇至10 ml，制成每毫升含有1 mg的溶液，用作對照品溶液。點樣量：5 μl。3）陰性對照溶液制備：將麻黃從處方中去除，方中剩余的11味藥，根據原處方用量比例制成缺少麻黃的陰性對照樣品。取陰性對照樣品12 g，制備方法同供試品溶液，制成陰性對照溶液[14-15]。點樣量：5 μl。

溫度：25 ℃；相對濕度：55%；薄層板：預制硅膠G薄層板，規格10×10 cm；展開劑：三氯甲烷-甲醇-濃氨（20∶5∶0.5）；展距：上行展開8 cm；顯色及檢視：取出晾干，5%茚三酮乙醇試液噴霧，105 ℃加熱至斑點顯示清晰顏色。

結果：平喘顆粒3個批次供試品色譜與鹽酸麻黃堿對照品顯示相同顏色的斑點，在色譜圖的相應位置顯示一致，而陰性對照品在相應位置沒有斑點。結果表明色譜圖中的斑點清晰，分離效果較好。見圖1。

圖1 蜜麻黃的薄層色譜

2.2 枇杷葉的TLC鑒別

照TLC《中華人民共和國藥典》2020年版四部通則0502試驗。1）供試品溶液的制備：取3批次本品各12 g，分別研細，加入50 ml甲醇，超聲處理20 min后，過濾并將濾液揮干，用5 ml甲醇將殘渣溶解，制成供試品溶液備用。點樣量：5 μl。2）對照溶液制備：取枇杷葉對照藥材1 g用相同方法制成對照藥材溶液。取熊果酸對照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液用作對照品溶液。點樣量：5 μl。3）陰性對照溶液制備：將枇杷葉從處方中去除，方中剩余的11味藥，根據原處方用量比例制成缺少枇杷葉的陰性對照樣品。取陰性對照樣品12 g，制備方法同供試品溶液，用作陰性對照溶液。點樣量：5 μl。

溫度：25 ℃；相對濕度：55%；薄層板：預制硅膠G薄層板，規格：10×10 cm；展開劑：甲苯-丙酮（5∶1）；展距：上行展開8 cm；顯色及檢視：晾干，10%硫酸乙醇溶液噴霧，105 ℃加熱至斑點顯示清晰顏色。

結果：平喘顆粒3個批次供試品色譜與熊果酸對照品及枇杷葉對照藥材溶液顯示相同顏色的斑點，在色譜圖的相應位置顯示一致，而陰性對照品在相應位置沒有斑點。結果表明色譜圖中的斑點清晰，分離效果較好。見圖2。

圖2 枇杷葉、熊果酸的薄層色譜

2.3 丹參的TLC鑒別

照TLC《中華人民共和國藥典》2020年版四部通則0502試驗。1）供試品溶液的制備：取本品3 g，研細，加75%甲醇25 ml，加熱回流1 h，過濾，濾液濃縮至約1ml，制成供試品溶液。點樣量：5 μl。2）丹參對照藥材和對照品溶液的制備：用相同方法取丹參對照藥材同法制成對照藥材溶液；取丹酚酸B對照品10 mg，加75%甲醇制成每毫升含2 mg的溶液作為對照品溶液。點樣量：5 μl。3）陰性對照溶液制備：從處方中去除丹參，將處方中剩余其他藥味，根據原處方用量比例制成缺少丹參的陰性對照樣品。取上述陰性對照樣品3 g，與供試品溶液的制備方法相同，制成陰性對照溶液。點樣量：5 μl。

溫度：25 ℃；相對濕度：55%；薄層板：預制硅膠GF254薄層板，規格：10×10 cm；展開劑：甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（2∶3∶4∶0.5∶2）為展開劑；展距：上行展開8 cm；顯色及檢視：展開，取出，晾干，置日光或紫外線燈（254 nm）下檢視。

結果：平喘顆粒4個不同批次供試品檢品色譜斑點與丹酚酸B對照品及丹參對照藥材溶液顯示相同顏色的斑點，在色譜圖的相應位置顯示一致，而陰性對照品在相應位置沒有斑點。結果表明色譜圖中的斑點清晰，分離效果較好。見圖3。

圖3 丹酚酸B的薄層色譜

3 討論

TLC系將供試品溶液點于薄層板上，在展開容器內用展開劑展開，使供試品所含成分分離。所得色譜圖與適宜的標準物質按同法所得的色譜對比[1]，亦可用薄層色譜掃描儀進行掃描，用于鑒別檢查或含量測定。TLC經制版，點樣，展開，檢出，操作方便簡單，在醫藥工業中應用廣泛。尤其在中草藥、中成藥的成分分析中，藥典及文獻均有大量記載，可作為藥物質量控制標準。

平喘顆粒共12味中藥組成，方中麻黃為君藥。來源麻黃科麻黃屬植物草麻黃、中麻黃或木賊麻黃的干燥草質莖。其性溫，味辛、微苦，歸肺經、膀胱經。《神農本草經》：“主中風，傷寒頭痛，溫瘧，發表出汗，祛邪熱氣，止咳逆上氣，除寒熱”，具有發汗解表，宣肺平喘，利水消腫的作用。其發汗力峻猛，為治療外感風寒感冒常用藥。現代藥理研究發現，其具有解熱發汗，平喘，鎮咳，抗炎，抗過敏，抗菌，抗病毒，利尿等作用。其發揮作用的主要有效成分為麻黃堿、偽麻黃堿和揮發油等，成分明確，療效確切。故列入該制劑控制標準[16]。枇杷葉來源薔薇科植物枇杷的干燥葉，產于浙江、廣東，性苦，微寒。歸肺胃經，具有清肺止咳，降逆止嘔的功效，用于肺熱咳嗽，氣逆喘急，胃熱嘔逆，煩熱口渴，為治療肺熱咳喘要藥。現代藥理研究發現，其具有鎮咳，祛痰，平喘，抗炎的作用。其藥用價值獨特，在臨床上也普遍應用，尤其在內科肺病科常用。從該藥中分離出來的成分主要有三萜酸類、黃酮類、有機酸類、揮發油、皂苷類、多酚類等。其發揮主要藥理作用成分為三萜酸類化合物，以熊果酸和齊墩果酸含量較高，因此將熊果酸列入該制劑質控標準[8]。丹參也是臨床一味應用較多的藥物，來源于唇形科鼠松草屬丹參的干燥根及根莖，味苦，性微寒，歸心肝二經，始載《神農本草經》，列為上品。主產于河北、山西、山東等地。具有活血祛瘀，通經止痛，清心除煩，涼血消癰的功效，治療胸痹心痛，脘腹肋痛，癥瘕積聚，熱痹疼痛，心煩不眠，月經不調，痛經經閉，瘡瘍腫痛等。其主要藥理作用為抗炎，抗腫瘤，抗氧化，免疫調節，對心血管系統疾病及糖尿病等均有效果，其主要成分為水溶性酚酸類和脂溶性的丹參酮化合物。在平喘顆粒中，丹參活血化瘀，能降低血黏稠度，并能降低氣道的高反應性。諸藥合用能減輕患者的喘息、哮喘、咳嗽，咳痰等臨床癥狀，對肺功能有一定的改善作用。丹參中含有酚酸類成分，多是苯丙素類結構縮合而成，具有良好的抗氧化活性，因此選取丹酚酸B進行薄層色譜鑒別有效成分，并列為該制劑的標準[17]。

麻黃、枇杷葉、丹參3種藥物有效成分明確。供試品與對照品和對照藥材的色譜在色譜圖中顯示相同的斑點，且在相應位置一致，而缺少該樣藥品的陰性對照無斑點，表明對結果沒有干擾。在平喘顆粒中3味藥物為主要藥物，方中君臣藥味，治療成分確定，臨床效果顯著，選取作為自制制劑質量控制品種。實驗結果表明，均能達到色譜斑點清晰，辨識度高，試驗結果準確可靠的效果，因此其可作為平喘顆粒定性及質量控制的依據。