一例豬繁殖與呼吸綜合征的診斷

周昊然，張佳璐，李 靖，馮朝陽，孟凡亮，劉思當

（山東農業大學動物科技學院，山東 泰安 271018）

豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）是目前世界范圍內危害生豬生產最重要的病原體之一，每年給養豬業造成巨大的經濟損失。目前，在我國雖然多種商品化疫苗已得到廣泛應用，絕大多數豬場用PRRSV減毒活疫苗或滅活苗高強度免疫，但感染率仍居高不下，肥育豬場普遍陽性帶毒，陰性種豬場極少[1]，豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）的危害仍然很嚴重。因PRRSV疫苗免疫效果的不確定性、類NADC30毒株的廣泛流行，多種毒株如類NADC30、34毒株、高致病性毒株、重組毒株的存在和PRRSV傳播途徑的多樣性，使得PRRS防控難度巨大。

1 材料與方法

1.1 發病背景

山東省肥城市某豬場存欄母豬60頭，保育豬310頭，2022年3月該豬場7頭懷孕后期（85～105 d）母豬出現流產，死胎數增加，約80頭55日齡左右的保育豬出現咳喘，呼吸急促困難，并呈犬坐式呼吸，病豬發燒40～41.5 ℃，精神沉郁，采食量下降，且有5頭保育豬死亡。此前該豬場從未進行過PRRS疫苗的免疫，發病后對豬群使用了包被恩諾沙星拌料治療，但是效果不佳，未能有效控制豬只的發病與死亡，遂前來就診。

1.2 主要儀器及試劑

Taq DNA聚合酶，DNA Marker DL 2 000，購自大連寶生物工程有限公司；DNA/RNA KIT，Easy Script One-Step RT-PCR Supe Mix，購自北京全式金生物技術有限公司。

1.3 送診病豬臨床癥狀

送檢病死豬生前呈犬坐姿式，精神沉郁，驅趕不動，呼吸急促且困難，鼻翼扇動，發燒，可視黏膜發紺，耳、嘴及頸部皮膚呈藍紫色（圖1）。

1.4 剖檢變化和樣品采集

病死豬剖檢發現整個肺臟呈暗紅色腫大（圖2），肺切面硬實，有少量漿液滲出；頸部淋巴結、肺門淋巴結呈紫色充血腫脹；腹股溝淋巴結充血腫大。采集豬扁桃體、肺臟、肺門淋巴結、脾臟、腹股溝淋巴結組織。一份放10%福爾馬林溶液固定，一份于-80 ℃冰箱凍存。

1.5 病料處理

取適量凍存的淋巴結、肺臟、脾臟組織病料放入研磨器中，加入1 mL滅菌PBS，將研磨后產物轉至1.5 mL滅菌離心管中。置于-80 ℃冰箱中反復凍融3次，再12 000 r/min離心7 min，將上清液吸入到滅菌離心管中并完成核酸的提取。

1.6 PCR/RT-PCR

根據NCBI上已發表的PRRSV、豬瘟病毒（CSFV）、豬偽狂犬病病毒（PRV）的保守基因序列設計特異性引物（表1），配置PCR/RT-PCR反應體系，進行3種病毒的檢測。

表1 PCR/RT-PCR引物序列

2 結果

2.1 病毒PCR/RT-PCR檢測結果

通過PCR/RT-PCR擴增特異性病毒基因片段后，將擴增產物在1%瓊脂糖凝膠中進行電泳，電泳結束后根據凝膠在紫外凝膠成像儀下條帶位置判斷豬只的病原感染情況（圖3），結果表明豬只感染了PRRSV，而未檢出其他病毒感染。

2.2 病理組織學診斷

10%福爾馬林溶液固定組織，制作常規石蠟切片，HE染色，鏡檢發現支氣管周圍及肺泡壁大量巨噬細胞、淋巴細胞浸潤增生，肺泡壁顯著增厚，輕度充血、出血，肺組織呈典型間質性肺炎病變（圖4）。

3 防治與討論

根據豬場發病情況、臨床癥狀、剖檢病變、病毒檢測及病理組織學觀察結果綜合分析，該病例是PRRSV感染所致的PRRS。

PRRSV傳播迅速，豬場中普遍存在，病毒可通過精液傳播、空氣傳播、接觸傳播，并且母豬可垂直傳播給仔豬，感染豬只長時間帶毒、排毒。基于對PRRSV傳播、致病機制、遺傳變異等特性以及免疫防控綜合分析，為豬場制定了綜合防控措施。發病豬群使用包被替米考星或泰萬菌素和抗病毒中藥（黃芪板青）進行治療；豬場執行嚴格消毒措施；及時調整優化了豬場的免疫程序：選擇經典毒株致弱活疫苗進行緊急普免。并建議豬場選擇該疫苗按下列程序常態化免疫，后備母豬配種前2次免疫馴化，基礎母豬每年3次普免，仔豬2周左右初免，4周后二次免疫。

用藥5 d后豬群咳喘問題明顯減輕，半月后回訪豬場，豬群已經基本無呼吸道問題。在采取經典毒株致弱活疫苗免疫后，后續批次豬只只有零星存在咳喘癥狀，且較易治愈。

3.1 藍耳病的預防

藍耳病的預防策略要進行精細化、系統化的制定，首先要明確本豬場存在的疫病傳播風險環節，強化豬場生物安全，做好引種檢測隔離，加強人員入場流程與人員場中流動管理，嚴格進行車輛、入場物資的洗消工作，有條件的豬場可以采用空氣過濾系統來降低PRRSV進入豬場導致豬群感染發病的風險。

疫苗免疫是防控PRRSV的重要措施，但是一直以來飽受爭議，滅活疫苗效果不佳，活疫苗免疫有效，但卻是一把雙刃劍。提倡使用疫苗的觀點是疫苗雖無法有效阻斷PRRSV對豬只的感染，但是可以降低豬只感染后的病毒載量與排毒時間，減輕豬只發病的臨床癥狀與發病嚴重程度，降低發病豬群的死亡率，從而減少因該病造成的經濟損失。建議謹慎使用或反對藍耳病疫苗免疫的觀點，主要是基于滅活疫苗效果不佳或無效，減毒活疫苗使用后給豬場造成巨大安全隱患[2]。

3.2 藍耳病的控制

3.2.1 細菌繼發感染的控制 藍耳病對豬的呼吸系統造成損傷，并且造成免疫抑制，打開了呼吸道病原菌入侵的門戶，從而使得豬只更容易繼發細菌感染導致更嚴重的呼吸道疾病，如豬群中存在藍耳病時，更容易發生豬支原體肺炎、豬肺疫、傳染性胸膜肺炎、副豬嗜血桿菌病。當豬群中已存在豬支原體肺炎、豬傳染性萎縮性鼻炎時，呼吸道黏膜屏障受損，此時豬群感染PRRSV后會導致更嚴重的傷亡與損失。藍耳病的控制較為困難，控制方案也較少，在豬場暴發藍耳病時，可適當使用抗生素（如替米考星、泰萬菌素、頭孢、氟苯尼考等）與解熱抗炎藥物（卡巴匹林鈣、氟尼辛葡甲胺）來控制豬繼發的細菌病，從而降低豬群的死亡率。

3.2.2 后備母豬血清馴化技術 后備母豬如果在引入經產母豬群前PRRSV陰性或者對PRRSV免疫力弱，則在將后備母豬引入經產母豬群中之前，可以進行對后備母豬的馴化，使后備母豬在配種之前感染與經產母豬群相同的PRRSV毒株，且在引入經產母豬群前完全康復，則會形成對豬場存在PRRSV毒株的堅強免疫力，使后備母豬在配種和妊娠期間不會轉為病毒血癥陽性，可減少對豬群及新生仔豬的傳染風險[3]。

3.2.3 閉群凈化 因為豬藍耳病疫苗效果的不確實與可能潛在的風險問題，目前閉群凈化技術已廣泛用于從母豬群清除 PRRSV。在感染PRRSV的母豬群中實行閉群飼養管理，最終使豬群PRRSV帶毒率下降或者消失。主要包括“閉群飼養、馴化、檢測與強化淘汰、增強生物安全”幾個重要環節。此技術可以對PRRS有很好的控制效果，但需豬場有高水平的生物安全體系、獸醫團隊、管理團隊，要保證不能有外來的新PRRSV毒株進入，在閉群過程中豬場空欄率上升，欄舍利用率下降，豬場會有較大經濟壓力。

4 建議與展望

我國在非洲豬瘟疫情下豬場生物安全體系建設普遍提升的背景下，對于傳染性強的PRRSV仍防控較差，需要在生產實踐中總結出更加有效的防控對策，助力于我國PRRS的控制與根除。