豬場豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬偽狂犬病的血清學檢測結果及分析

王禮偉，周 剛，柏傳茂，唐 炎，崔宏如，楊生明，張建平

（1.江蘇徐淮地區淮陰農業科學研究所，江蘇 淮安 223001；2.金湖縣呂良中心畜牧獸醫站，江蘇 淮安 211600）

動物傳染病是危害養殖業最為嚴重的因素之一，它不僅可以造成動物大批量死亡和動物源性產品的損失，影響食品安全及進出口貿易，而且某些人獸共患傳染病還能威脅人類的生命健康[1]。現代化集約規模的養殖業，由于動物調運移動頻繁、飼養密度高度集中，更容易受到傳染病的侵襲，造成疾病的混合感染、繼發感染等。2018年8月暴發的急性烈性傳染病—非洲豬瘟，更是給我國的生豬市場和產業發展帶來巨大的經濟和社會危害。因此，對動物傳染病的防制和研究歷來受到世界各國的高度重視，并在獸醫科學研究領域居重要位置[2]。

免疫接種是養殖場防控傳染病發生最根本、最科學、最直接的措施[3]。開展血清免疫抗體檢測工作，是做好動物免疫工作的前提和保證，能夠及時了解疫苗注射后動物體內產生的免疫抗體水平和免疫效果，當前規模化養殖場已經廣泛開展血清抗體監測工作[4-5]。本研究對某豬場不同生長階段豬群的豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、偽狂犬病血清抗體進行檢測與分析，希望為養殖場進行補免和開展各項防控措施提供科學依據，為政府主管部門科學制定動物疫病預防控制規劃和疫病預警提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 樣品來源 2021年12月期間在金湖縣綠能生豬養殖合作社開展，根據某規模化豬場（規模：經產母豬500頭）生產管理情況需要，通過前腔靜脈采血，收集血清，于-20 ℃冰箱中保存備用。豬場豬瘟疫苗是傳代細胞苗，具體免疫方案為：種公豬、種母豬普免2次/年，仔豬30日齡免疫1次、保育豬70日齡免疫1次；豬繁殖與呼吸綜合征疫苗是ATCCVR-2332株疫苗，具體免疫方案為種公豬、種母豬普免3次/年，仔豬21日齡免疫；偽狂犬病疫苗是gE基因缺失疫苗（毒株Bartha-K61株疫苗），具體免疫方案為種公豬、種母豬普免4次/年，仔豬0日齡滴鼻免疫，50及80日齡肌注。

1.1.2 主要試劑和儀器 豬瘟抗體檢測試劑盒、偽狂犬病gB抗體檢測試劑盒購自武漢科前生物制品有限責任公司；豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測試劑盒、偽狂犬病gE抗體檢測試劑盒購自北京愛德士元亨生物科技有限公司；MultiskanFC自動酶標儀購自Thermo公司；恒溫培養箱及平板震蕩儀購自常州金壇晨陽電子儀器廠；獸用一次性5 mL采血盛血器購自安徽弘牧防疫檢疫裝備制造有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 操作方法 樣品檢測方法及判定結果根據試劑盒說明書進行操作。

1.2.2 統計分析 利用Office軟件對試驗檢測數據進行生物統計學分析。

2 結果與分析

2.1 豬場豬瘟血清抗體ELISA檢測分析結果

不同階段豬群豬瘟血清抗體ELISA檢測結果顯示，豬瘟抗體陽性率均不低于80.00%，3周齡仔豬最低為80.00%，其抗體離散度卻最高為0.52，5周齡保育豬抗體平均值最低僅為59.4（表1）。

表1 豬瘟血清抗體ELISA檢測結果

2.2 豬繁殖與呼吸綜合征血清抗體ELISA檢測分析結果

豬群豬繁殖與呼吸綜合征血清抗體ELISA檢測結果顯示，只有10周齡、13周齡豬群抗體表現出S/P≤2.0，其余豬群抗體均表現出S/P＞2.0，5周齡、7周齡豬群抗體S/P表現出S/P≤2.5。S/P＞2.0的豬群類型比例為77.78%（7/9），S/P＞2.5的豬群類型比例為55.56%（5/9）（表2）。

表2 豬繁殖與呼吸綜合征血清抗體ELISA檢測結果

2.3 豬場偽狂犬病gB、gE血清抗體ELISA檢測分析結果

豬群偽狂犬病gB、gE血清抗體ELISA檢測結果綜合顯示，只有妊娠71～105 d母豬、7周齡、16周齡豬群偽狂犬病gB血清抗體陽性率不是100.00%，分別為60.00%、80.00%及20.00%，且7周齡抗體離散度最高為1.56。在豬群偽狂犬病gE血清抗體上，7周齡、16周齡豬群偽狂犬病gE血清抗體顯示為陰性（陽性率均為0.00%），而其他豬群偽狂犬病gE血清抗體均顯示陽性，且妊娠71～105 d母豬及公豬偽狂犬病gE血清抗體陽性率在所有陽性豬群中最低為20.00%。妊娠30～70 d母豬偽狂犬病gE血清抗體陽性率最高為60.00%（表3、表4）。

表3 偽狂犬病gB血清抗體ELISA檢測結果

表4 偽狂犬病gE血清抗體ELISA檢測結果

3 討論

3.1 豬瘟免疫效果還需加強

根據《2021年國家動物疫病強制免疫計劃》的通知，豬瘟不再列入重大動物疫病強制免疫病種，但作為國家規定的一類動物疫病，各級政府部門、養殖場主等行業人員仍然需要高度重視此類疫病的危害。該豬場豬瘟血清抗體整體合格率為96.67%，已經達到國家強制性免疫傳染病70%的水平要求，說明豬場豬瘟免疫效果較好[6]。妊娠71～105 d母豬及3周齡仔豬存在抗體陽性率連續下降及離散度增加的現象，說明母豬自身的免疫抗體通過胎盤及乳汁傳遞與仔豬外源輸入抗體存在一定的關系。當哺乳母豬無法提供足量的免疫抗體且仔豬自身沒有疫苗免疫時，仔豬抗體水平下降，因此需要加強對妊娠母豬的免疫[7-8]。

3.2 豬群豬繁殖與呼吸綜合征處于不穩定狀態

作為豬繁殖與呼吸綜合征陽性場，豬場血清抗體S/P＞2.5的比例在母豬妊娠30～70 d、妊娠71～105 d階段已經呈現上升趨勢，且公豬抗體S/P＞2.0的比例為40.00%，S/P＞2.5的比例為20.00%，說明在種公豬及繁殖母豬豬群類別上豬繁殖與呼吸綜合征已經進入不穩定狀態。同時，5～13周齡豬群抗體S/P＞2.5為0，說明這種不穩定狀態仍處于初始階段，尚未波及后續部分階段的仔豬，而16周齡豬群已經存在抗體S/P＞2.5的比例。因此，豬場需要緊急進行流行病學調查及病原學檢測綜合分析，判斷是否疫苗毒株存在變異重組或者外源野毒感染入侵[9]。針對當前藍耳病進入不穩定狀態的初級階段且病毒尚未分離鑒定，可緊急采用泰萬菌素進行防控，泰萬菌素能夠抑制藍耳病病毒在巨噬細胞復制傳播，縮短藍耳病病毒血癥周期，減少毒血癥危害，配合使用替米考星，可進一步降低感染動物的死亡率和減輕臨床癥狀[10-11]。在抗生素緊急防控后，再根據病原學檢測結果，確定疫苗毒株和野毒毒株基因的異同，進行特異性疫苗的加強免疫，并進行該病的長期系統的檢測和監測，確保S/P保持在合理健康水平。

3.3 豬偽狂犬病存在野毒感染的現象

通過偽狂犬病gB、gE血清抗體的檢測結果分析，可以初步確定偽狂犬病野毒已經感染絕大部分豬群（7周齡、16周齡豬群除外），該場已經成為野毒感染陽性場。在7周齡、16周齡豬群即使在野毒陽性率為0的情況下，血清gB抗體陽性率仍達不到100.00%，進一步說明偽狂犬病gB血清抗體水平已經不能代表Bartha-K61株疫苗免疫的水平，從而證明豬場當前使用的Bartha-K61經典毒株疫苗已經不能夠抵制野毒入侵，導致免疫失敗。偽狂犬病野毒感染入侵在部分地區已經成為常態，山東省在2013—2016年期間對規模豬場2 033份血清進行偽狂犬病野毒抗體檢測及病毒分離，得出野毒抗體陽性率為57.8%，且分離鑒定出15株變異毒株，再次說明偽狂犬病變異性毒株已經廣泛流行[12]。在變異毒株進化上，楊濤等對多個廠家生產的Bartha-K61疫苗株與變異毒株在基因上進行比較分析，證明疫苗株和變異株屬于不同的進化分支，進一步解釋了該豬場當前使用的經典Bartha-K61毒株疫苗無法提供足夠的免疫保護的原因[13]。因此，豬場需要緊急進行偽狂犬病野毒分離鑒定，選擇與流行毒株同源性較高的疫苗，并持續開展偽狂犬病野毒凈化的工作[14]。

4 結論

通過本次血清學檢測及分析，該豬場存在豬繁殖與呼吸綜合征、豬偽狂犬病野毒感染，豬瘟疫苗有待加強免疫等系列問題，此外還需要進行流行病學、解剖學及分子生物學等方法綜合確診。因此，長期化、動態化、系統化和科學化的檢測和監測是確保動物傳染病發生后實現“早、快、嚴、小”解決處理的重要措施。