種豬偽狂犬病凈化及綜合防控研究

段昌學(xué)，許建勛，趙 娟，王 陽，武果桃，翼新星，秦建國(guó)，耿一清，李樹文

（1.陜西省商洛市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，陜西 商洛 726000；2.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，山西 太原 030031；3.山西省運(yùn)城市夏縣畜牧獸醫(yī)發(fā)展中心，山西 運(yùn)城 044400）

豬偽狂犬病是一種由偽狂犬病病毒（PRV）引起的豬的急性傳染病。該病在豬中呈暴發(fā)性流行。可引起妊娠母豬流產(chǎn)、死胎，公豬不育，新生仔豬大量死亡，肥育豬呼吸困難、生長(zhǎng)停滯等，是危害全球養(yǎng)豬業(yè)的重大傳染病之一[1]。2011年以來，豬偽狂犬病再次在國(guó)內(nèi)暴發(fā)流行，導(dǎo)致許多豬場(chǎng)損失慘重，就近年來市獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)結(jié)果而言，陜西省豬群偽狂犬病野毒感染率呈上升趨勢(shì)，豬偽狂犬病的綜合防控迫在眉睫。《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》中明確要求，所有種豬場(chǎng)到2020年底達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)。為了按時(shí)完成這一任務(wù)，探索出全市動(dòng)物疫病凈化工作經(jīng)驗(yàn)，市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心特選取在商洛市具有代表性的3家中大型規(guī)模種豬場(chǎng)來實(shí)施豬偽狂犬病凈化推廣項(xiàng)目。

1 試驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)場(chǎng)情況及試驗(yàn)周期

商洛市是貧困山區(qū)，養(yǎng)殖規(guī)模普遍較小，所選3家企業(yè)為省部級(jí)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)（表1），在選址、場(chǎng)地、設(shè)施、規(guī)模、人員、管理等方面都屬于較好的企業(yè)。試驗(yàn)期為2017年1月至2020年12月。

表1 試驗(yàn)豬場(chǎng)種豬數(shù)量統(tǒng)計(jì)

1.2 檢測(cè)樣品

感染率調(diào)查和監(jiān)測(cè)階段按后備、妊娠、哺乳母豬分類，每個(gè)類別最少采集30頭豬全血，不足30頭豬全采，種公豬全采，分離血清樣品；實(shí)施凈化階段100%采集母豬、種公豬全血，分離血清樣品。

1.3 檢測(cè)試劑盒

豬偽狂犬病病毒gE抗體ELISA檢測(cè)試劑盒-愛德士（IDEXX）；豬偽狂犬病病毒gB抗體ELISA檢測(cè)試劑盒-愛德士（IDEXX）；豬瘟病毒單重凝膠PCR檢測(cè)試劑盒-北京億森寶生物；高致病性豬藍(lán)耳病病毒單重凝膠PCR檢測(cè)試劑盒-北京億森寶生物；豬圓環(huán)病毒1型和2型雙重凝膠PCR檢測(cè)試劑盒-北京世紀(jì)元亨。

1.4 檢測(cè)方法及原理

1.4.1 gE抗體為野毒抗體，采用gE基因缺失疫苗免疫，采用gE-ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）方法可以對(duì)該病進(jìn)行鑒別診斷。對(duì)于gE抗體陽性豬，可能為感染發(fā)病豬、感染康復(fù)豬或健康仔豬（母源抗體）3種情況。對(duì)于gE抗體陰性豬，可能為健康豬或剛剛感染野毒抗體尚未轉(zhuǎn)陽的豬[2-3]。

1.4.2 gB抗體為總保護(hù)性抗體，無法區(qū)分疫苗毒和野毒，且不能確定gB抗體水平高低與免疫時(shí)機(jī)、臨床發(fā)病之間的關(guān)系，僅在已知gE抗體水平下間接評(píng)估免疫效果[4]。

1.4.3 PCR病原檢測(cè)，對(duì)于感染豬瘟、藍(lán)耳病、圓環(huán)病毒病等免疫抑制病的帶毒豬，腦、腎、扁桃體、血液、淋巴等組織和體液PCR檢出率較高。考慮到采樣的便利性，本試驗(yàn)選取口腔黏液樣品用于PCR檢測(cè)，結(jié)果為陽性的無臨床癥狀豬，可視為隱性感染[5]。

2 試驗(yàn)方法

2.1 豬偽狂犬病凈化技術(shù)路線[6]

豬偽狂犬病凈化技術(shù)路線見圖1。按照“調(diào)查（抽樣檢測(cè)）→首次檢測(cè)→撲殺/隔離→免疫→二次檢測(cè)→撲殺/淘汰→再次檢測(cè)→撲殺→監(jiān)測(cè)”等步驟進(jìn)行凈化。

2.2 實(shí)施內(nèi)容

2.2.1 偽狂犬病感染率調(diào)查：分兩次進(jìn)行，時(shí)間間隔為6個(gè)月。按后備、妊娠、哺乳母豬分類，每個(gè)類別最少采集30頭豬全血，不足30頭豬全采，種公豬全采。根據(jù)各種豬場(chǎng)豬偽狂犬病gE抗體陽性率來制定每個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)凈化實(shí)施方案。gE抗體陽性率≤5%，進(jìn)行豬偽狂犬病凈化，gE抗體陽性率＞5%則繼續(xù)免疫，每隔6個(gè)月監(jiān)測(cè)gE抗體陽性率[7]。

2.2.2 100%檢測(cè)和淘汰：對(duì)全部種豬和后備豬作偽狂犬病野毒感染檢測(cè)，淘汰gE抗體陽性個(gè)體。間隔6個(gè)月再次進(jìn)行一次gE抗體普檢，淘汰gE抗體陽性個(gè)體。

2.2.3 后續(xù)監(jiān)測(cè)：連續(xù)2次檢測(cè)gE抗體結(jié)果均為陰性者，以后每6個(gè)月進(jìn)行一次抽檢，按后備、妊娠、哺乳母豬分類，每個(gè)類別最少采集30頭豬全血，不足30頭豬全采，種公豬全采。若出現(xiàn)gE抗體陽性者，則重新采取全群檢測(cè)并淘汰手段[8]。

2.2.4 為了數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性，每次樣品的采集、檢測(cè)、陽性豬的處理均保證在7 d內(nèi)完成。

2.3 結(jié)果指標(biāo)

2.3.1 凈化標(biāo)準(zhǔn)：連續(xù)2次抽檢偽狂犬病野毒結(jié)果均為陰性且免疫抗體合格率≥70%，則該豬群為凈化豬群；否則按照凈化步驟循環(huán)進(jìn)行。

2.3.2 驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)：連續(xù)2年無臨床病例，抗體合格率≥70%，且病原學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果連續(xù)1年以上無陽性。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 抽樣調(diào)查偽狂犬病感染率及免疫抑制類疫病結(jié)果

按照豬偽狂犬病抽樣調(diào)查方案，2017年4月開展了豬偽狂犬病感染率第1次調(diào)查，9月進(jìn)行了豬偽狂犬病感染率第2次調(diào)查工作。結(jié)果見表2、表3。

表2 第1次抽樣調(diào)查檢測(cè)結(jié)果匯總

表3 第2次抽樣調(diào)查檢測(cè)結(jié)果匯總

3.2 調(diào)查免疫抑制類疫病

為了檢驗(yàn)免疫抑制類疫病對(duì)免疫的影響，在8月運(yùn)用圈舍懸掛棉繩采集口腔黏液的方法用熒光PCR檢測(cè)抗原做摸底調(diào)查（表4）。

表4 免疫抑制類疫病調(diào)查結(jié)果

3.3 凈化階段種豬全群采血檢測(cè)結(jié)果

按照豬偽狂犬病凈化方案，2018年5月和11月對(duì)A場(chǎng)進(jìn)行了兩次種豬全群采血普查，同時(shí)對(duì)B和C兩個(gè)豬場(chǎng)進(jìn)行了感染監(jiān)測(cè)，結(jié)果見表5、表6、表7。

表5 A場(chǎng)種豬偽狂犬病檢測(cè)結(jié)果（2018—2020年）

表6 B場(chǎng)種豬偽狂犬病監(jiān)測(cè)結(jié)果（2018—2020年）

表7 C場(chǎng)種豬偽狂犬病監(jiān)測(cè)結(jié)果（2018—2020年）

4 試驗(yàn)分析及討論

4.1 試驗(yàn)結(jié)果分析

4.1.1 A場(chǎng)兩次抽樣調(diào)查gE抗體陽性率都小于5%，滿足凈化條件，執(zhí)行種豬偽狂犬病凈化方案；種豬全群普查階段，第1次檢測(cè)gE抗體陽性率為0.79%（5/636），將5頭陽性種豬淘汰后，間隔6個(gè)月后的第2次全群檢測(cè)，gE抗體陽性率為0（0/627），再間隔6個(gè)月后的第3次全群檢測(cè)，gE抗體陽性率為0（0/562），連續(xù)兩次全群檢測(cè)gE抗體陽性率為0，且gB抗體都在70%以上，A場(chǎng)達(dá)到豬偽狂犬病凈化豬群標(biāo)準(zhǔn)。在2019—2020年每間隔6個(gè)月通過抽樣檢測(cè)，A場(chǎng)維持豬偽狂犬病陰性場(chǎng)。

4.1.2 B場(chǎng)在2018年兩次感染率抽樣調(diào)查時(shí)gE抗體陽性率分別為3.51%和2.52%，滿足凈化條件，本來計(jì)劃在2019年啟動(dòng)凈化措施，可是非洲豬瘟在全國(guó)暴發(fā)，B場(chǎng)執(zhí)行更嚴(yán)格生物安全措施不讓外來人員進(jìn)入，全群采血沒有人員執(zhí)行；毛豬價(jià)格上漲不愿淘汰母豬；擔(dān)心全群采血引起豬群應(yīng)激；豬群穩(wěn)定，各項(xiàng)生產(chǎn)指標(biāo)都不錯(cuò)，對(duì)豬偽狂犬病的凈化需求不高。綜合上述幾方面因素，B場(chǎng)停止凈化方案繼續(xù)進(jìn)行，執(zhí)行監(jiān)測(cè)方案。通過3年持續(xù)種豬偽狂犬病感染率監(jiān)測(cè)，陽性率維持在1.5%左右，為豬偽狂犬病穩(wěn)定控制場(chǎng)。

4.1.3 C場(chǎng)試驗(yàn)前期的兩次抽樣調(diào)查時(shí)，gE抗體陽性率分別為80.22%和72.84%，陽性率太高無法開展后續(xù)的凈化措施，在抽樣調(diào)查后采取了偽狂犬病基因缺失苗免疫、感染抗體監(jiān)測(cè)的方式重點(diǎn)監(jiān)測(cè)母豬、保育豬和肥育豬的偽狂犬病抗體水平，減少偽狂犬病對(duì)企業(yè)生產(chǎn)效益的影響。在之后3年試驗(yàn)期間持續(xù)種豬偽狂犬病感染率監(jiān)測(cè)，gE陽性率平均值維持在60%左右，為豬偽狂犬病感染凈化試驗(yàn)場(chǎng)。

4.2 試驗(yàn)小結(jié)與討論

4.2.1 應(yīng)用豬偽狂犬病基因缺失疫苗，按照既定的免疫程序?qū)嵤┟庖撸i群能夠獲得很高的免疫抗體保護(hù)力，能夠降低偽狂犬病對(duì)豬群的危害，提高經(jīng)濟(jì)效益；同時(shí)結(jié)合對(duì)應(yīng)的診斷試劑盒，能夠精準(zhǔn)鑒別免疫抗體和感染抗體豬群，市面上常見的偽狂犬病基因缺失苗和相應(yīng)診斷試劑盒可以滿足偽狂犬病凈化項(xiàng)目中相關(guān)技術(shù)指標(biāo)的要求[9]。

4.2.2 豬瘟、豬高致病性藍(lán)耳病、豬圓環(huán)病毒病等免疫抑制類疫病可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生明顯的免疫抑制，不利于偽狂犬病疫苗的免疫應(yīng)答，因此實(shí)施偽狂犬病凈化時(shí)要配合實(shí)施豬群免疫抑制病的干預(yù)措施，包括不限于采取免疫、淘汰等措施，以保證偽狂犬病凈化方案順利施行。

4.2.3 對(duì)抽樣調(diào)查中豬群gE抗體陽性率低于5%的豬場(chǎng)開展偽狂犬病凈化，嚴(yán)格按照2.2.2—2.2.4程序操作，可以實(shí)現(xiàn)豬場(chǎng)偽狂犬病的凈化，對(duì)于商洛地區(qū)其他規(guī)模相似、生物安全設(shè)施處于同一水平的豬場(chǎng)可以借鑒A場(chǎng)模式主動(dòng)開展偽狂犬病等重大動(dòng)物疫病的凈化，凈化豬場(chǎng)疫病環(huán)境，徹底控制住豬偽狂犬病等重大動(dòng)物疫病[10]。

4.2.4 種豬偽狂犬病凈化方案實(shí)施起來應(yīng)因地制宜，針對(duì)不同的豬場(chǎng)制定合理的方案并在實(shí)施過程中適時(shí)調(diào)整。在非洲豬瘟疫情影響及全國(guó)穩(wěn)定生豬生產(chǎn)形勢(shì)下，符合條件的種豬場(chǎng)開展偽狂犬病凈化工作，野毒感染率過高導(dǎo)致無法開展凈化的豬場(chǎng)應(yīng)采取加強(qiáng)免疫、加強(qiáng)監(jiān)測(cè)的方式減少偽狂犬病對(duì)豬場(chǎng)生產(chǎn)效益的影響[11]。

4.2.5 在非洲豬瘟背景下，豬場(chǎng)生物安全意識(shí)得到了極大提高，也都加強(qiáng)了生物安全體系建設(shè)，加強(qiáng)了對(duì)人員、物品、飼料、豬只、糞污流動(dòng)的控制及管理，較大規(guī)模場(chǎng)也建立自己的獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室，能夠及時(shí)監(jiān)測(cè)本場(chǎng)免疫抗體的消長(zhǎng)和疫病感染情況，可以做到疫病早發(fā)現(xiàn)、早處理，把疫病控制在小范圍，把損失控制在很低。

4.2.6 豬偽狂犬病是影響我國(guó)生豬產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的最重要疫病之一，疫苗免疫只能解決當(dāng)前疫病危機(jī)，長(zhǎng)遠(yuǎn)來看，隨著偽狂犬病等病毒新毒株的不斷出現(xiàn)和廣泛流行，不排除未來會(huì)出現(xiàn)“偽狂犬病超強(qiáng)毒”的情況，所以偽狂犬病凈化才是最終道路。而動(dòng)物疫病凈化是一個(gè)系統(tǒng)性工作，需要政府、科研單位、疫控機(jī)構(gòu)、養(yǎng)殖企業(yè)等各方共同努力，按照國(guó)家總體部署和要求，分區(qū)施策，從種源凈化。建議各級(jí)政府將“國(guó)家動(dòng)物疫病凈化創(chuàng)建場(chǎng)/示范場(chǎng)”列入政策傾斜對(duì)象，在審批、監(jiān)管上提供便利，為種畜禽場(chǎng)凈化工作提供示范。