HPLC測定安神類中成藥和保健食品中非法添加佐匹克隆的研究

林鳳屏，翁 嘉，李惠敏，劉麗婷，李錦妹，陳霞飛，歐陽珠

（惠州市食品藥品檢驗所，廣東 惠州 516003）

睡眠不足已成為困擾很多人的現代文明病，純植物或純中藥的健康產品因其溫和持久、副作用較小的優點被越來越多失眠患者選擇。一些不法分子利用西藥成分起效快、效果強等特點，擅自在保健食品中添加未標明的化學成分，提高產品功效以提高銷售量，謀取不正當利益。在保健食品相關檢測中發現安神類保健食品中添加苯二氮?類藥物（BDZ）的現象[1-4]。佐匹克隆在臨床上用于各種原因引起的失眠癥，其選擇性比BDZ更強，有更好的療效和更少的不良反應[5-7]；但作為精神類藥物，仍需在醫生的指導下服用，濫用或長期使用均會對身體造成不同程度傷害[8-11]。本文建立了高效液相色譜法（HPLC）檢測安神類中成藥和保健食品中非法添加佐匹克隆的方法，為拓展安神類中成藥和保健食品非法添加化學藥物的篩查提供實驗依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-20A高效液相色譜儀（DAD陣列檢測器，日本島津公司）；XS-205電子分析天平（梅特勒-托利多）；KQ-250超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；YB-Z真空恒溫干燥箱（天津藥典標準儀器廠）。

1.2 試藥

60家生產廠家共64批樣品（市購），其中安神類中成藥10批，保健食品54批；劑型有片劑14批、膠囊劑50批；佐匹克隆對照品（批號：100870-200801，中國食品藥品檢定研究院）；佐匹克隆原料（批號：20101201，測得含量：94.1 %，廣東順峰藥業有限公司）；乙腈為色譜純，水為純凈水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統適應性試驗

色譜柱：辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的phenomenex Luna C8（2）柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀1.36 g，加水適量溶解至1000 ml，用磷酸調pH為2.5±0.1）（17:83，v/v）；檢測波長：303 nm（如有與對照品保留時間一致的色譜峰，用DAD檢測）；流速：1.0 ml/min；進樣量20 μl；柱溫30 ℃。理論板數按佐匹克隆峰計算應不低于2000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 取佐匹克隆對照品10 mg，精密稱定，置入100 ml量瓶，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取3 ml，置入20 ml量瓶，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液 膠囊劑：取10粒內容物，混勻（片劑：取10片，研勻），精密稱定，研勻，取一次服用量的1/2，精密稱定，置入具塞錐形瓶，精密加入乙腈100 ml，密塞，稱定重量，超聲處理10 min，放冷，再稱定重量，用乙腈補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液 取不含佐匹克隆的樣品，按2.2.2項下方法制成陰性對照溶液。

2.2.4 對照品貯備液制備 精密稱取佐匹克隆原料（含量：94.1 %），加乙腈制成每1 ml含佐匹克隆0.7502 mg的溶液，作為佐匹克隆對照品貯備液。

2.3 專屬性

取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液，依法測定。結果表明：陰性對照溶液對試驗無干擾，見圖1。

圖1 HPLC色譜圖

2.4 線性關系考察

精密稱取佐匹克隆對照品加乙腈溶解并稀釋至不同濃度，取不同濃度的對照品溶液各20 μl注入液相色譜儀，以峰面積為縱坐標、佐匹克隆濃度（μg/ml）為橫坐標，得回歸方程為：y=43.0405 x+0.2649，r=0.9999。結果表明，佐匹克隆在17.982～1998 ng范圍內線性關系良好。

2.5 精密度試驗

取對照品溶液，按2.1項下的色譜條件連續進樣6次，測定峰面積的RSD為0.4 %，表明儀器精密度良好。

2.6 重復性試驗

取棗仁安睡樂寧康膠囊，精密稱取8份，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，依法測定，結果表明，平均含量為1.61 mg/粒，RSD為1.2 %，表明方法重復性良好。

2.7 穩定性試驗

取供試品溶液，分別在0，1，2，4，6，8，10 h分別進樣，記錄峰面積，測定RSD為0.1 %，結果表明，被測溶液在10 h內穩定。

2.8 檢出限和定量限測定

采用信噪比法，當對照品溶液濃度為0.5466 μg/ml，精密吸取對照品溶液5 μl注入液相色譜儀，信噪比約為3:1，即方法的最低檢測限為2.7 ng。當對照品溶液濃度為1.2422 μg/ml，精密吸取對照品溶液5 μl注入液相色譜儀，信噪比約為10:1，即方法的定量限為6.2 ng。

2.9 回收率試驗

取棗仁安睡樂寧康膠囊（平均裝量0.1855 g，含佐匹克隆1.61 mg/粒）6份，每份0.09 g，精密加入對照品貯備液1 ml，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，依法測定含量，計算回收率，結果平均回收率為100.64 %，RSD為0.7 %。表明本方法回收率良好，結果見表1。

表1 回收率試驗結果

2.10 耐用性試驗

取同一供試品（棗仁安睡樂寧康膠囊） 0.18 g，精密稱定，共2份，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，依法測定含量，考察不同品牌的同類型色譜柱[phenomenex Luna C8（2）（250 mm×4.60 mm，5 μm），Lichrospher C810 nm（200 mm×4.6 mm，5 μm），Thermo Syncronis C8（250 mm×4.0 mm，5 μm）]、同一色譜柱不同柱溫（20，30，40 ℃）和流動相不同pH值（2.2，2.5，2.8）的3種情況下，佐匹克隆含量測定結果受影響程度，結果RSD分別為0.8 %，0.4 %，0.2 %，表明方法耐用性良好。

2.11 樣品測定

取64批樣品，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件測定，結果有3批樣品檢出佐匹克隆，61批樣品未檢出。結果見表2。

表2 添加佐匹克隆的樣品含量測定結果

3 討論

通過HPLC對市售的64批安神類中成藥和保健食品進行篩查，發現3批次添加了佐匹克隆（用二級管陣列檢測器比較相應色譜峰的紫外-可見吸收光譜，吸收光譜與佐匹克隆一致），采用液質聯用儀分析驗證，結果所得質譜圖與佐匹克隆質譜圖一致，表明HPLC與液質聯用檢測結果一致。因此，本法可快速、準確檢測安神類保健食品中佐匹克隆成分，可作為檢測安神類中成藥和保健食品非法添加佐匹克隆的有效方法，為更好地打擊不法行為提供技術支持。