溫郁金對胃癌細胞的抑制作用及其對IGF-Ⅰ,IGF-Ⅱ表達的影響

胡貝爾

(湖南中醫藥大學第二附屬醫院腫瘤血液科，湖南 長沙 410000)

溫郁金作為抗腫瘤復方中較常見的一種藥物,其抗腫瘤作用已有相關報道,但是關于其對胰島素樣生長因子(insulin-like growth factor,IGF)的影響相關報道較少[1]。對此,該項目就溫郁金對胃癌細胞的抑制作用進行探討分析,且觀察其對IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ表達的影響,以期指導臨床疾病治療。現將相關情況總結報道如下。

1 材料及方法

1.1 材料

項目研究所需材料包括:(1)胃腺癌細胞(SGC-7901)株;(2)RPMI-1640培養基;(3)噻唑藍(MTT);(4)胰蛋白酶;(5)氟尿嘧啶;(6)IGF-Ⅰ放免試劑盒及IGF-Ⅱ放免試劑盒;(7)二甲基亞砜;(8)溫郁金;(9)超臨界萃取裝置;(10)二氧化碳細胞培養箱;(11)酶標儀;(12)放射免疫r計數器等。

1.2 方法

(1)細胞培養。將SGC-7901細胞放置于含100ml/L滅活胎牛血清的RPMI-1640培養液中,按照常規方法進行培養,在將其放在培養箱中開始培養,其中,培養箱的條件設置:37℃;50ml/L的二氧化碳;飽和濕度。

(2)溫郁金提取物制備。對溫郁金的有效成分進行提取處理,萃取的溫度調節40℃,壓力調節3×107Pa,時間調節120min/循環,二氧化碳流量調節50kg/h。分離1反應條件設置:壓力1.25×107Pa,溫度50℃;分離2條件:壓力5.5×106Pa,溫度40℃。得到溫郁金提取物1和2之后,基于4℃條件下,避光冷藏保存。先取適量的DMSO溶解,再用RPMI-1640培養液稀釋。

(3)MTT還原法。MTT還原法就是細胞增生抑制試驗,對數生長期細胞選用含有100ml/L胎牛血清的1640培養液進行調整,促使細胞懸液濃度達到1.0×107/L,且接種細胞于96孔培養板,200μl/孔,放置于培養箱其環境條件如下:37℃、50ml/L二氧化碳、飽和濕度。24h之后,更換成不含胎牛血清的1640培養液,繼續24h的培養,促使細胞同步化。換含濃度25mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L的溫郁金提取物1、2的完全培養液,加入濃度25mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L的5-Fu完全培養液設為陽性對照組,每一藥物濃度設置6個復孔,分別繼續培養48h,每孔加入 20μl 5g/L MTT溶液,37℃條件下孵育4h,再添加150μl DMSO,放置于微量振蕩器進行10min振蕩處理,立即通過酶標儀,對490nm波長吸光度值(A)進行檢測分析。

(4)IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ測定。對數生長期細胞選用含100ml/L胎牛血清的1640培養液進行調整,促使細胞懸液濃度5.0×107/L,接種細胞于24孔培養板中,每一孔1000μl,37℃、50ml/L二氧化碳、飽和濕度條件下進行培養,24h后,更換為不含胎牛血清的1640培養液,繼續培養24h,促使細胞同步化。換含濃度25mg/L、50mg/L、100mg/L的溫郁金提取物1、2的完全培養基,陰性對照組細胞選擇1000μl完全培養基,繼續培養48h,收集各組培養液,參照IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ放免試劑盒操作說明書,規范測定IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ濃度,通過自動r計數器直接給出相關參數。

1.3 觀察指標

觀察比較細胞抑制率及IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ濃度。其中,控制率的計算公式如下:抑制率(%)=[(陰性對照組A-空白組A)-(實驗組A-空白組A)]/(陰性對照組A-空白組A)×100%。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 抑制率

數據分析顯示,隨著劑量增加,溫郁金提取物1、2對胃癌細胞的抑制率呈增加趨勢,具有統計學意義(P<0.05),其中,200mg/L溫郁金提取物1、2與5-Fu對胃癌細胞的抑制作用差異不大(P>0.05)。如表1所示。

表1 不同藥物對胃癌細胞生長的抑制作用

2.2 IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ濃度

數據分析發現,提取物1、2的IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ含量低于對照組,差異存在統計學意義(P<0.05)。如表2所示。

表2 觀察溫郁金對IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ的影響

3 討論

溫郁金屬于姜科植物,有些呈卵形、長卵形,有些呈紡錘形。《本草綱目》記載溫郁金具有殺菌、鎮痛、利膽等功效。溫郁金的根莖經過加工處理,不僅可抗腫瘤、抗病毒、抗菌、抗血栓,而且在保肝以及增強免疫力等方面有著顯著作用[2]。近二十年來,超臨界二氧化碳萃取技術得到顯著進步,成為提取中藥有效成分的新手段,優勢明顯。該項目中,采用超臨界二氧化碳萃取技術,得到提取物1(主要含姜黃素)與提取物2(主要是揮發油成分),經MTT分析發現,且濃度增加,抑制率呈增加趨勢。細胞增生、分化及凋亡、突變等過程中,IGF發揮著重要作用。近些年,學者們就IGF在腫瘤細胞生長及發展中的作用進行了大量研究,證實IGF與多種腫瘤的發生及發展均有關。1990年,Thompson 等人最先報道人胃癌細胞系LIM-1839中可見IGF-Ⅱ。1992年,Chung and Antoniades對3個人的胃癌標本進行原位雜交法分析,結果發現IGF-Ⅰ mRNA表達[3]。該項目觀察發現,溫郁金提取物1、2對胃癌細胞培養液中的IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ有明顯影響,促使IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ含量下降,由此可推測溫郁金可通過對胃癌細胞IGF分泌的影響,發揮抗腫瘤作用。

綜上所述,溫郁金具有抑制胃癌細胞生長的作用,而且這種抑制作用可能與IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ表達存在關聯。