奧拉帕利聯合阿帕替尼對卵巢癌患者SMRP、MALAT-1水平的影響

汪笑秋，虞偉妃，趙麗萍，周玨伊，馮繼紅

(麗水市人民醫院 溫州醫科大學附屬第六醫院腫瘤內科，浙江 麗水 323000)

卵巢癌作為一種惡性腫瘤疾病，其早期缺少癥狀或癥狀不典型，易被患者忽視，早期診斷較困難。部分患者就診時已處于晚期，而晚期病例療效不佳。因此，該病的死亡率居婦科腫瘤的第一位[1-2]。目前臨床治療卵巢癌以手術治療為主，輔以化學治療、放射治療、免疫治療等[3]。奧拉帕利是多腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose poly-merase，PARP)抑制劑，可通過抑制PAPR酶對腫瘤細胞中DNA損傷的修復，從而阻滯癌變。有研究顯示，若其與抗血管生成劑聯合使用時，有助于提高療效[4]。血管生成是腫瘤生長和轉移的重要環節，抗血管生成在卵巢癌治療中具有一定成效，其中阿帕替尼為一種抗血管生成靶向藥物，在卵巢癌治療中具有一定療效[5]。目前國內外暫未發現奧拉帕利聯合阿帕替尼在卵巢癌患者治療中的報道，故在本文研究中選取2016年1月-2020年1月我院收治的200例卵巢癌患者，觀察奧拉帕利聯合阿帕替尼在卵巢癌中治療效果及對可溶性間皮素相關肽(soluble mesothelin related peptide，SMRP)、人肺腺癌轉移相關轉錄本1(metastasis associated in lung adenocarcinoma transcript 1，MALAT-1)水平的影響，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

收集2016年1月至2020年1月于我院就診的卵巢癌患者200例作為研究對象。以隨機數字表法分為奧拉帕利組(n=94)和聯合治療組(n=106)。奧拉帕利組僅采用奧拉帕利進行治療，聯合治療組采用奧拉帕利聯合阿帕替尼進行治療。納入標準：①符合《卵巢癌診療規范(2018年版)》[6]中卵巢癌診斷標準；②無炎癥、感染且可正常交流者；③預計生存期>3個月。排除標準：①合并凝血、精神異?；虬橛凶陨砻庖呒膊≌?；②治療期間未能完成隨訪者；③對研究所用藥物過敏者。所有患者及其家屬對本次研究知情且已簽署知情同意書，研究已獲得我院倫理委員會批準。

奧拉帕利組年齡為43～69歲，聯合治療組年齡為45～68歲。奧拉帕利組和聯合治療組的一般資料比較差異均無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組一般資料比較

1.2 研究方法

1.2.1 治療方法

奧拉帕利組采用奧拉帕利進行治療，200mg/d，2次/d；聯合治療組組采用奧拉帕利聯合阿帕替尼進行治療，奧拉帕利服用方法同奧拉帕利組，阿帕替尼起始劑量為500mg/次，1次/d。兩組服藥時間均為餐后30min口服，以28d為1個觀察周期。對耐受患者持續給藥至疾病進展，以4周為1個療程。分別于兩組治療開始前和1個觀察周期后采集研究對象的血液樣本，以進行相關指標檢測。

1.2.2 指標檢測

T淋巴細胞水平：采用江蘇博美達生命科學有限公司的Life Attune聲波聚焦流式細胞儀檢測T淋巴細胞水平。

腫瘤標志物及血清SMRP水平：采用酶聯免疫吸附試驗法檢測腫瘤標志物癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)、糖類抗原125(carbohydrate antigen 125，CA125)、糖類抗原153(carbohydrate antigen 153，CA153)及血清SMRP水平。實驗步驟：設置10個標準孔并準備相應水平標準品，設置1個空白孔及若干待測樣品，在10μL待測樣品中加入40μL樣本稀釋液，封板膜封板，置于37℃水浴箱溫育30min，清洗反應板5次，每次間隔30s；拍干，在除空白孔以外的各孔中加入酶標液50μL，封膜溫育30min，清洗反應板5次，每次間隔30s；拍干，在各孔中加入顯色A液、B液各50μL，輕輕震蕩混勻，37℃避光環境下顯色15min，在反應孔內加入終止液5μL/孔以終止反應，450nm波長測量每孔吸光度，查出上述指標水平。

血清MALAT-1水平：采用實時熒光定量法檢測血清MALAT-1水平。實驗步驟：將1mL TRNzol加入血清樣本取總DNA并檢測其純度和濃度，提取2μg總DNA并加入內參GAPDH及目的小分子RNA MALAT-1逆轉錄引物，42℃ 15min，85℃ 5s，逆轉錄合成cDNA；熒光定量PCR的循環參數設定為95℃每10min，然后95℃每15min，60℃每1min，一共40個循環。使用Primer 5.0軟件對引物序列進行設計，MALAT-1引物序列上游：5′-TCACTAAAGGCACCGAAGG-3′，下游：5′-CCAGAAAGAGGGAGTTGAGG-3′；內參GA PDH引物序列上游：5′-GGTGAAGGTCGGAGTCAACG-3′，下游：5′-CAAAGTTGTCATGGATGHACC-3′，Ct值(2-△△Ct)法表示MALAT-1。

1.2.3治療效果評估

治療效果評估：參照世界衛生組織(World Health Organization，WHO)實體瘤療效評估標準及國際婦科腫瘤學會(International Gynecologic Cancer Society，IGCS)卵巢癌療效判斷標準，其中完全緩解為可測量病灶消失和/或CA125值降至正常范圍維持4周以上；部分緩解為可測量病灶消失和/或CA125值下降≥50%；疾病穩定為可測量病灶消失和/或CA125值下降<50%或無變化；疾病進展為病灶大小和/或CA125值持續增長，疾病控制率=(完全緩解+部分緩解+疾病穩定)例數/總例數×100%。

遠期療效評估：對所有入組卵巢癌患者進行為期3年的電話隨訪，對比兩組1年、3年生存率。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 兩組T淋巴細胞水平比較

兩組治療前T淋巴細胞水平對比，差異無統計學意義(P>0.05)。兩組治療后CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD4+/CD8+水平均高于治療前，CD8+T細胞水平均低于治療前，差異具有統計學意義(P<0.05)。治療后，與奧拉帕利組相比，聯合治療組的CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD4+/CD8+水平均顯著增高，而CD8+T細胞水平顯著降低，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組T淋巴細胞水平比較

2.2 兩組腫瘤標志物水平比較

兩組治療前腫瘤標志物水平對比，差異無統計學意義(P>0.05)。治療后，兩組腫瘤標志物CEA、CA125、CA153的水平低于治療前(P<0.05)。與奧拉帕利組相比，聯合治療組腫瘤標志物CEA、CA125、CA153的水平均顯著降低，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組腫瘤標志物水平比較

2.3 兩組血清SMRP、MALAT-1水平比較

兩組治療前血清SMRP、MALAT-1水平對比，差異無統計學意義(P>0.05)。兩組治療后血清SMRP、MALAT-1水平低于治療前(P<0.05)。與奧拉帕利組相比，聯合治療組血清SMRP、MALAT-1水平顯著降低，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表4。

表4 兩組血清SMRP、MALAT-1水平比較

2.4 兩組治療效果比較

聯合治療組的疾病控制率為93.40%，高于奧拉帕利組的疾病控制率84.04%，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表5。

表5 兩組治療效果比較[n(%)]

2.5 兩組遠期療效比較

如表6、圖1所示，聯合治療組1年生存率、3年生存率均明顯高于奧拉帕利組，差異具有統計學意義(P<0.05)。

表6 兩組遠期療效比較[n(%)]

圖1 1年、3年生存曲線圖

3 討論

3.1 卵巢癌的臨床治療

卵巢癌是一種惡性腫瘤，其整體發病率略低于其他婦科腫瘤，但部分患者在確診時已處于晚期階段，病死率較高。目前，卵巢癌的臨床治療以手術治療為主，輔以藥物化療，加之維持治療，形成綜合治療模式。作為PARP抑制劑的代表藥物，奧拉帕利可通過抑制基因同源重組缺陷，殺死突變腫瘤細胞，治療有特異性DNA修復缺陷的腫瘤；此外，可修復化療后DNA損傷，降低血清CA125水平[7-9]。近年來，隨著分子靶向藥物研究的不斷進展，抗血管生成藥物被用于卵巢癌的維持治療。阿帕替尼是一種小分子酪氨酸激酶抑制劑，由我國自主研制，可高度地選擇性結合并抑制血管內皮生長因子受體活性。其作為新型的口服小分子抗血管生成抑制劑，臨床常將其作為晚期胃癌三線及以上治療藥物。有研究顯示，阿帕替尼可能通過阻斷血管內皮生長因子與血管內皮生長因子受體2結合及血管內皮生長因子受體2自磷酸化，抑制血管內皮生長因子在刺激內皮細胞增殖、遷移和降低微血管密度方面的功能，進而發揮其抗腫瘤的作用[10-12]。

3.2 奧拉帕利聯合阿帕替尼對卵巢癌免疫細胞及腫瘤標志物的影響

既往研究顯示，免疫功能是生物體進化、個體發育過程中相對重要的防衛能力，亦是腫瘤微環境的重要組成部分，其中腫瘤細胞通過自分泌與旁分泌促進腫瘤的生長與增殖[13]。T淋巴細胞不僅在免疫耐受中發揮著重要作用，亦在腫瘤免疫逃逸中發揮作用，多表現為CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD4+/CD8+水平下降，CD8+T細胞水平升高，表明在卵巢癌發生發展中伴隨免疫水平下降[14]。在本文研究中，經聯合治療組治療后，T淋巴細胞水平改善程度顯著優于奧拉帕利組，說明兩者聯合可提高卵巢癌患者機體免疫功能，防止腫瘤微環境向促進卵巢癌方向發展。

血清腫瘤標志物是臨床用于篩查惡性腫瘤的常用手段，其中CEA、CA125、CA153為常見的卵巢癌特異性指標，CEA是一種廣譜腫瘤標志物，CA125、CA153是糖類抗原腫瘤標志物，上述三種指標在卵巢癌診斷中具有一定價值，聯合檢測可提高腫瘤檢出率[15-16]。在本文研究中，通過對卵巢癌患者血清CEA、CA125、CA153腫瘤標志物水平進行檢測，間接反映腫瘤惡性程度，結果顯示，奧拉帕利聯合阿帕替尼在卵巢癌治療中可顯著降低腫瘤標志物水平，其原因可能為兩藥聯合可發揮互補作用，可能通過某種特定機制調節腫瘤標志物水平，但具體機制有待后續研究進一步證實。

3.3 奧拉帕利聯合阿帕替尼對卵巢癌血清指標的影響

有研究顯示，SMRP是錨定于細胞表面的MSLN經過酶修飾后的異構體，可作為篩查惡性腫瘤的血清指標之一，其在卵巢癌患者中表達水平顯著高于良性卵巢腫瘤患者[17-18]。MALAT-1長度超過8000 nt，屬于長鏈非編碼RNA，定位于染色體11q13.1，全長8.7 kb，在乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌等多種惡性腫瘤中表達異常，且在腫瘤發生、發展和轉移過程中發揮著重要功能，其表達升高對腫瘤的發生具有促進作用[19-20]。改善腫瘤患者生存情況是抗腫瘤治療的最終目的[21]。在本文研究中，奧拉帕利聯合阿帕替尼可有效降低卵巢癌患者血清SMRP、MALAT-1水平，提升隨訪期內生存率，延長生存時間，說明兩者聯合可通過下調SMRP、MALAT-1水平表達，阻滯卵巢癌進展和優化遠期結局。

綜上所述，本文研究結果顯示，奧拉帕利聯合阿帕替尼在卵巢癌治療中可降低患者血清腫瘤標志物及SMRP、MALAT-1水平，提高機體免疫功能，改善治療效果，延長生存時間，在一定程度上改善總體治療效果，值得在臨床上推廣。