肝腎補顆粒質量標準研究

段紅艷，楊 帆，陳開義

（三金集團湖南三金制藥有限責任公司，湖南 常德 415000）

0 引言

肝腎補顆粒是由三七、熟地黃、制何首烏、黨參、枸杞子、白芍、當歸、炙甘草、茯苓、黃芪、木香十一味藥材組成的復方制劑，收載于國家食品藥品監督管理總局國家藥品標準WS-5889-（B-0889）-2014Z 中，功能主治益氣養血，滋補肝腎。用于氣血兩虛，肝腎不足見有面色蒼白，神疲乏力，頭暈目眩，心悸，健忘失眠，腰膝酸軟。原標準中收載了三七、甘草、黃芪的薄層色譜鑒別，制何首烏中大黃素的高效液相含量測定，制何首烏中大黃素含量測定方法前處理復雜，采用了回流、多次蒸干等煩瑣步驟，對大黃素結果準確度有一定影響，故本文在既往研究的基礎上采用高效液相色譜法對方中白芍（以芍藥苷計）進行了含量測定，此方法更為簡便，為更好的控制肝腎補顆粒的質量提供依據。

1 薄層鑒別方法學研究及驗證

供試品處理方法：取2 袋，研細，加硫酸溶液（2mol/L）50mL，加乙醚用分液漏斗振搖提取2 次，每次30mL，分取乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇1mL 使溶解，作為供試品溶液。

對照藥材處理方法：取制何首烏藥材1g，加硫酸溶液（2mol/L）20mL，置水浴鍋中使其微沸回流1h，冷卻，同法制成對照藥材溶液。

展開劑：甲酸-乙酸乙酯-甲苯（1∶2∶15）。

吸附劑：硅膠G。

顯色：氨氣。

樣品批號：210502。

實驗結果：在與藥材薄層色譜及對照品相應的位置上顯同一顏色的熒光斑點，置氨氣熏后，日光下檢視，顯相同的紅色斑點，圖1 為制何首烏薄層鑒別。

圖1 制何首烏薄層鑒別

為驗證以上方法的專屬性，制備缺制何首烏藥材陰性樣，與肝腎補顆粒樣按上述實驗方法同法操作，在同一薄層板上分別點上缺制何首烏陰性樣、肝腎補顆粒樣和何首烏對照藥材樣，結果陰性樣在與對照藥材色譜相應的位置上沒有顯相同顏色的斑點，陰性樣其他位置上斑點與肝腎補顆粒樣基本一致；而肝腎補顆粒樣則在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點。說明該試驗方法陰性樣無干擾，專屬性強，能對肝腎補顆粒中的制何首烏進行定性鑒別。

圖2 制何首烏專屬性薄層鑒別

2 含量檢測方法學研究及驗證

2.1 儀器與試劑

儀器：島津LC-16、LC-15C 高效液相色譜儀，SPD-16、SPD-15C 紫外檢測器，Labsolutions 色譜工作站。

試劑：甲醇（色譜醇湖北弗頓科學技術有限公司）、純化水。

芍藥苷對照品（批號：110736-201640，中國食品藥品檢定研究院）。

樣品：肝腎補顆粒。

2.2 色譜條件

色譜柱：C18（250mm×4.6mm，5μm），填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠。

流動相：甲醇☆水（25☆75），檢測波長為230nm。

流速：1.0mL/min，進樣量為10μL，理論板數按芍藥苷峰計算不低于3000。

2.3 供試品制備

精密稱定本品粉末2g，先加水15mL 溶解完全。再用水飽和的正丁醇溶液用分液漏斗振搖提取4 次，每次15mL，合并正丁醇提取液，水浴蒸干，殘渣加稀乙醇適量使溶解。轉移至5mL 容量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻即得。

2.4 對照品溶液的制備

精密稱定芍藥苷對照品適量，加分析甲醇配制成每1mL 中含50μg 的溶液，即得。

2.5 樣品測定

取樣品三批，分別為160901、160902、161001 批，照上述色譜條件和上述方法測定芍藥苷的含量，測定結果如表1 所示。

表1 肝腎補顆粒中芍藥苷的含量測定結果

以上結果表明，肝腎補顆粒中芍藥苷均能被有效檢出。

2.6 方法學驗證

2.6.1 專屬性

按本處方比例，取除白芍的其他藥材，按生產工藝制備得陰性樣品，并依“供試品溶液制備”項下，同法處理后制得陰性樣品，按上述色譜條件，分別取缺白芍陰性樣，對照品溶液、供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，在上述色譜條件下進行測定，結果顯示，在陰性樣色譜圖中，芍藥苷出峰位置無其他峰干擾，如圖3～圖5 所示。

圖3 對照品溶液圖譜

圖4 樣品溶液圖譜

圖5 缺白芍陰性樣品溶液

2.6.2 精密度?

精密吸取同一對照品溶液連續進樣6 針，每次10μL，按上述色譜條件測定，結果如表2 所示。

表2 精密度試驗結果

以上結果表明本品的精密度良好。

2.6.3 線性

精密稱取芍藥苷（批號：110736-201640，以95.2%計）對照品0.0083g，置50ml 容量瓶中，加分析甲醇先溶解再稀釋到刻度，搖勻，作為對照品貯備液（Cr=158μg/mL），分別精密吸取上述貯備液1mL、3mL、5mL、7mL、10mL，分別置10mL 量瓶中，分別加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取10uL 注入液相色譜儀，照上述色譜條件，測定各濃度的色譜峰面積。以芍藥苷峰面積為圖表橫坐標（x），濃度為圖表縱坐標（y），制作標準曲線，并進行線性回歸，結果如表3、圖6 所示。

表3 線性試驗結果

圖6 芍藥苷線性試驗結果

上述結果表明，芍藥苷在15.8～158ug/mL 范圍內與峰面積呈良好線性關系。

2.6.4 準確度

精密稱取肝腎補顆粒樣品（已測定含量；批號：160901）6 份，分別精密加入芍藥苷對照品溶液，照含量測定項下方法制備供試品溶液，加稀乙醇稀釋至刻度，搖勻，得6 份供試品溶液，分別精密吸取10μL 注入液相色譜儀，按上述色譜條件，依法測定，結果如表4 所示。

表4 準確度試驗結果

以上結果表明本品的準確度良好。

2.6.5 方法耐用性試驗

按含量測定方法，分別對160901 批肝腎補顆粒采用不同牌號的色譜柱，不同型號的高效液相色譜儀分別測定芍藥苷的含量，計算，測定結果如表5、表6 所示。

表5 方法耐用性試驗結果（一）

表6 方法耐用性試驗結果（二）

以上結果表明方法耐用性試驗良好。

3 結語

以上試驗研究結果表明，肝腎補顆粒樣品中的芍藥苷能被有效檢出，且方法學驗證表明該含量測定方法可行。選取了湖南三金制藥有限責任公司歷年生產的肝腎補顆粒按此方法進行含量測定，均能有效檢出。此方法可納入企業內控標準，便于更好更便利的控制產品質量。