肺腺癌CT征象與Ki67、PNCA及p53蛋白的相關性

盧艷麗 萬宏燕 吳俊

肺癌根據(jù)其發(fā)病機制、臨床病理不同可分為腺癌、鱗癌等多種類型。據(jù)相關數(shù)據(jù)顯示，目前肺腺癌所占比例已超過肺鱗癌，成為肺癌的主要病理類型［1］。CT 檢查可有效反映出患者肺部改變情況，其影像學征象有助于臨床診斷，是臨床早期篩查診斷肺腺癌的有效手段。目前關于肺腺癌的病理機制尚未明確，隨著研究不斷深入，有學者發(fā)現(xiàn)多生物學因子與肺腺癌的發(fā)生、發(fā)展間存在著密不可分的聯(lián)系，認為腫瘤的生長與其增殖形態(tài)和影像學表現(xiàn)相關［2］。Ki67 蛋白屬于腫瘤細胞增殖活性評估的重要參考指標，在癌變組織中惡性程度越高，Ki67 蛋白的表達越強［3］。增殖細胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PNCA）也稱為周期蛋白，其合成情況與細胞的周期有密切性關系，是腫瘤細胞增殖的重要指標［4］。多數(shù)腫瘤患者中可見p53基因出現(xiàn)結構與表達的異常，p53基因突變后可導致細胞無限增長，同時可促使腫瘤細胞增生［5］。本研究旨在分析Ki67、PNCA、p53 蛋白與肺腺癌CT 征象之間的關系，為臨床診斷提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年8月至2021年1月北京市隆福醫(yī)院收治的187 例肺腺癌患者臨床資料，均在手術后病理證實為肺腺癌者，以患者癌組織作為觀察組，取距離癌組織5 cm 處癌旁組織作為對照組。其中男141 例，女46 例，平均年齡（55.16±4.15）歲，病理分級：Ⅰ級58 例，Ⅱ級89 例，ⅢI 級40 例［6］。納入標準：①所有患者臨床資料完整，術前均進行CT檢查；②臨床資料完整；③經(jīng)術后病理檢查證實為肺腺癌，符合《國際肺癌研究協(xié)會/美國胸科學會/歐洲呼吸學會肺腺癌的國際多學科分類》中相關診斷標準［6］；④自愿加入本次研究，均簽署知情同意書。排除標準：①入院前進行過分子靶點或放療等；②合并其他部位腫瘤者；③非首次手術治療者。本研究經(jīng)院醫(yī)學倫理委員會批準通過。

1.2 方法

1.2.1 Ki67、PNCA、p53 蛋白檢測

Ki67、PNCA、p53 均使用免疫組化法進行檢測，鼠抗人Ki-67 抗原免疫組化單克隆抗體、鼠抗PNCA（PC10）單克隆抗體、鼠抗人p53 蛋白免疫組化單克隆抗體均為福州邁新生物技術公司提供。實驗中以空白實驗替代陰性對照，以已知陽性切片作為陽性對照。

結果判讀：Ki67：細胞核內有棕黃色顆粒為陽性；PNCA：細胞核呈清晰棕色為陽性；p53：細胞核內有棕黃色顆粒為陽性。高倍鏡下（×400）5 個視野中的陽性細胞＜4%為0 分、4%～24%為1分、＞24%～49%為2 分、＞49%～74%為3 分、≥75%為4 分；染色強度：0 分為無色、1 分為淡黃色、棕黃色為2 分、棕褐色為3 分。根據(jù)兩結果相加得分計算：積分低于3 分為陰性，3 分以上則為陽性，得分越高，陽性表達越高［7］。

1.2.2 CT 檢查

檢查儀器：采用西門子64 排多層螺旋CT。掃描范圍：選取相應的序列進行掃描，掃描范圍胸鎖關節(jié)到橫膈。掃描參數(shù)：管電壓為120 kV，掃描層厚為7 mm，層距7 mm，螺距為1.375∶1，掃描視野為25 cm×25 cm。行平掃和增強掃描，在平掃后使用雙筒高壓注射器（英國Mallinckrodt 公司產(chǎn)品），以5 mL/s的流率經(jīng)肘靜脈團注入非離子型對比劑碘普胺注射液（優(yōu)維顯）50 mL，等滲鹽水40 mL，延遲掃描時間為13～16 s 雙期或三期掃描。掃描完成后使用相關圖像處理工作站，由2 名專業(yè)醫(yī)生進行診斷判斷。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 28.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料采用（±s）表示；計數(shù)資料采用n（%）表示，并采用χ2檢驗；以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不同組織中Ki67、PNCA、p53蛋白表達情況比較

觀察組中Ki67、PNCA、p53 蛋白表達陽性率明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1、圖1。

圖1 Ki67、PNCA、p53 蛋白高倍鏡下免疫組化圖（SP，×400）Figure 1 Ki67，PNCA，p53 protein under high magnification immunohistochemical map（SP，×400）

2.2 187 例患者CT 表現(xiàn)

患者典型CT 圖像可見：病灶多為實性結節(jié)，形態(tài)不規(guī)則，邊界不清晰，同時可見胸膜凹陷征、毛刺征、空泡征、分葉征、胸腔積液。見圖2。

圖2 肺癌患者CT 典型表現(xiàn)Figure 2 typical CT findings of patients with lung cancer

2.3 不同CT 征象中Ki67 表達情況比較

有分葉征、毛刺征患者Ki67 表達陽性率明顯高于無分葉征、毛刺征患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。有分葉征、胸膜凹陷征、空泡征患者PNCA 表達陽性率明顯高于無分葉征、胸膜凹陷征、空泡征患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。有毛刺征、腫瘤邊界不清晰患者p53 表達陽性率明顯高于無毛刺征、腫瘤邊界清晰患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 不同CT 征象中Ki67 表達情況比較［n（%）］Table 2 Comparison of Ki67 expression in different CT signs［n（%）］

3 討論

肺癌分子水平的改變可通過臨床、病理方面的一些指標反映出來，而能否通過宏觀檢測方法在術前了解其蛋白水平的變化是近幾年人們研究的重點之一。肺癌的主要臨床表現(xiàn)有咳嗽、咳痰、咯血等，由于其生長方式不同，所表現(xiàn)的CT 征象也存在一定差異。在本研究中，CT 檢查中可見患者病灶多為實性結節(jié)，形態(tài)不規(guī)則，邊界不清晰，同時可見胸膜凹陷征、毛刺征、空泡征、分葉征、胸腔積液。

Ki67 是一種增殖細胞相關的核抗原，可反映出腫瘤的惡性程度以及侵襲力。研究顯示，在肺腺癌患者中Ki67 表達明顯增加，且Ki67 高表達者復發(fā)率也越高，總生存率則明顯降低，預后情況不理想，因此，認為Ki67 高表達者在手術治療后仍需積極進行輔助治療［8］。也有研究顯示，癌細胞的分化程度和其抗原抗體反應中Ki67 抗原陽性的檢出率為負相關［9］。本研究結果發(fā)現(xiàn)，肺腺癌病理組織中Ki67 陽性表達明顯高于癌旁組織，且在有分葉征、毛刺征患者中為高表達，可能與Ki67 高表達可促進細胞增殖有關。Ki67 作為細胞周期調節(jié)的重要因子，表達高低與肺癌的發(fā)生、發(fā)展有密切聯(lián)系，可為臨床評估腫瘤細胞增長提供相關參考［10］。

PNCA 是DNA 聚合酶的輔助蛋白，在細胞周期G1/S 期中合成，在M 期會降到最低水平，對DNA 合成以及細胞增生有重要的調節(jié)作用［11］。有研究發(fā)現(xiàn)，PNCA 作為與細胞增殖相關的核內因子，其與肺癌分化程度密切相關，分化程度越低的肺癌其PNCA 表達越高，提示PNCA 可為肺癌惡性程度、分化程度評估提供參考［12］。在本研究中，PNCA 在癌組織中表達明顯高于正常組織，且在有分葉征、胸膜凹陷征、空泡征患者PNCA 表達明顯升高，提示PNCA 在肺癌發(fā)展過程中具有一定的促進作用，應加強對這一類患者的綜合治療，以便獲得良好的手術治療效果。

有研究發(fā)現(xiàn)，一旦p53基因發(fā)生突變，p53 蛋白失活，細胞分裂失去節(jié)制，可導致癌變發(fā)生，人類癌癥中約有一半是由于該基因發(fā)生突變失活導致，p53也是迄今發(fā)現(xiàn)與人類腫瘤相關性最高的基因［13-14］。有研究認為p53基因的表達與肺癌之間存在密切的聯(lián)系，p53基因突變后可促進癌細胞增長，并影響細胞內蛋白降解，進而促進腫瘤發(fā)生轉移［15］。本研究中發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，觀察組中p53 陽性表達明顯上升，且有毛刺征、腫瘤邊界不清晰患者中p53 表達陽性率明顯高于無毛刺征、腫瘤邊界清晰者。毛刺征是由于腫瘤間質、血管向瘤外生長與腫瘤細胞向周圍蔓延所致，此種現(xiàn)象表明腫瘤具有較強的浸潤及轉移能力，而存在毛刺征及腫瘤邊界不清晰者中p53 表達均明顯增高，可能與p53 可刺激癌細胞增長有關［16］。

綜上所述，Ki67、PNCA、p53 蛋白表達情況與肺腺癌CT 征象存在一定相關性，對肺腺癌的早期診斷及預后評估有一定的參考價值。