E-cad、TIMP-2及OPN對甲狀腺癌患者病情進展及預后的價值

白建云 張菁 劉小靜

甲狀腺癌是頭頸部常見的腫瘤之一，占人類所有惡性腫瘤的1%［1］。上皮細胞鈣粘附蛋白（E-cadherin，E-cad）是一種跨膜蛋白，在腫瘤發(fā)生、侵襲、轉移中發(fā)揮重要作用［2］。基質金屬蛋白酶抑制劑-2（Tissne inhibitor of matalloproteinase-2，TIMP-2）是內源性的廣泛分布的天然抑制劑，研究發(fā)現(xiàn)TIMP-2 在腫瘤及間質組織中均有表達，且對腫瘤細胞的生長、繁殖、凋亡等發(fā)揮多樣性作用［3］。骨橋蛋白（Ostepontin，OPN）是近年來發(fā)現(xiàn)的一種多功能分泌型磷酸化糖蛋白，既往研究報道，在甲狀腺癌患者中，OPN 陽性率較高［4］。本研究旨在探討E-cad、TIMP-2 及OPN 對甲狀腺癌患者病情進展及預后的價值，以期為臨床評估甲狀腺癌病情進展、預后提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年5月至2018年5月北京市房山區(qū)中醫(yī)醫(yī)院收治的174 例甲狀腺癌（174 份甲狀腺癌組織標本）患者作為癌組織組。納入標準：①均符合甲狀腺癌的診斷標準，并經病理檢查確診［5］；②未合并其他部位惡性腫瘤；③臨床資料及隨訪資料完整。排除標準：①合并血液系統(tǒng)疾病者、重要器官嚴重疾病者；②認知功能障礙者；③妊娠期、哺乳期女性。選取同期在本院進行手術治療的141 例甲狀腺瘤患者（141 份甲狀腺瘤組織標本）作為腺瘤組織組。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表1。所有患者均已簽署知情同意書，研究通過院醫(yī)學倫理委員會批準。

表1 兩組一般資料比較［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of general information between the two groups［n（%），（±s）］

表1 兩組一般資料比較［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of general information between the two groups［n（%），（±s）］

組別癌組織組腺瘤組織組t/χ2值P 值n 性別男72（41.38）59（41.84）0.007 0.934女174 141 102（58.62）82（58.16）平均年齡（歲）56.12±4.12 56.85±4.28 1.537 0.125病理分型乳頭狀癌121（69.54）濾泡狀癌53（30.46）TNM 分期T1～T2 期41（23.56）T3～T4 期133（76.44）

1.2 方法

1.2.1 E-cad、TIMP-2 及OPN 檢測方法

采用免疫組化染色法檢測兩組標本E-cad、TIMP-2 及OPN 表達情況。每例組織蠟塊均切片4張，厚度約4 μm，標本均經甲醛溶液固定，石蠟包埋、載玻片泡酸、DAB 顯色劑顯色，蘇木精復染，乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。操作步驟嚴格按照試劑說明書進行。E-cad、TIMP-2 及OPN兔多克隆抗體均采購自美國Epitomics 公司。

1.2.2 判定標準

E-cad、TIMP-2 及OPN 免疫組化陽性判定標準［6］：細胞胞質或細胞核中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒，反之則為陰性。陽性細胞比例評分：≤5%為0分，＞5%～25%為1 分，＞25%～50%為2 分，＞50%～75%為3 分，＞75%為4 分；染色強度評分：未染色為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3分。染色指數(shù)=陽性細胞比例評分+染色強度評分，≥2 分則判為陽性。

1.3 隨訪

以門診復查或電話隨訪的方式對174 例甲狀腺癌患者隨訪3年（隨訪截止時間2021年5月），了解不同E-cad、TIMP-2、OPN 表達的甲狀腺癌患者預后生存、死亡率。

1.4 統(tǒng)計學方法

使用SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料通過n（%）表示，并采用χ2檢驗；計量資料通過（±s）表示，使用t檢驗；采用受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC）評估診斷價值，計算曲線下面積（area under curve，AUC），AUC 值越高，診斷價值越高；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組E-cad、TIMP-2、OPN 陽性率比較

癌組織組E-cad 陰性率及TIMP-2、OPN 陽性率高于腺瘤組織組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組E-cad、TIMP-2、OPN 陽性率比較［n（%）］Table 2 Comparison of the positive rates of E-cad，TIMP-2 and OPN between the two groups［n（%）］

2.2 不同病理參數(shù)的甲狀腺癌患者E-cad、TIMP-2、OPN 表達情況

E-cad 陰性及TIMP-2、OPN 陽性的患者病理分類為乳頭狀癌、TNM 分期為T3～T4、有淋巴結轉移、腫瘤數(shù)目為多個的患者占比高于E-cad 陽性及TIMP-2、OPN 陰性的患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 不同病理參數(shù)的甲狀腺癌患者E-cad、TIMP-2、OPN 表達情況［n（%）］Table 3 Expression of E-cad，TIMP-2，OPN in patients with thyroid cancer with different pathological parameters［n（%）］

2.3 不同預后的甲狀腺癌患者E-cad、TIMP-2、OPN 表達情況

隨訪率100%，隨訪期間死亡33 例（18.97%），生存141 例（81.03%）。E-cad 陰性表達、及TIMP-2、OPN 陽性表達的甲狀腺癌患者死亡率顯著高于E-cad 陽性表達及TIMP-2、OPN 陰性表達的患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4 不同預后的甲狀腺癌患者E-cad、TIMP-2、OPN 表達情況［n（%）］Table 4 The expression of E-cad，TIMP-2 and OPN in patients with thyroid cancer with different prognosis［n（%）］

2.4 聯(lián)合E-cad、TIMP-2、OPN 檢查對甲狀腺癌患者預后死亡的預測價值

聯(lián)合E-cad、TIMP-2、OPN 檢查對預測甲狀腺癌患者預后死亡的靈敏度（0.896）、特異度（0.912）、AUC（0.988）均高于單一指標檢測（P＜0.05）。見表5、圖1。

圖1 預測價值Figure 1 The predictive value

表5 聯(lián)合E-cad、TIMP-2、OPN 檢查對甲狀腺癌患者預后死亡的預測價值Table 5 The predictive value of combined E-cad，TIMP-2 and OPN examinations on the prognostic death of patients with thyroid cancer

3 討論

甲狀腺癌是普外科常見疾病，治療方案以手術治療為主。研究發(fā)現(xiàn)，早期甲狀腺癌手術治療預后較好，術后20年生存率約80%，但中晚期甲狀腺癌患者術后5年生存率僅為50%［7］。提高甲狀腺癌早期診斷率，并盡早實施手術治療可顯著延長患者生存期。

有學者發(fā)現(xiàn)，甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展與細胞內的某些蛋白表達缺失或上調有關［8］。E-cad 是一種鈣依賴性糖蛋白，已有研究證實在乳腺癌、腸癌、結直腸癌、甲狀腺癌等惡性腫瘤中都存在E-cad 表達下調［9］。TIMP-2 蛋白是由多種腫瘤細胞產生并分泌的蛋白，主要位于胞漿內，TIMP-2 陽性率升高會促進腫瘤細胞增殖和分化。OPN 屬于Th1 類細胞因子，廣泛分布于多種組織和細胞中，既往文獻報道，OPN 是與細胞惡性轉化有關的磷酸蛋白，其與腫瘤侵襲轉移的關系已引起臨床學者的廣泛關注［10］。本次研究結果顯示：癌組織組E-cad 陰性率及TIMP-2、OPN 陽性率高于腺瘤組織組，與既往研究結果相符［11］。提示臨床可通過聯(lián)合E-cad、TIMP-2、OPN 檢測，為甲狀腺癌診斷提供依據(jù)，也可針對E-cad、TIMP-2、OPN 開展分子靶向治療，為甲狀腺癌的治療提供新方向。

國外研究指出，E-cad 陽性表達率下降會促使腫瘤細胞脫離原發(fā)病灶，進入周圍組織及血管，加速腫瘤遠處轉移［12］。一項關于肺癌細胞放射敏感性機制研究顯示，TIMP-2 具有促使肺部惡性腫瘤細胞增殖和分化的作用［13］。OPN 作為腫瘤轉移的媒介，可發(fā)揮生物學特性促進殘留細胞生長、增殖［14］。本次研究發(fā)現(xiàn)，E-cad 陰性及TIMP-2、OPN陽性的患者病理分類為乳頭狀癌、TNM 分期為T3～T4、有淋巴結轉移、腫瘤數(shù)目為多個的患者占比要高于E-cad 陽性及TIMP-2、OPN 陰性的患者。可見隨著E-cad 陰性表達率及TIMP-2、OPN陽性表達率升高，甲狀腺癌生殖速度更快，轉移性可能越大，腫瘤分期越高。

E-cad 在誘導細胞分化、促進細胞凋亡的過程中，患者全身器官、組織均會受到腫瘤細胞的攻擊，從而導致器官、組織損傷，進一步加重病情，減短生存時間［15］。TIMP-2、OPN 可通過促進血管基底膜的分解，誘導血管網形成，并抑制細胞凋亡，繼而促進腫瘤發(fā)生與轉移［16］。本研究隨訪資料顯示，E-cad 陰性表達、TIMP-2 及OPN 陽性表達的甲狀腺癌患者死亡率顯著高于E-cad 陽性表達及TIMP-2、OPN 陰性表達的患者。推測E-cad、TIMP-2 及OPN不僅參與甲狀腺癌的發(fā)生，也可能與甲狀腺癌病情進展、預后密切相關。ROC 曲線結果顯示，聯(lián)合E-cad、TIMP-2、OPN 檢查對預測甲狀腺癌患者預后死亡的靈敏度、特異度、AUC 均高于單一指標檢測。由此可見，E-cad、TIMP-2、OPN 聯(lián)合檢測可作為預測甲狀腺癌患者預后死亡的標志物。

綜上所述，E-cad、TIMP-2、OPN 三者參與甲狀腺癌患者病情進展的過程，臨床可通過聯(lián)合三項指標檢測評估甲狀腺癌患者預后。