中草藥對奶牛乳房炎致病菌的體外抑菌效果試驗

何顯杰

清豐縣農業農村局，河南清豐 457300

0 引言

奶牛乳房炎是奶牛乳腺組織發生病理機能變化的防御應答反應[1]，大多數病例由病原微生物侵染奶牛機體內部而引發，對奶牛泌乳性能、乳汁理化特性和生理繁殖機能等造成不利影響，成為奶牛疾病防控的重要內容。致病性細菌是奶牛乳房炎的主要致病因子，種類較多，盡管奶牛乳房炎致病菌存在區域差別，但金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌和大腸桿菌是引起奶牛乳房炎的主要致病菌，約占細菌性乳房炎的70%以上[2]。在長期獸醫臨床治療中，抗生素在防控細菌性奶牛乳房炎方面發揮了重要作用，但也帶來了牛奶抗生素殘留超標、耐藥菌株不斷增多等嚴重問題。

中草藥來源廣泛，存在于動植物和礦石等中，具有無毒或低毒、無污染、無殘留和無耐藥性等諸多優勢[3]。很多中草藥表現抗毒素和抑菌的藥物功效，能夠提高動物免疫力和機體的抗病能力，是很好的抗生素替代品。本試驗根據中獸藥理論，結合乳房炎致病機制，按照“清熱解毒、抗菌消炎、消腫止疼和通經利乳”的配伍原則，選取10 種中草藥應用于奶牛乳房炎金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌和大腸桿菌的體外抑菌試驗，旨在篩選抑菌效果顯著的中草藥，為臨床防治奶牛乳房炎的中草藥研制和應用提供技術支持。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 中草藥

板藍根、蒲公英、紫花地丁、黃連、連翹、黃芩、金銀花、魚腥草、紅花和大青葉，購自濮陽市天業藥店。分別稱取上述中草藥20 g，用去離子水浸泡2～3 h，猛火煮開后調為文火，煮30 min，過濾，藥渣中再加去離子水，煮20 min，過濾。2 次藥液合并濃縮至藥液濃度為1 g/mL，分裝于玻璃瓶，4 ℃保存，備用。

1.1.2 菌株和培養基

金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和無乳鏈球菌來自清豐縣部分奶牛場乳房炎奶牛，經分離鑒定得到。普通肉湯培養基、營養肉湯培養基（含2%小牛血清）由濮陽市動物疫病控制中心提供。

用接種環無菌挑取金黃色葡萄球菌和大腸桿菌接種于普通肉湯培養基，無乳鏈球菌接種于營養肉湯培養基（含2%小牛血清），37 ℃培養18～24 h，3 種菌液復壯后，在紫外可見光光度計下比色，將波長調至625 nm處進行稀釋菌液，當吸光度值為0.08～0.1時細菌濃度為1×108～2×108CFU/L即可，備用。

1.1.3 試驗儀器

無菌操作臺、高壓滅菌鍋、紫外可見分光光度計UV5，梅特勒托利多科技（中國）有限公司；恒溫箱、打孔器（孔徑Φ＝3 mm）等，本實驗室提供。

1.2 抑菌試驗

根據參考文獻[4]，采用試管二倍稀釋法測定中草藥對3 種細菌的最低抑菌濃度（MIC）。體外抑菌試驗：取30 支5 mL滅菌試管，分成3組（1 種菌液1組），每組10 支試管，分別標記1～10號，每組每個試管中裝入1 mL營養肉湯培養基，另在每組1號試管添加1 mL中草藥液，搖勻，吸取1 mL混合液加入2號試管，以此類推，至8號試管（棄去1 mL），9號試管設為菌液空白對照，不添加中草藥液，10號試管設為中草藥液對照，不添加菌液。分別吸取0.05 mL制備后的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和無乳鏈球菌加入每組每個試管中，37 ℃培養24 h，與空白對照比較，以肉眼觀察培養基清亮且未見細菌生長的最低濃度判定為該藥物的最低抑菌濃度（MIC）。每組3 個重復，取重復數值多者為MIC值。

2 試驗結果

2.1 中草藥對金黃色葡萄球菌的抑菌試驗結果

連翹對金黃色葡萄球菌的抑菌效果最好，MIC為15.63 mg/mL，其次為板藍根、蒲公英、紫花地丁、黃芩、金銀花、大青葉，MIC均為31.25 mg/mL（表1）。

表1 中草藥對金黃色葡萄球菌抑菌試驗結果

2.2 中草藥對大腸桿菌抑菌試驗結果

板藍根、蒲公英和黃芩的MIC最低，為62.5 mg/mL，抑菌效果最好，其次為紫花丁、連翹、金銀花和魚腥草，MIC為125 mg/mL（表2）。

表2 中草藥對大腸桿菌抑菌試驗結果

2.3 中草藥對無乳鏈球菌的抑菌試驗結果

紫花丁的MIC最低為15.63 mg/mL，抑菌效果最好，其次為板藍根、蒲公英、紫花丁、連翹、黃芩和金銀花，MIC為31.25 mg/mL（表3）。

表3 中草藥對無乳鏈球菌的抑菌試驗結果

3 討論

細菌是引起奶牛乳房炎的主要病原微生物，因此，殺滅或者抑制細菌生長繁殖是防治該病的關鍵。在我國實行飼料禁抗的大趨勢下，中草藥含有許多天然生物活性成分，抗菌消炎效果較好，是抗生素替代品的主要研究方向。謝成運等[5]應用黃芩、黃連、丹參、連翹等對奶牛乳房炎主要致病菌體外抑菌試驗，發現中草藥對金黃色葡萄球菌抑菌效果較好。百合地開力地等[6]報道，金銀花、魚腥草、紅花等對奶牛乳房炎主要致病菌（大腸桿菌、鏈球菌和綠膿桿菌等）的最小抑菌濃度均為15.63 mg/mL；丁月云等[7]研究發現，黃芩、大青葉、連翹等對豬大腸桿菌、金黃色葡萄球菌抑菌效果顯著。朱曉萍等[8]研究黃連等中草藥對常見病原菌的體外抑菌效果，結果顯示，所選10 種中草藥對奶牛乳房炎源金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和無乳鏈球菌均有不同程度的抑菌效果。本試驗結果顯示，連翹對金黃色葡萄球菌的抑菌效果最好，MIC為15.63 mg/mL；板藍根、蒲公英和黃芩對大腸桿菌抑菌效果最好，MIC為62.5 mg/mL；紫花丁對無乳鏈球菌抑菌效果最好，MIC為15.63 mg/mL。與上述學者研究結果相同或近似。但是，體外抑菌試驗對中草藥的抗菌作用只能是一種參考性的方法，其實際臨床應用效果還必須通過動物體內試驗加以比較、驗證，從而進一步闡明其抑菌機理。

4 結論

本試驗10 種中草藥對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和無乳鏈球菌均具有不同程度的抑菌特性。該試驗結果對臨床應用中藥防治奶牛乳房炎病具有一定的積極意義，為進一步篩選效果良好的抗菌中藥復方提供參考。