HPV亞型分布、病毒載量與宮頸癌臨床分期及病理分化程度的相關性分析

王麗媛，韓 燁

（1. 泗洪縣疾病預防控制中心，江蘇 泗洪 223900 ；2. 泗洪醫院婦產科，江蘇 泗洪 223900）

宮頸癌是一種較為常見的婦科惡性腫瘤，近年來其發病年齡呈現年輕化趨勢，嚴重威脅女性的生命健康[1]。研究顯示，宮頸癌發生發展的病理因素與高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）感染具有一定的相關性[2]。HPV 是—種環狀的雙鏈DNA 病毒，HR-HPV病毒DNA 多以整合的形式存在于機體細胞中。目前HR-HPV 感染已被公認為是導致宮頸癌發生的主要因素[3]。據統計，有80% 以上的女性存在HPV 感染，大多數HPV 感染可自行消除，少數HPV 感染會持續存在，引起宮頸細胞病變，從而進展為宮頸癌。研究指出，HPV 病毒載量與宮頸病變的嚴重程度存在一定的相關性，隨著HPV 病毒載量的不斷增加，宮頸病變的危險性也會逐漸加大。但目前國內外關于宮頸癌與HPV 亞型分布、病毒載量及臨床分期、病理分化程度相關性的研究報道較少。鑒于此，本研究探討了HPV 亞型分布、病毒載量與宮頸癌臨床分期及病理分化程度的相關性，旨在為宮頸癌患者的病情評估及HPV 疫苗接種提供參考依據。

1 資料與方法

1.1 基線資料

本文的研究對象是2017 年1 月至2020 年7 月泗洪醫院收治的60 例宮頸癌患者。其年齡為23 ～65 歲，平均（52.46±7.82）歲；國際婦產科聯盟（FIGO）分期：Ⅰ期12 例，Ⅱ期30 例，Ⅲ期18 例；組織學分化程度：低分化9 例，中分化36 例，高分化15 例。本研究通過醫院醫學倫理委員會許可，且患者均簽署了知情同意書。

1.2 納入及排除標準

納入標準：1）經病理學檢查確診為宮頸癌者；2）未行手術、放化療及靶向治療者；3）未合并其他威脅生命安全疾病者。排除標準：1）患轉移性宮頸癌者；2）合并精神異常者；3）異常陰道出血者；4）病歷資料缺失者。

1.3 方法

1.3.1 標本采集 指導患者取膀胱截石位，采集前將尿道口和宮頸口的分泌物拭去，用窺陰器將陰道撐開，充分暴露宮頸。使用棉拭子在宮頸外口輕壓，順時針旋轉拭子3 ～4 圈，取得脫落的宮頸細胞。將采樣棉拭子分裝在盛有1 mL 無菌生理鹽水的保存液中，于4℃條件下保存待檢。

1.3.2 樣本處置 1）樣本預處理：取出待測樣本，置于離心機中離心5 min，收集沉淀物。2）DNA 提取：將陰性對照和陽性對照分別加入到2 個離心管中，加入50 μL HPV DNA 提取液，震蕩混勻后進行沸水浴操作，時間為10 min。將樣本置于離心機中離心10 min，收集上清液。3）DNA 樣品保存：立即檢測時于4℃條件下保存DNA 樣品；超過24 h 檢測時將DNA 樣品保存在-20℃條件下。

1.3.3 PCR 擴增 配制PCR 反應混合液，加樣后進行PCR 擴增。

1.3.4 DNA 雜交 先對試劑進行預熱，再行基因芯片定位，然后進行預雜交、變性、中和雜交、清洗等操作。

1.3.5 顯色 準備試劑，行酶標、清洗、顯色、風干、檢測分析等操作。

1.3.6 HPV 病毒載量檢測 采用基因芯片法對HPV 病毒載量進行檢測。

1.4 觀察指標

觀察60 例宮頸癌患者HPV 的陽性率及HPV 亞型的分布情況。HPV 陽性判斷標準[4]：HPV 陰性：信 號 強 度（INS）＜11.1 ；HPV 陽 性：INS ≥11.1。HPV 亞型包括18 種高危亞型和5 種低危亞型，高危亞型為HPV16 型、18 型、31 型、33 型、35 型、39型、45 型、51 型、52 型、53 型、56 型、58 型、59 型、66 型、68 型、73 型、83 型、MM4 型，低危亞型為HPV6 型、11 型、42 型、43 型、44 型。 分 析HPV亞型與宮頸癌臨床分期及病理分化程度的關系。宮頸癌臨床分期：按照FIGO 標準進行分期[5]。分析HPV病毒載量與宮頸癌臨床分期及病理分化程度的關系。

1.5 統計學方法

2 結果

2.1 60 例宮頸癌患者HPV 的陽性率及HPV 亞型的分布情況

在60 例宮頸癌患者中，HPV 陽性患者有42 例，HPV 陰性患者有18 例，其HPV 的陽性率為70.00%（42/60）。在HPV 陽性患者中，HPV16 型患者有30例（占71.43%），HPV18 型患者有3 例（占7.14%）、HPV52 型患者有2 例（占4.76%）、HPV58 型患者有2 例（占4.76%）、HPV11 型、33 型、35 型、68 型、83 型患者有各1 例（各占2.38%）。詳見表1。

表1 60 例宮頸癌患者HPV 的陽性率及HPV 亞型的分布情況

2.2 HPV 亞型與宮頸癌臨床分期及病理分化程度的關系

本研究中HPV16 型是患者感染的最主要HPV亞型，故僅針對HPV16 型與宮頸癌臨床分期及病理分化程度的關系進行研究。HPV16 型中，宮頸癌各臨床分期之間無統計學差異（P＞0.05）；HPV16 型中，宮頸癌不同臨床病理分化程度之間有統計學差異（P＜0.05）。詳見表2。

表2 HPV 亞型與宮頸癌臨床分期及病理分化程度的關系（例）

2.3 HPV 病毒載量與宮頸癌臨床分期及病理分化程度的關系

HPV 病毒載量的高低與宮頸癌各臨床分期、病理分化程度之間均無統計學差異（P＞0.05）。詳見表3。

表3 HPV 病毒載量與宮頸癌臨床分期及病理分化程度的關系（例）

3 討論

目前臨床上關于宮頸癌的發病原因尚未完全明確，一般認為本病是由多種因素導致的病理結果。目前已知感染HPV 是導致宮頸癌發生的獨立危險因素。HPV 的傳播途徑主要有性接觸傳播（通過性行為傳播，為HPV 最重要的傳播途徑）、間接接觸傳播（如接觸HPV 患者使用過的物品）和母嬰傳播（即垂直傳播）。HPV 在人體內多以兩種形式存在，分別為游離和整合狀態，表現形式為無癥狀潛伏感染、急性感染、整合狀態[6]。研究顯示，在宮頸良性病變與癌前病變中，HPV 病毒DNA 常以獨立于宿主基因的近游離形式存在[7-8]；在宮頸癌中，HPV 病毒DNA 多以單拷貝或多拷貝形式整合于人體的細胞基因組中，從而導致宿主基因組發生改變，使宿主染色體不穩定，激活相關癌基因，并使抑癌基因失活，從而導致細胞因增殖、凋亡而發生癌變[9]。目前國內外關于HPV 感染、病毒載量與宮頸癌發病的研究報道較少。國外文獻報道，有50% 左右的宮頸癌患者可檢測出HPV 感染[10]。現階段，關于HPV 病毒載量與宮頸癌發生發展的相關性存在一定的爭議[11]。通常認為，HPV 病毒載量越高，HPV 的DNA 復制越活躍，機體的HPV越難被清除，從而可引起持續性HPV 感染[12-13]。因此，一些學者認為HPV 病毒載量可預測HPV 感染患者宮頸病變的程度。研究顯示，HPV 感染與宮頸鱗癌的臨床病理無相關性[14]。本研究的結果顯示，60 例宮頸癌患者HPV 的陽性率為70.00%（42/60），其中HPV16 型占71.43%。不同HPV 亞型在宮頸癌病理分化程度中的分布差異有統計學意義（P＜0.05），但在FIGO 分期中的分布差異無統計學意義（P＞0.05）。相關的研究指出，HPV 亞型在不同地域存在較大的差異性，HPV16 型的平均感染率約為60%，其次為HPV18 型[15]。HPV-DNA 整合到宿主基因組后，在宮頸癌的發生發展中發揮了重要作用。HPV 病毒載量在不同的感染階段會出現動態變化。當HPV 基因組機會性整合進人體基因組后，會導致L1 區域出現缺失，使病毒載量的檢測水平低于實際的載量水平。研究認為，HPV 病毒載量是宮頸癌發生風險的標志物，且存在型別依賴性，HPV16 型和HPV18 型病毒載量可有效預測有無HPV 感染[16]。本研究的結果顯示，不同HPV 病毒載量在宮頸癌病理分化程度、FIGO 分期中的分布差異均無統計學意義（P＞0.05）。這與相關文獻報道[17-18]的HPV 病毒載量與宮頸癌病變程度不具相關性基本一致。原因可能是第二代雜交捕獲試驗（HC- Ⅱ）僅可檢測到游離的HPV，而無法檢測到非基因整合狀態的HPV。

綜上所述，宮頸癌患者感染的HPV 以HPV16 亞型為主。HPV 亞型分布與宮頸癌的病理分化程度有關，與臨床分期無關；HPV 病毒載量與宮頸癌臨床分期、病理分化程度均無明顯相關性。本研究可為HPV 疫苗的接種提供理論依據。但由于本研究中病例數較少，可能導致研究結果出現偏差。在接下來的研究中將繼續加大樣本量，對HPV 亞型分布、病毒載量與宮頸癌臨床分期及病理分化程度的相關性進行進一步的探討。