榛蘑與菌絲體中蜜環菌素的超聲波輔助提取條件優化及其提取物中化合物分析

徐 偉，王植朔，王瑞琦，吳 凡，梁珊珊，謝紅瑤，張 雪

（哈爾濱商業大學食品工程學院，黑龍江哈爾濱 150028）

食藥用菌是一類天然無毒副作用的綠色資源真菌，蜜環菌（（Vahl.ex Fr.）Quel）是一種常見的食藥用菌，又名榛蘑，屬于擔子菌亞門（Bsaidiomycotina）、傘菌目（Agaricales）、口蘑科（Tricholomataceae）、蜜環菌屬（），其產地廣泛分布于歐洲、亞洲、北美國家等許多地區以及熱帶及溫帶的森林地區，我國主產于黑龍江、吉林、遼寧、河北等地。榛蘑中含有包括蜜環菌素類、多糖類、萜類、多元醇、酚、有機酸、氨基酸、黃酮類、維生素、微量元素在內的多種活性成分，功能豐富，在新型天然藥用資源開發利用中占據重要地位，目前，已被開發應用于神經疾病以及心腦血管治療藥物，其菌絲體被國家食品藥品監督管理部門批準可用于輔助降血壓。榛蘑的子實體對眩暈、肢麻、失眠、耳鳴等有較好治療作用，有著明目、祛風活筋、強筋壯骨的藥用功能，但其成分解析還不夠全面，構效關系還有待于深入研究。

蜜環菌素是榛蘑中存在的特征成分，是由倍半萜醇和芳香酸及其衍生物通過酯化而成的原伊魯烷型倍半萜醇芳香酸酯類化合物，該種結構在天然產物中獨特存在。盡管倍半萜醇和芳香酸及其衍生物都獨立存在于自然界中，但二者酯化結合物目前僅在榛蘑中有發現，主要有蜜環菌甲素、蜜環菌乙素、蜜環菌戊素、蜜環菌酸等。隨著對蜜環菌素類結構解析的深入以及構效關系的研究，近年來，不斷有榛蘑抑制癌細胞等研究報道，例如：用蜜環菌乙素可以抑制K562（人慢性骨髓性白血病細胞）、HEL 92.1.7（人慢性紅細胞白血病細胞）和U937（人急性單細胞白血病細胞）的生長；蜜環菌乙素對人食管癌和人淋巴癌有細胞毒性作用，且能抑制人食道癌的xe-no 生長和增加移植腫瘤模型中的放射性敏感，并能抑制巨噬細胞活化和分化；蜜環菌乙素作用于人肝癌細胞（HCC）后，微管相關蛋白1 輕鏈3（LC3）大量聚集，微管相關蛋白1 輕鏈3-Ⅰ（LC3-Ⅰ）大量轉化成微管相關蛋白1 輕鏈3-Ⅱ（LC3-Ⅱ），導致癌細胞自噬。蜜環菌庚素與活性氧（ROS）誘導人淋巴瘤和肝癌（HCC）細胞凋亡死亡；蜜環菌戊素通過Cys159 抑制5-脂氧合酶（5-LO）從而抑制花生四烯酸合成白三烯，增強免疫作用。

由于野生榛蘑資源有限，人工分離榛蘑母體純菌株進行液態培養菌絲體，并獲取其生物活性成分，為大規模工業化生產提供可行性。本研究以東北野生榛蘑子實體與其母體純種人工液態培養菌絲體為研究對象，利用超聲細胞破碎輔助溶劑萃取提取物，采用UHPLC-MS/MS 對其組分進行檢測，在正、負離子模式下進行分析推測并鑒定其中化合物，分析活性物質種類及含量，揭示野生子實體與人工液態菌絲之間差異，為藥物開發提供理論依據，并從中尋找新化合物，為輔助抗癌化療新型藥物的開發提供方向，達到降低化療藥物的攝入以及對機體的損傷的目的。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

野生榛蘑 采自黑龍江省孫吳縣鮮榛蘑，由本實驗室經組織分離并鑒定，奧氏蜜環菌（）菌種獲得的母體純菌株，PDA 培養基4 ℃斜面試管保存；蜜環菌甲素標準品 實驗室自制；二-氯苯丙氨酸 上海源葉生物科技有限公司；甲醇、乙腈 色譜級，Merck KGaA 公司；甲酸 色譜級，西亞試劑公司；PDA 青島高科技工業園海博生物技術有限公司；葡萄糖 天津市瑞金特化學品有限公司；蛋白胨 北京奧博星生物技術有限責任公司；KHPO

天津市凱通化學試劑有限公司；MgSO·7HO 天津市天力化學試劑有限公司；石油醚 天津市富宇精細化工有限公司。

Thermo Vanquish UHPLC 型超高效液相色譜儀、Q-Exactive HF 型高分辨質譜 美國賽默飛世爾科技有限公司；Zorbax Eclipse 型 C（1.8 μm×2.1 mm×100 mm）色譜柱 美國安捷倫科技公司；723N UV5100 型紫外可見分光光度計 上海精密科學儀器公司；JY92-IIN 型超聲波細胞破碎儀 寧波新芝生物科技股份有限公司；DK-8D 型電熱恒溫水槽上海一恒科技；HC-200 型多功能粉碎機 浙江省金穗機械制造廠；JJ200 型精密電子天平 美國雙杰兄弟有限公司；R-201 型旋轉蒸發器 上海申勝公司；SW-CJ-ECU 型超凈工作臺 蘇州其嘉凈化設備有限公司；DHG-9203A 型電熱恒溫鼓風干燥箱、GHP-9050 型隔水式恒溫培養箱 上海一恒科技有限公司；SHB-III 型循環水式多用真空泵 鄭州長城科工貿有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 榛蘑液態菌絲體培養 將葡萄糖10.0 g、蛋白胨5.0 g、KHPO0.3 g、MgSO·7HO 1.0 g，加1000 mL水配制培養基，取100 mL 置于250 mL 錐形瓶中，高壓滅菌121 ℃、0.105 MPa 30 min，待冷卻至室溫，用滅菌打孔器取直徑為1 cm 的榛蘑菌塊，單塊接種于三角瓶中，紗布包扎瓶口置于轉速為160 r/min 的搖床中，溫度為26 ℃，振蕩培養13 d 后，獲得液態培養菌絲體。

1.2.2 液態菌絲體與子實體粉末制備 將榛蘑的菌絲體和發酵液真空抽濾，收集菌絲體，用流水沖洗數次，置于60 ℃，干燥至恒重取出；野生榛蘑子實體用流水沖洗表面沙塵，同樣在60 ℃下進行干燥，2 種干燥物，用粉碎機粉碎后過40 目篩，分別獲得菌絲體與子實體粉末，具體操作流程與樣品形態見圖1、圖2。

圖1 樣品制備流程Fig.1 Sample preparation process

圖2 榛蘑野生子實體、液態菌絲體及粉末形態Fig.2 Wild fruiting body,liquid mycelium,and powder of Armillaria mellea

1.2.3 蜜環菌素的超聲輔助提取 稱取預處理好的液態菌絲體和野生子實體粉末各1 g，分別加入石油醚溶液10 mL，設置好超聲波細胞破碎儀參數：功率300 W、時間20 min，放入原料粉末和提取溶劑后進行超聲波破碎，再將破碎后的粉末和石油醚轉入到索氏提取器中進行溶劑回流50 min，過濾后轉入設置好參數為真空度-0.085 MPa，水浴溫度60 ℃，轉速120 r/min 的旋轉蒸發儀中進行濃縮處理，等到提取液減少至原體積的1/5 后即停，獲得提取物。

1.2.4 蜜環菌素標準曲線繪制 稱取蜜環菌甲素標準品（純度HPLC≥98%，實驗室自制）1 mg，加入甲醇溶液定容至10 mL，即配制成濃度為0.1 mg/mL的對照品溶液，分別稀釋成為0.01、0.02、0.03、0.04、0.05 mg/mL 的工作液，進行標準曲線的繪制。

在紫外可見分光光度計波長217 nm 處測量得到蜜環菌甲素質量濃度隨吸光度值變化的方程為Y＝1.84x＋0.0961（=0.9997）。

1.2.5 蜜環菌素含量及提取物得率計算 將濃縮液移入被烘干的蒸發皿中，等到它冷卻至室溫后稱定質量。并取1 mL 濃縮液以甲醇稀釋至100 倍后，以甲醇為空白對照進行校正，測其吸光度，超聲輔助法下液態菌絲體/野生子實體提取物得率及其中蜜環菌素含量的計算公式如下：

式中：Y-吸光度；c-蜜環菌素濃度（mg/mL）；C-蜜環菌素含量（mg/g）；V-體系總體積（mL）；n-稀釋倍數；m-蜜環菌素提取物質量（g）；M-提取物濃縮液質量（g）；M-榛蘑用量（g）。

1.2.6 單因素實驗 精密稱取適量的榛蘑菌絲體粉、子實體粉和一定量的石油醚于燒杯中，超聲波細胞破碎儀處理后，將實驗原料和石油醚轉移到索氏提取器中，讓蜜環菌素充分溶解出。固定因素水平為料液比1:20 g/mL、超聲波功率300 W、超聲波時間20 min 和溶劑回流時間50 min，考察不同料液比（1:10、1:15、1:20、1:25、1:30 g/mL）、超聲波功率（200、250、300、350、400 W）、超聲時間（10、15、20、25、30 min）和溶劑回流時間（10、30、50、70、90 min）對榛蘑中提取物得率和蜜環菌素類物質含量的影響情況，用以確定超聲波輔助法提取液態菌絲體和野生子實體提取物各個因素的優水平。

1.2.7 正交試驗 根據單因素實驗所得結果，選擇適當的水平進行正交試驗優化設計，確定超聲波輔助法提取液態菌絲體和野生子實體提取物的最佳工藝條件。采用四因素三水平的正交試驗方法進行實驗，實驗方案的因素水平表如表1 所示。

表1 L9（34）正交實驗因素水平設計Table 1 L9 (34) Orthogonal experimental design factor level table

1.2.8 榛蘑菌絲體提取物的UHPLC-MS/MS 檢測分析 取榛蘑液態菌絲體、野生榛蘑子實體提取物0.01 g于5 mL 離心管中，加入1.5 mL 的70%甲醇，渦旋1 min，于4 ℃冰箱冷藏浸提過夜，加入100 μg/mL的內標二-氯苯丙氨酸10 μL，使樣品溶液中內標濃度1 μg/mL。再進行4 ℃、5000 r/min 離心5 min，取出上清液根據物質內含物含量進行稀釋，過0.22 μm濾膜后上機。參數設置為30 ℃柱溫，0.3 mL/min流速，A 相水+0.1%甲酸和B 相純乙腈組合的流動相，2 μL 進樣量，4 ℃自動進樣器溫度。正模式參數設置為325 ℃加熱器溫度，45 arb 鞘氣流速，15 arb輔助氣流速，1 arb 吹掃氣流速，3.5 kV 電噴霧電壓，330 ℃毛細管溫度，55% S-Lens RF Level。負模式參數設置為325 ℃加熱器溫度，45 arb 鞘氣流速，15 arb 輔助氣流速，1 arb 吹掃氣流速，3.5 kV 電噴霧電壓，330 ℃毛細管溫度，55% S-Lens RF Level。掃描模式為一級全掃描（Full Scan，m/z 100～1500）與數據依賴性二級質譜掃描（dd-MS2，TopN=10），參數設置為120000（一級質譜）、60000（二級質譜）分辨率，高能量碰撞解離（HCD）碰撞模式。流動相梯度洗脫程序：0.0～11.1 min，95%～10% A；11.0～12.0 min，10%A；12.0～12.1 min，10%～95% A；12.1～14.0 min，95%A。利用色譜圖中對應的保留時間和MS/MS 信息對被檢測物質進行定性，采用內標法對化合物濃度進行定量。

1.3 數據處理

實驗中所有數據均進行3 次平行實驗，數據以平均值±標準形式表示。利用Excel 2007 和 Origin 2018 對生物學特性實驗進行數據處理，差異顯著水平為＜0.05。

2 結果與分析

2.1 超聲波輔助提取蜜環菌素條件優化

2.1.1 料液比對蜜環菌素提取的影響 根據1.2.6 進行單因素實驗，考察料液比對蜜環菌素提取的影響，所得結果如下圖3 所示。

圖3 料液比對菌絲提取物得率及其中蜜環菌素含量的影響Fig.3 Effect of solid-liquid ratio on yield of Armillaria mellea extract and the content of Melleolides

超聲波細胞破碎法是利用超聲在提取溶劑中使能量產生和傳遞，生成強烈的空化效應，瞬間破裂細胞壁和整個生物體，可使有效成分充分溶出達到提高提取率的目的。如圖3 所示，隨著料液比的增加，榛蘑菌絲提取物得率及其中蜜環菌素提取量也逐漸增加，當料液比1:20 g/mL 的情況下，液態菌絲體和野生子實體提取物得率和提取出的蜜環菌素都達到最高值，液態菌絲體提取物得率為20.5%，蜜環菌素含量為0.401±0.0049 mg/g；野生子實體提取物得率為18.9%，蜜環菌素含量為0.386±0.008 mg/g，均低于菌絲體，可能是由于子實體的細胞壁較堅固，破碎率低于菌絲體，從而導致溶于溶劑成分較少。楊峻山等以1 kg榛蘑菌絲體干燥物為原料，用丙酮進行溶劑萃取，最終得到35 mg 蜜環菌寅素、56 mg 蜜環菌丑素、42 mg蜜環菌丁素，綜合蜜環菌素得率為0.013%，較于本實驗驗證石油醚作為提取溶劑更佳。之后隨著料液比的增加，提取物得率和蜜環菌素提取量逐漸降低，可能是因為當所使用的石油醚量較少時，提取溶劑不能充分進入榛蘑的子實體和菌絲體中，不能充分帶出有效活性成分，使其溶解于提取溶劑中。隨著提取溶劑用量的增加，子實體和菌絲體與溶劑接觸面積增大，利于蜜環菌素的提取，但提取溶劑用量過大時，溶劑吸收到超聲波能會增大，子實體和菌絲體吸收的超聲波能減少，細胞壁破壞不充分，蜜環菌素無法充分溶出。綜合考慮提取效率和經濟效應等因素，確定最佳料液比為1:20 g/mL。

2.1.2 超聲波功率對蜜環菌素提取的影響 根據1.2.6 進行單因素實驗，考察超聲波功率對蜜環菌素提取的影響，所得結果如下圖4 所示。

圖4 超聲波功率對榛蘑菌絲提取物得率及其中蜜環菌素含量的影響Fig.4 Effect of ultrasonic power on the yield of Armillaria mellea extracts and the content of Melleolides

如圖4 所示，隨著超聲波功率的增加，榛蘑菌絲提取物得率和蜜環菌素提取量也逐漸增加，當超聲波功率為300 W 時，菌絲體和子實體提取出的蜜環菌素都達到最高值，菌絲體提取物得率為22.7%，蜜環菌素的含量為0.582±0.0052 mg/g；子實體提取物得率為19.8%，蜜環菌素的含量為0.533±0.006 mg/g。王春蘭等以石油醚為提取溶劑，采用索氏提取器回流提取榛蘑12 h，菌絲體中得到0.0085%的蜜環菌甲素、0.0002%蜜環菌戊素，子實體中得到0.002%蜜環菌甲素，0.0011%蜜環菌戊素，菌絲體中蜜環菌素提取率優于子實體，并對比本實驗發現超聲波細胞破碎儀的加入明顯優化了蜜環菌素的提取率。之后蜜環菌素提取量與超聲波功率呈負相關。這種變化情況可能是由于較低超聲波功率時，子實體和菌絲體完整細胞被破碎程度都較低，蜜環菌素從細胞內透過細胞壁滲出到提取溶劑的量較少。隨著超聲波功率的提升，增強了空化效應強度，使得完整細胞的細胞壁和整個生物體都能夠破裂，加速提取物及其蜜環菌素的溶出。但當超聲波功率過大時，一方面可能空化氣泡產生過多，阻礙超聲波在液體介質的傳播；另一方面可能細胞破碎程度過大，多余成分溶出，甚至蜜環菌素類物質結構都能遭到破壞。綜合考慮提取效率和成本等因素，確定最佳超聲波功率為300 W。

2.1.3 超聲時間對蜜環菌素提取的影響 根據1.2.6進行單因素實驗，考察超聲時間對蜜環菌素提取的影響，所得結果如圖5 所示。

如圖5 所示，隨著超聲時間的增加，榛蘑菌絲中提取物得率和蜜環菌素提取量也逐漸增加，當超聲時間為20 min 時，菌絲體和子實體提取出的蜜環菌素都達到最高值，菌絲體提取物得率為25.9%，蜜環菌素的含量為0.582±0.0053 mg/g；子實體提取物得率為21.4%，蜜環菌素的含量為0.533±0.0078 mg/g，略低于菌絲體。之后隨著超聲波時間的增加，提取物得率和提取出的蜜環菌素逐漸降低。這可能是因為當超聲波時間較短時，超聲波產生的空化效應不夠持久，不利于榛蘑子實體和菌絲體的細胞破碎和蜜環菌素的溶出。隨著超聲波時間的繼續增加，細胞壁和整個生物體都能夠充分破裂，加速蜜環菌素的溶出。但當超聲時間過長時，造成提取溶劑的揮發，并增加榛蘑內其他成分的溶出，使提取溶劑中含有過多其他成分，一部分蜜環菌素結構可能遭到破壞，導致蜜環菌素得率的降低。因此選取超聲提取時間20 min 進行后續實驗。

圖5 超聲波時間對榛蘑菌絲提取物得率及其中蜜環菌素含量的影響Fig.5 Effects of ultrasonic time on yield of Armillaria mellea extract and the content of Melleolides

2.1.4 溶劑回流時間對蜜環菌素提取的影響 根據1.2.6 進行單因素實驗，考察溶劑回流時間對蜜環菌素提取的影響，所得結果如下圖6 所示。

圖6 溶劑回流時間對榛蘑菌絲提取物得率及其中蜜環菌素含量的影響Fig.6 Effect of solvent reflux time on yield of Armillaria mellea extract and the content of Melleolides

如圖6 所示，隨著溶劑回流時間的增加，榛蘑中蜜環菌素提取量也逐漸增加，當溶劑回流時間為50 min 時，菌絲體提取物得率為26.8%，蜜環菌素的含量為0.741±0.0054 mg/g；子實體提取物得率為22.7%，蜜環菌素的含量為0.689±0.008 mg/g。之后隨著溶劑回流時間的增加，提取物得率和提取出的蜜環菌素變化幅度較小。這種現象的發生可能是由于當溶劑回流時間較短時，榛蘑子實體和菌絲體粉末與提取溶劑接觸不夠充分，不利于蜜環菌素的溶出。隨著溶劑回流時間的繼續增加，子實體與菌絲體的粉末能達到與提取溶劑多次充分接觸的效果，蜜環菌素溶出較充分。但當溶劑回流時間過長時，一方面會導致提取溶劑的揮發過多，提取溶劑的減少導致溶劑的溶解度達到上限，因此限制了蜜環菌素的滲出；另一方面可能是由于物料本身的蜜環菌素剩余含量低，溶解速度減慢，導致蜜環菌素提取速率下降。綜合經濟效益和環境保護等因素，溶劑回流時間50 min 時提取率最優，但綜合考慮各種因素和效應，發現溶劑回流時間對蜜環菌素提取的得率影響不是很大，后期投入工業生產時可舍去該因素。

2.1.5 蜜環菌素提取正交試驗結果與分析 根據單因素實驗結果，采用正交試驗設計優化工藝方案，所得實驗結果如表2 所示。

表2 結果所示，以蜜環菌素的含量為考察指標，可知上述四個單因素影響蜜環菌素提取程度的緊要順序為C＞B＞D＞A，即超聲波時間＞超聲波功率＞溶劑回流時間＞料液比。超聲波輔助萃取對蜜環菌素提取最佳優化條件為CBDA，即料液比1:20 g/mL，超聲波功率300 W，超聲波時間20 min，溶劑回流時間50 min。根據上述條件，平行測定3 次，提取物得率為26.0%、26.8%、27.6%，提取物中蜜環菌素的含量分別為0.733、0.74、0.747 mg/g，實驗證明此條件下提取物得率為26.8%，蜜環菌素含量為0.74 mg/g。

表2 正交試驗結果Table 2 Orthogonal test results

2.2 野生榛蘑子實體和液態菌絲體提取物中化合物的分析

經過UHPLC-MS/MS 技術對野生榛蘑子實體、液態菌絲體提取物在正、負離子模式下進行鑒定和定性分析，所得離子流（TIC）圖如圖7 所示。菌絲體、子實體提取物分別共檢測到482、1147 個化合物，經化源網（https://www.chemsrc.com/）、Pubchem（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）、Chemspider（http://www.chemspider.com/）數據庫中化學式、分子量、結構、色譜行為等相關信息比對，分析出液態菌絲體提取物中305 個化合物，總含量為40.18 μg/mL，野生榛蘑子實體提取物中592 個化合物，總含量為129.588 μg/mL。化合物種類的鑒定結果：除蜜環菌素類物質外，檢測還發現了萜類、酚類、黃酮類、香豆素類、酯類、固醇類、鞘脂類、氨基酸類、多肽類、蛋白類、酸、醛、醇、嘌呤、嘧啶、核苷類、酰胺類、生物堿、胺類、巴比妥類、酮類、醌類、雜環類以及其它等多類物質。本研究榛蘑菌絲體提取物與已報道的榛蘑活性物質研究相比，新檢出了石竹素、白術內酯Ⅱ、去氫木香內酯、圓柚酮、咖啡油醇、小白菊內酯、異土木香內酯、七葉膽皂甙、梓苷、甲基柏木酮、豨薟精醇、木香烴內酯、黑麥草內酯、丙泊酚、異草甘素、含羞草素化合物。

圖7 UHPLC-MS/MS 分析榛蘑菌絲體、子實體提取物得到的一級總離子流圖Fig.7 First-order total ion chromatograms obtained from UHPLC-MS/MS analysis of Armillaria mycelium and fruit body extracts

2.3 提取物中蜜環菌素類成分解析

如表3 所示，本實驗從榛蘑中分離鑒定出16 種蜜環菌素和5 種疑似蜜環菌素碎片，其中液態菌絲體和野生榛蘑子實體同有成分有8 種：化合物1、3～5、7、12，碎片A、B，菌絲體獨有成分有10 種：化合物6、9、10、13～18，碎片C，子實體獨有成分有3 種：化合物19、碎片D 和E。楊峻山等對液態絲體中蜜環菌素的質譜進行研究，解析其化學結構與質譜裂解方式關系，將本實驗所呈現的結果與其進行比對后發現碎片A、B、C、D、E 均有出現，對其進行部分裂解方式還原推導。化學結構式如圖8 所示。

圖8 蜜環菌素及其碎片結構式Fig.8 Melleolides and its fragment structure注：化合物信息詳見表3。

表3 蜜環菌素類化合物分析結果Table 3 Results of Melleolide compounds analysis

液態菌絲體提取物中蜜環菌素類總量約為2.551 μg/mL，碎片總含量約為0.588 μg/mL，其中蜜環菌甲素含量最高，約為1.319 μg/mL，碎片A 次之，約為0.439 μg/mL；子實體提取物中蜜環菌素類總量約為2.413 μg/mL，碎片總含量約為 2.124 μg/mL，其中碎片D 的含量最高，約為1.902 μg/mL，蜜環菌甲素次之，約為1.584 μg/mL。從表中數據可以分析出液態菌絲體提取物種類和蜜環菌素含量都優于野生子實體提取物，且10-dehydroxymelleoloede、蜜環菌辛素、Arnamiol、蜜環菌壬素、A52a、4-dehydroxyarmillarin、蜜環菌丙素、（4R,5S,7R,9S,13R）-2’,5-epoxy-4-dehydroxyarmillarin、4’-demethoxyarmillaribin都只在菌絲體中有檢測出。程顯好等對榛蘑菌絲體和子實體進行蜜環菌素類的HPLC-DAD 檢測分析，發現只有菌絲體檢測圖譜上存在蜜環菌素類吸收峰，并猜測可能是由于蜜環菌素在子實體中含量低于可檢測水平而未檢測出，也證明了榛蘑菌絲體中的蜜環菌素類成分高于子實體的，且差異明顯。

與張珊珊等對榛蘑菌絲體進行超聲波提取相比，本實驗利用超聲波細胞破碎輔助石油醚萃取榛蘑菌絲體中蜜環菌素成分新增了0.086 μg/mL 4-Methyoxymelleolide、0.072 μg/mL Arnamiol、0.063 μg/mL 6’-Dechloroarnamial。其中Arnamiol 能起到抑制人白血病T 細胞、人乳腺癌MCF-7 細胞、人急性淋巴白血病細胞、人結腸癌HCT-116 細胞作用，對癌細胞存在毒性。蜜環菌素具有抗菌活性和對癌細胞的細胞毒性，能作為癌癥治療或輔助治療的潛在候選藥物。

3 結論

本研究利用超聲波細胞破碎儀，以東北榛蘑子實體及其分離所得母體菌株在液態培養下的菌絲體為研究對象，獲得了優化的提取工藝為料液比1:20 g/mL，超聲波功率300 W，超聲時間20 min，溶劑回流時間50 min，該條件下液態菌絲體提取物得率為26.8%，蜜環菌素含量0.74 mg/g；采用UHPLCMS/MS 技術對榛蘑菌絲體提取物和子實體提取物的組分進行檢測分析，得出榛蘑菌絲體提取物種類及含量都優于子實體提取物，且10-dehydroxymelleoloede、蜜環菌辛素、Arnamiol、蜜環菌壬素、A52a、4-dehydroxyarmillarin、蜜環菌丙素、(4R,5S,7R,9S,13R)-2’,5-epoxy-4-dehydroxyarmillarin、4’-demethoxyarmillaribin 都只在菌絲體中有檢測出。對液態菌絲體提取物成分的深入研究，為尋找新化合物，輔助抗癌新型藥物的開發或降低化療藥物對機體的損傷，開發輔助功能食品提供了新資源。