茯苓多糖對鸚鵡魚抗氧化、肝功能、非特異性免疫以及消化酶的影響

初宇軒，張 震，張鳳東，方珍珍，孫學亮，陳成勛

（1.天津農學院天津市水產生態及養殖重點實驗室，天津 300384；2.天津東子水產科技發展有限公司，天津 301802）

茯苓又名茯菟、茯靈，屬于擔子菌綱非褶菌目多孔菌科，主要功能成分為茯苓多糖。分子結構多為β-（1→3）-d-葡聚糖，含有少量β-（1→6）糖苷鍵側鏈。茯苓多糖具有抗病毒、抗炎、抗衰老和增強免疫力的作用。它在提高免疫力的同時，還間接發揮抗腫瘤作用。茯苓多糖分布于茯苓內部不同位置，且在菌體的不同部位，多糖含量也有所不同，經化學修飾后具有增強其生物學活性的能力。多糖在參與生命活動過程中，以綴合物的形態，對生理機能的平穩過程產生重要的調節作用。因此，可作為飼料添加劑用于高密度水產養殖。

鸚鵡魚是很受大眾喜愛的一種熱帶觀賞魚，其體色絢麗多彩，嘴巴的形狀很像鸚鵡的喙，故而得名。近年來對茯苓多糖的研究主要是多糖成分提取和有效成分的作用，主要應用在畜牧業，如家畜家禽等抗炎、抗病毒、抗腫瘤、增強免疫力等，但在水產方面應用實例較少。為擴大茯苓多糖的應用，提高水產魚類的體質，王慶奎等進行研究，結果發現，茯苓多糖能提高點帶石斑魚血清補體C3的含量并降低血清中A/G值，同時還能提高魚體的抗病能力。本研究探究在飼料中添加不同量茯苓多糖對鸚鵡魚肝功能、抗氧化、非特異性免疫以及腸道消化酶活力的影響，為日后茯苓多糖在鸚鵡魚養殖中地應用提供參考。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

試驗魚450尾，選自天津市眾民水產科研基地室外養殖池塘，對幼魚進行馴化以適應車間內環境并投喂基礎飼料。鸚鵡魚的平均體長為（10.06±0.21）cm，平均體質量為（41.82±1.09）g。茯苓多糖購自四川省維克奇生物科技有限公司，多糖純度（HPLC≥90%）。

1.2 飼料準備

試驗分為5組，分別在基礎飼料中添加不同含量的茯苓多糖制成配合飼料：FL0（添加茯苓多糖0%），FL05（添加茯苓多糖0.5%），FL1（添加茯苓多糖1%），FL15（添加茯苓多糖1.5%），FL2（添加茯苓多糖2%）。基礎飼料配方和營養水平見表1。

表1 基礎飼料配方

1.3 試驗方法

1.3.1 飼養管理 鸚鵡魚經過馴養后開始試驗，在養殖車間水泥池中設置15個長方形網箱，水溫控制在30℃左右，淡水，早、晚共投喂飼料2次，并保證充足的光照時間。每隔7 d采1次樣，共取5次樣品（0 d需采樣），每個平行取5條魚。采樣方法：將魚解剖，分離出肝臟和腸道，在-80℃條件下冷藏，用于抗氧化、肝功能、非特異性免疫、消化酶指標的測定。

1.3.2 樣品的測定 本試驗共測定12項指標，包括超氧化物歧化酶（SOD）、總抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）、白球比（A/G）、谷草轉氨酶（GOT）、谷丙轉氨酶（GPT）、溶菌酶、酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP），以及前腸的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶。檢測用試劑盒均來自南京建成生物工程技術研究所。

1.4 數據分析

試驗數據采用Excel 2010軟件進行整理，采用SPSS17.0軟件進行單因素方差分析，差異顯著性分析（<0.05）。結果用平均值±標準差的形式表示。

2 結果與分析

2.1 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟抗氧化能力的影響

2.1.1 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟SOD活力的影響由表2可知，7 d時，FL1、FL15、FL2組SOD活力顯著高于FL0、FL05組（<0.05)；14 d時，FL1組SOD活力顯著高于其他組（<0.05)；21 d時，FL1、FL15組活力顯著高于其他組（<0.05)；28 d時，FL0、FL1組活力顯著高于其他組（<0.05）。

表2 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟SOD活力的影響 U·（mg·prot）-1

FL05組 中，7，14 d的SOD活 力 顯 著 高 于0，21，28 d（<0.05)；FL1組中，7~28 d的SOD活力顯著高于0 d（<0.05)；FL15組中，7 d的SOD活力顯著高于0，14，21，28 d（<0.05)；FL2組中，7，14 d的SOD活力顯著高于0，21，28 d（<0.05)。

2.1.2 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟T-AOC活力的影響由表3可知，7 d時，FL2組T-AOC活力顯著高于FL0、FL05組（<0.05)；14 d時，FL2組T-AOC活力顯著高于其他組（<0.05)；28 d時，FL05、FL15、FL2組T-AOC活力顯著高于FL0組（<0.05)。

表3 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟T-AOC活力的影響 mmol·mg-1

FL0、FL05組中，0 d的T-AOC活力顯著高于7~28 d（<0.05)；FL1組中，0，7 d的T-AOC活力均顯著高于14~28 d（<0.05)；FL15組中，0，7 d的T-AOC活力顯著高于14~28 d（<0.05)；FL2組中，0，7 d的T-AOC活力顯著高于14~28 d（<0.05)，14，21 d的T-AOC活力顯著高于28 d（<0.05)。

2.1.3 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟MDA含量的影響由表4可知，14~21 d時，FL0、FL05、FL1組的MDA活力均顯著低于FL15、FL2組（<0.05)；28 d時，FL0、FL05、FL1、FL15組MDA含量顯著低于FL2組（<0.05)。

副中心周邊的農村公路，在實際生活中已經半兼顧城市道路的功能，但道路等級依然是農村公路屬性. 對于這部分農村公路規劃應著眼于未來，尤其應注重提升慢行交通、景觀生態、公共交通以及智能交通管理在規劃中的地位，同時使其滿足可以鋪設市政管線的要求. 首先要進行改造升級，如道路寬度不夠、交通基礎設施不健全等問題要全面考慮，改造同時可將重心轉移到大力發展公共交通的目標上，有條件的地區可設置交通專用道，從而為公交線路更廣泛的覆蓋農村地區，方便農村居民的出行提供有力條件. 對于居民出行需求強烈的地區，道路設計要求機非分離.

表4 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟MDA含量的影響 nmol·（g·prot）-1

FL0、FL05組中，0，7，28 d的MDA含量均顯著低于14，21 d（<0.05)；FL1組中，0，21，28 d的MDA含量顯著低于7，14 d（<0.05)；FL15組中，0，28 d的MDA含量顯著低于7~21 d（<0.05)；FL2組中，0，28 d的MDA含量顯著低于7~21 d（<0.05)。

2.2 茯苓多糖對鸚鵡魚肝功能的影響

2.2.1 茯苓多糖對鸚鵡魚A/G的影響 由表5可知，7 d時，FL0組A/G值顯著高于FL05、FL15、FL2組（<0.05)；14 d時，FL0組、FL15組A/G值顯著高于FL05、FL1、FL2組（<0.05)；28 d時，FL2組A/G值顯著高于其他組（<0.05)。

表5 茯苓多糖對鸚鵡魚A/G值的影響

FL0組中，0 d A/G值顯著高于其他時期（<0.05)；FL05組中，0，21 d A/G值顯著高于28 d（<0.05)，28 d A/G值顯著高于7，14 d（<0.05)；FL15組中，0，21 d A/G值顯著高于7，14 d（<0.05)，28 d A/G值顯著高于其他時期（<0.05)；FL2組中，28 d A/G值顯著高于其他時期（<0.05)。

2.2.2 茯苓多糖對鸚鵡魚GOT活力的影響 由表6可知，7 d時，FL0組GOT活力均顯著低于FL05、FL1、FL15、FL2組（<0.05)）；14 d時，FL0、FL2組GOT活力顯著低于FL05組（<0.05)；21 d時，FL0、FL1、FL2組GOT活力顯著低于FL05組（<0.05)。

表6 茯苓多糖對鸚鵡魚GOT活力的影響 U·（g·prot）-1

FL0組中，0 d GOT活力顯著高于其他各個時期（<0.05)；FL15組中，0，14，28 d GOT活力顯著低于7，21d（<0.05)；FL2組中，14~28 d GOT活力顯著低于0，7 d（<0.05)。

2.2.3 茯苓多糖對鸚鵡魚GPT活力的影響 由表7可知，7 d時，FL0、FL05組GPT活力顯著低于FL1組（<0.05)；28 d時，FL0、FL05、FL15組GPT活力顯著低于FL1、FL2組（<0.05)。

表7 茯苓多糖對鸚鵡魚GPT活力的影響 U·（g·prot）-1

FL0、FL05組中，14，21，28 d GPT活力顯著低于0，7 d（<0.05)；FL1組中，7 d的GPT活力顯著高于各個時期（<0.05)；FL15組中，14，21，28 d GPT活力顯著低于0，7 d（<0.05)；FL2組中，7 d的GPT活力顯著高于各個時期（<0.05)。

2.3 茯苓多糖對鸚鵡魚非特異性免疫的影響

2.3.1 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟溶菌酶活力的影響由表8可知，14 d時，FL05組溶菌酶活性顯著高于其他各組（<0.05)；21 d時，FL05組的溶菌酶活力顯著高于其他組（<0.05)；28 d時，FL05組溶菌酶活力顯著高于FL0、FL1、FL2組（<0.05)。

表8 茯苓多糖對鸚鵡魚溶菌酶活力的影響 U·（g·prot）-1

2.3.2 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟AKP活力的影響由表9可知，7 d時，FL2組AKP活力顯著高于其他組（<0.05)；14 d時，FL2組AKP活力顯著高于其他組（<0.05)；21 d時，FL15、FL2組AKP活力顯著高于FL0、FL05、FL1組（<0.05)。

表9 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟中AKP活力的影響 U·（g·prot）-1

FL05組中，21 d AKP活力顯著高于7，28 d（<0.05)；FL15、FL2組中，7，14，21，28 d AKP活力差異不顯著（>0.05)，但均顯著高于0 d（<0.05)。

2.3.3 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟ACP活力的影響由表10可知，14 d時，FL1、FL15、FL2組ACP活力均顯著高于其他組（<0.05)；28 d時，FL2組ACP活力顯著高于其他組（<0.05)。

表10 茯苓多糖對鸚鵡魚肝臟中ACP活力的影響 U·（g·prot）-1

FL05組中，14，21 d ACP活力顯著高于0，7，28 d（<0.05)；FL1組中，14，21 d ACP活力顯著 高 于0，7，28 d（<0.05)；FL15組中，14 d ACP活力顯著高于0，7，28 d（<0.05)。

2.4 茯苓多糖對鸚鵡魚腸道消化酶活力的影響

2.4.1 茯苓多糖對鸚鵡魚前腸蛋白酶活力的影響 由表11可知，FL05組中，7，14 d蛋白酶活力顯著高于其他時期（<0.05）；FL1組中，14，21 d蛋白酶活力顯著高于其他時期（<0.05）；FL15組中，14 d蛋白酶活力顯著高于其他時期（<0.05）。

表11 茯苓多糖對鸚鵡魚前腸蛋白酶活力的影響 U·（g·prot）-1

14 d時，各試驗組蛋白酶活力均顯著高于對照組(<0.05)；28 d時，FL1、FL2組蛋白酶活力顯著高于FL0、FL05組（<0.05）。

2.4.2 茯苓多糖對鸚鵡魚前腸淀粉酶活力的影響由 表12可 知，FL2組 中，7，28 d的 淀 粉 酶 活力顯著高于其他時期（<0.05）。14，21 d時試驗組與對照組淀粉酶活性的差異性均不顯著（>0.05）；在7 d時，FL2組的淀粉酶活力最高。

表12 茯苓多糖對鸚鵡前腸道淀粉酶活力的影響 U·（g·prot）-1

2.4.3 茯苓多糖對鸚鵡魚前腸脂肪酶活力的影響由表13可知，7，14，21 d時FL15組的脂肪酶活力顯著高于其他組（<0.05)。7，14 d時FL1、FL2組的脂肪酶活力顯著高于FL0、FL05組（<0.05)。FL1組中，14 d的脂肪酶活力顯著高于其他時期（<0.05)。

表13 茯苓多糖對鸚鵡魚前腸脂肪酶活力的影響 U·（g·prot）-1

3 結論與討論

3.1 茯苓多糖對鸚鵡魚抗氧化能力的影響

茯苓多糖具有較強的抗氧化能力，包括對DPPH自由基的清除能力、對Fe的還原能力以及對羥自由基的抑制能力，而且會隨著其濃度的加大而增強。茯苓多糖能夠減少機體內自由基對細胞的破損，也能夠激活動物機體的抗氧化系統，從而達到保護動物本身的效果。SOD的主要功效是對超氧離子自由基催化進行歧化反應。陳林等研究結果表明，茯苓胞內多糖為優良的天然抗氧化活性多糖，可以提高生物的抗氧化水平。黃聰亮等研究表明，茯苓多糖能提高糖尿病小鼠腎組織中SOD、GSH、CAT活性，降低MDA的含量。本研究結果FL1組SOD活力14 d時最高且顯著高于其他組（<0.05)，表明在飼料中添加1%的茯苓多糖可提高魚體的SOD活力。MDA是機體脂質氧化程度的重要體現，隨著投喂時間的增加，MDA含量呈先升高后降低的趨勢，在28 d時，肝臟的MDA含量恢復正常水平。T-AOC是反映機體對外界脅迫的代償能力以及機體內分解與清除氧自由基能力的綜合體現，研究結果表明，長時間添加T-AOC會對鸚鵡魚的總抗氧化能力產生抑制作用。以上數據與龔澤修等研究茯苓多糖對母豬抗氧化指標的影響結果相一致。上述研究結果證實茯苓多糖可以提高動物機體的抗氧化能力，但對脂質體內氧化反應物影響不顯著。

3.2 茯苓多糖對鸚鵡魚肝功能的影響

茯苓提取物的保肝活性研究早在20世紀90年代就已受到廣泛關注。研究表明，茯苓水溶性多糖和醇溶性三萜對肝炎、肝硬化等多種肝臟病癥均表現出明顯的防治作用。程玥等通過研究得出，3種茯苓提取物對CCL4誘導的小鼠肝損傷均具有不同程度的保護作用，以茯苓多糖效果最為顯著，其機制可能與增強肝臟抗氧化能力及減輕炎癥有關。吳科銳等研究羧甲基茯苓多糖的藥理作用結果表明，羧甲基茯苓多糖具有免疫調節、護肝減毒、抗氧化等作用。在試驗中通常用A/G來衡量魚類肝臟的健康狀況，當肝臟受到嚴重損傷時白蛋白含量下降，血清中的A/G會偏低；當球蛋白含量升高時，雖然也會使A/G值降低，但因球蛋白是免疫蛋白，所以這意味著此時機體免疫力有所提升。本研究在投喂茯苓多糖的第7天和第14天，除FL0組外，魚體出現了A/G值普遍偏低的情況。崔培等通過試驗發現，投喂500，350 mg·kg的甘草甜素7 d會降低點帶石斑魚血清A/G值，這與本研究所得出的結論基本相符。GPT和GOT是反映肝損傷最敏感的指標，當肝臟受損時，GOT和GPT會被釋放到血液中。GPT活力隨著試驗天數的遞增呈現出先上升后下降的趨勢，除FL0組外，其他組14，21 d活力均顯著低于0，7 d，表明茯苓多糖可以降低錦鯉肝臟的受損傷程度，從而提高肝功能。

3.3 茯苓多糖對鸚鵡魚非特異性免疫的影響

溶菌酶是魚類重要的非特異性免疫指標，其作用機制是破壞細胞壁使細菌溶解。蔣逸凡等研究茯苓多糖及其免疫調節功能結果表明，茯苓多糖可提高機體非特異性免疫能力，這與本研究結果相一致。在飼料中添加適量的茯苓多糖能夠提高魚體內溶菌酶的活力。AKP與ACP是一種彼此聯系的磷酸單脂酶，血細胞在進行吞噬的過程中會釋放ACP，因此亦是重要的非特異性免疫指標。本研究結果表明，茯苓多糖可以提高魚體肝臟中溶菌酶、AKP、ACP的活力，其中14 d時ACP提高較為顯著（<0.05)，但不宜長時間添加。這與黃玉章通過試驗得出，黃芪多糖可以在一定范圍內提高奧尼羅非魚血清中ACP的活力結果基本相符。

3.4 茯苓多糖對鸚鵡魚腸道消化酶的影響

蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶是動物腸道內最常見的消化酶。多糖對于動物消化酶活性的影響國內外學者一直都有研究。邱小琮等研究表明，異育銀鯽攝食添加含有中草藥成分的飼料，腸道的消化酶活性明顯提高（<0.05）。吉紅等在泥鰍的飼料中添加不同含量的中草藥添加劑，能顯著提高泥鰍的消化酶活性(<0.05)。本研究結果表明，茯苓多糖對蛋白酶、脂肪酶活性都有提高，而且在茯苓多糖含量為1.0%，添加14 d時消化酶活性達到最大值。對脂肪酶有不顯著的抑制作用，這與龔全研究云芝多糖對奧尼羅非魚消化酶的影響結果相一致。此外多糖還是合成蛋白與脂肪的物質，這表明茯苓多糖對魚體消化酶活性的影響與脂肪含量、蛋白水平等密切相關，其作用機理還需要深入研究。

綜合以上結果表明，在飼料中添加1%的茯苓多糖可增強鸚鵡魚肝功能、抗氧化、非特異性免疫以及腸道消化酶的活力，但應根據實際調整，建議添加14 d，效果最佳。