漢族人群原發(fā)性開角型青光眼CDKN2B 基因rs1063192 位點(diǎn)基因型分布及其與rs1063192多態(tài)性的關(guān)系

陸宇清 王 玲 徐 靜 李樂超 蔡 鑫▲

1.江蘇省海安市人民醫(yī)院眼科，江蘇海安 226600；2.江蘇省無錫市人民醫(yī)院眼科，江蘇無錫 214023；3.江蘇省蘇州市第九人醫(yī)院眼科，江蘇蘇州 215000；4.江蘇省徐州市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，江蘇徐州 221000

原發(fā)性開角型青光眼（primary open-angle glaucoma，POAG）是一種常見的眼科疾病，臨床主要表現(xiàn)為眼壓高、特征性視神經(jīng)萎縮及視野缺損，可導(dǎo)致患者視力喪失[1-3]。由于POAG 缺乏典型的臨床癥狀，患者初期容易被誤診，常失去最佳治療時(shí)期[4-5]。研究發(fā)現(xiàn)，POAG 可能與遺傳、高血壓等多種復(fù)雜因素有關(guān)，患者視盤面積/垂直杯盤比值的改變?cè)缬谝曇暗母淖?，并且具有一定的遺傳度[6-7]。數(shù)據(jù)調(diào)查顯示，POAG 在家族人群中的發(fā)病率是一般人群的6 倍[8]。有研究報(bào)道，CAV1、CAV2、TMCO1、CDKN2B 等多種基因或位點(diǎn)可能與POAG 發(fā)病有關(guān)[9]，其中，CDKN2B 是細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑2B，可通過轉(zhuǎn)化生長因子β 信號(hào)通路調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化及凋亡[10]。rs1063192位于CDKN2B 基因3’非翻譯區(qū)域，而3’非翻譯區(qū)域具有微RNA 或干擾小RNA 的結(jié)合靶點(diǎn)，對(duì)蛋白表達(dá)具有調(diào)控作用[11]。然而，CDKN2B 基因rs1063192 多態(tài)性與漢族人群POAG 的關(guān)聯(lián)性尚不清楚，故本研究比較漢族人群中不同病理特征POAG 患者CDKN2B 基因rs1063192 分布情況其多態(tài)性與本病的關(guān)聯(lián)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年5 月至2021 年5 年江蘇省海安市人民醫(yī)院（以下簡稱“我院”）收治的98 例漢族人群POAG 患者，記為研究組，另選取同期我院體檢健康者92 名作為對(duì)照組。本研究獲得我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（HKL201928）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《眼科臨床指南》[12]中POAG 診斷標(biāo)準(zhǔn)；②漢族人群；③年齡18～75 歲；④資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①繼發(fā)性青光眼；②患者間有血緣關(guān)系；③合并角膜炎、結(jié)膜炎等其他眼部疾??；④精神疾??；⑤惡性腫瘤；⑥心肝腎嚴(yán)重功能障礙。

1.2 研究方法

采集所有研究對(duì)象外周靜脈血3 ml，采用全血DNA 提取試劑盒提取DNA（按照DNA 試劑盒說明書進(jìn)行，試劑盒購自蘇州曠遠(yuǎn)生物分子技術(shù)有限公司，貨號(hào)：00719052311）。采用PCR-RFLP 技術(shù)檢測CDKN2B基因rs1063192 位點(diǎn)多態(tài)性，引物由上海生物工程有限公司合成（正向引物：5’-GCCACTATGGACAATGCGAA-3’；反向引物：5’-TGGACCGCTAAGCACAGCCT-3’），將試劑加入PCR 管中，反應(yīng)體系采用KODplus，按照如下PCR 反應(yīng)條件進(jìn)行擴(kuò)增：95℃10 min，95℃10 s，60℃30 s，74℃30 s，連續(xù)進(jìn)行40 次循環(huán)。采用373A DNA 測序儀（美國PE 公司）對(duì)PCR 產(chǎn)物進(jìn)行測序，采用SDS 軟件進(jìn)行基因分型。

1.3 觀察指標(biāo)

①對(duì)研究組和對(duì)照組進(jìn)行Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗(yàn)。②比較不同臨床病理特征POAG 患者CDKN2B 基因rs1063192 位點(diǎn)基因型分布情況。③比較研究組和對(duì)照組CDKN2B 基因rs1063192 位點(diǎn)的基因型及等位基因的分布情況。④分析CDKN2B 基因rs1063192 位點(diǎn)基因型及等位基因與漢族人群POAG 的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)/次數(shù)和百分率表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。采用logistic 回歸分析影響因素。以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究組和對(duì)照組CDKN2B 基因rs1063192 位點(diǎn)基因型分布的Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗(yàn)

研究組和對(duì)照組基因型分布均符合Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗(yàn)，CDKN2B 基因rs1063192 位點(diǎn)基因型實(shí)際頻數(shù)與理論頻數(shù)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），可用于后續(xù)研究。見表1。

表1 研究組和對(duì)照組CDKN2B 基因rs1063192 位點(diǎn)分布基因型的Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗(yàn)（例）

2.2 不同臨床病理特征POAG 患者CDKN2B 基因rs1063192 位點(diǎn)基因型分布比較

不同年齡、青光眼家族史情況、合并高血壓情況的POAG 患者CDKN2B 基因rs1063192 位點(diǎn)基因型分布比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。見表2。

表2 不同臨床病理特征POAG 患者CDKN2B基因rs1063192 位點(diǎn)基因型分布[例（%）]

2.3 研究組和對(duì)照組CDKN2B 基因rs1063192 位點(diǎn)基因型及等位基因分布比較

研究組CDKN2B 基因rs1063192 位點(diǎn)GG、AG 基因型頻率高于對(duì)照組，G 等位基因型頻率高于對(duì)照組（P ＜0.05）。見表3。

表3 研究組和對(duì)照組CDKN2B 基因rs1063192 位點(diǎn)基因型及等位基因分布比較

2.4 CDKN2B 基因rs1063192 位點(diǎn)基因型及等位基因分布與漢族人群POAG 的關(guān)系

以CDKN2B 基因rs1063192 位點(diǎn)基因型（AA=0，AG=1，GG=2）、等位基因（A=0，G=1）為自變量，以漢族人群POAG 發(fā)病情況（是=0，否=1）為因變量，進(jìn)行多因素分析，結(jié)果顯示，攜帶GG 基因型漢族人群POAG 發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)是攜帶AA 漢族人群的3.177 倍；G等位基因攜帶漢族人群POAG 發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)是攜帶A 等位基因漢族人群的2.751 倍（P ＜0.05）。見表4。

表4 CDKN2B 基因rs1063192 位點(diǎn)基因型及等位基因分布與漢族人群POAG 的關(guān)系

3 討論

POAG 是一種典型的雙側(cè)慢性進(jìn)行性視神經(jīng)病變，是導(dǎo)致不可逆失明的第二大原因[13-16]。POAG 患者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞進(jìn)行性喪失，視神經(jīng)乳頭凹陷，并伴有典型的視野缺損，嚴(yán)重影響患者正常生活[17-18]。POAG發(fā)病具有家族性聚集性，尤其是一級(jí)親屬發(fā)病率較高，可能與部分基因表達(dá)有關(guān)[19]。近年來，全基因組關(guān)聯(lián)研究確定了100 種以上與POAG 相關(guān)的變異基因及與內(nèi)表型相關(guān)多個(gè)位點(diǎn)[20-21]。分析影響POAG 發(fā)病的基因型特點(diǎn)對(duì)于探究其發(fā)病機(jī)制及尋求臨床治療新靶點(diǎn)具有重要意義。

本研究中，研究組CDKN2B 基因rs1063192 位點(diǎn)GG 基因型頻率高于對(duì)照組，G 等位基因頻率高于對(duì)照組，提示GG 基因型及G 等位基因在漢族人群POAG 發(fā)病中具有重要影響。有研究報(bào)道，視盤結(jié)構(gòu)相關(guān)基因和多態(tài)位點(diǎn)與歐羅巴人種和亞洲人群POAG易感性有關(guān)[22]。視盤結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)參數(shù)包括視盤面積/垂直杯盤比值，而CDKN2B 基因rs1063192 位點(diǎn)是與視盤面積相關(guān)的一個(gè)基因位點(diǎn)[23]。此外，有研究發(fā)現(xiàn)，位于CDKN2B（rs1063192）反義鏈RNA1 上的rs497759（CDKN2B-AS1）與rs1063192 接近，且與視盤結(jié)構(gòu)相關(guān)，能夠調(diào)節(jié)CDKN2B 和CDKN2A 基因表達(dá)[24]。本研究中，不同年齡、青光眼家族史情況、合并高血壓情況的POAG 患者CDKN2B 基因rs1063192 位點(diǎn)基因型分布不同，提示此類人群與GG 基因型有關(guān)。臨床研究表明，＞60 歲、青光眼家族史、合并高血壓均是POAG 患者發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，此類人群攜帶GG 基因型比例較高，進(jìn)一步提示GG 基因型與POAG 發(fā)病有關(guān)[25-26]。本研究結(jié)果顯示，CDKN2B 基因rs1063192 位點(diǎn)GG基因型和G 等位基因均為漢族人群POAG 發(fā)病的影響因素。CDKN2B 基因rs1063192 位點(diǎn)G 等位基因可能通過調(diào)節(jié)相關(guān)信號(hào)通路，調(diào)節(jié)眼中部分組織表達(dá)，進(jìn)而誘發(fā)病理生理學(xué)改變，使POAG 發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加[27-28]。

綜上，CDKN2B 基因rs1063192 位點(diǎn)GG 基因型和G 等位基因可能與漢族人群POAG 發(fā)病有關(guān)，其多態(tài)性可增加漢族人群POAG 發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。