多功效原料大米發(fā)酵液的開發(fā)及其功效評(píng)價(jià)

式中：η為干燥t時(shí)間后草果脫水量，%；M0為草果初始含水量，%；Mt為微波干燥t時(shí)間后草果含水量，%。

大米發(fā)酵產(chǎn)物因?yàn)槠渚N選擇和工藝控制的不同，發(fā)酵產(chǎn)品中成分和用途及其功效會(huì)有所差異。該研究通過對(duì)川藏高原海拔3700m雪山線附近土壤中酵母菌進(jìn)行了篩選，通過平板畫線法，純化分離出19個(gè)菌株。對(duì)每個(gè)菌株進(jìn)行了擴(kuò)繁工作，并選取了對(duì)紫外線抵抗能力強(qiáng)、胞外酶較為單一的一株作為本實(shí)驗(yàn)的菌株母本進(jìn)行擴(kuò)大培育。通過分段控溫、控氧的方式進(jìn)行放大發(fā)酵，主要目標(biāo)產(chǎn)物為活性低聚糖和小分子肽類、氨基酸，并對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行了保濕、修護(hù)、抗氧化、美白的體外功效評(píng)價(jià)。

集成電路產(chǎn)業(yè)已經(jīng)是我國經(jīng)濟(jì)發(fā)展的支柱產(chǎn)業(yè)，也是電子、通信和測(cè)控等領(lǐng)域發(fā)展的基石．集成電路設(shè)計(jì)人才的培養(yǎng)也是事關(guān)國民經(jīng)濟(jì)發(fā)展的關(guān)鍵．本文根據(jù)“新工科”的發(fā)展要求，按照人才培養(yǎng)方案目標(biāo)，針對(duì)目前集成電路設(shè)計(jì)專業(yè)課程的實(shí)際情況，分析了課程體系、實(shí)踐環(huán)節(jié)中存在的主要問題，對(duì)電子科學(xué)與技術(shù)專業(yè)的集成電路設(shè)計(jì)課程進(jìn)行了改革，并對(duì)課程內(nèi)容等多方面進(jìn)行了優(yōu)化．為學(xué)校工科的發(fā)展，以及創(chuàng)新型和應(yīng)用型的設(shè)計(jì)人才的培養(yǎng)，進(jìn)行了有益的探索和實(shí)踐．

01 功效評(píng)價(jià)方案

1.1 基于DPPH自由基清除的抗氧化評(píng)價(jià)

抗氧化成分可以通過清除自由基來減緩肌膚的衰老。可通過原料清除DPPH自由基的能力，來評(píng)估抗氧化活性的大小。

1.2 基于角質(zhì)形成細(xì)胞遷移的修護(hù)效果評(píng)價(jià)

皮膚受到損傷后，皮膚內(nèi)的各種細(xì)胞主要通過細(xì)胞遷移到達(dá)損傷部位來進(jìn)行修復(fù)活動(dòng)，角質(zhì)形成細(xì)胞的迀移能力對(duì)表皮損傷修復(fù)具有重要作用

。可以通過評(píng)估樣品是否具有提升角質(zhì)形成細(xì)胞遷移的能力，說明產(chǎn)品是否具有肌膚修護(hù)功效。

1.3 基于免疫熒光法測(cè)定AQP3蛋白含量的保濕效果評(píng)價(jià)

水通道蛋白3（AQP3）可以促進(jìn)內(nèi)源性甘油以及皮脂腺中的甘油三酯運(yùn)輸進(jìn)入表皮，影響皮膚保濕功效，因此上調(diào)AQP3可以達(dá)到保濕功效

。可以通過測(cè)試基于角質(zhì)形成細(xì)胞，通過檢測(cè)樣品作用后，AQP3蛋白表達(dá)量的變化，評(píng)價(jià)待測(cè)樣品的保濕功效。

1.4 基于酪氨酸酶活性抑制、黑色素細(xì)胞的黑色素含量的美白效果評(píng)價(jià)

在皮膚黑色素生物合成中，酪氨酸酶是關(guān)鍵酶。評(píng)估原料對(duì)酪氨酸酶活性的抑制作用，以及通過離體培養(yǎng)人黑色素中的黑色素含量測(cè)定，可評(píng)估培養(yǎng)基中添加受試原料對(duì)黑色素的生成抑制來判定產(chǎn)品是否具有美白效果。

1.5 測(cè)試材料

降水天氣多或降水強(qiáng)度大的地區(qū)應(yīng)注意及時(shí)排澇，避免或減輕農(nóng)田漬澇和作物倒伏對(duì)產(chǎn)量形成的不利影響;青海東部、河套地區(qū)、內(nèi)蒙古東部、東北地區(qū)西部等地因地制宜做好蓄水保水工作。

無水乙醇、乙醚、氫氧化鈉、氨水、一水合檸檬酸、十二水合磷酸氫二鈉、DPPH(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl)、維生素E、MTT、DMSO、酪氨酸酶、左旋多巴、黑色素標(biāo)準(zhǔn)品、KC2500、胰酶、DMEM、抗萍滅劑、Hochest33342、PBS、無表皮生長因子(EGF)、PBS、4%多聚甲醛、檸檬酸鈉、Anti-AQP3抗體、Anti-Mouse-488(山羊抗鼠）、即用型山羊血清、曲酸、Medium-254、HMGS、胎牛血清。

“今年省公司制定了按照各個(gè)分公司下屬加油站同期比給予獎(jiǎng)勵(lì)的政策。例如，如果這個(gè)加油站這個(gè)月與去年同期相比有增量，就按增量的比例發(fā)放獎(jiǎng)金。”范好光告訴記者，這些獎(jiǎng)金直接發(fā)放到站經(jīng)理手里，再由站經(jīng)理按照站里員工貢獻(xiàn)情況兌現(xiàn)到個(gè)人。

酶標(biāo)儀(BioTek，Epoch)、CO

培養(yǎng)箱（Thermo，150I)、超凈工作臺(tái)（蘇凈安泰，SW-CJ-1F)、倒置顯微鏡（Olympus，CKX41)、微量振蕩器（其林貝爾，MM-1)、熒光顯微鏡（Leica，DM2500)、高速冷凍離心機(jī)(長沙湘儀，H1850R)、數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州國華，HH-4A)。

1.6 測(cè)試方法

1.6.1 DPPH自由基清除

孵育培養(yǎng)結(jié)束后，細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光檢測(cè)，結(jié)果匯總見圖4、表8及圖5。

（2）檢測(cè)：參照表1,設(shè)立樣品管（T)、樣品本底（T

)、DPPH管（C)和溶劑本底（C

)，每一樣品的每個(gè)受試濃度的樣品管（T)及DPPH管（C)需設(shè)立3支平行管，按要求加液反應(yīng)5min后在517nm處測(cè)定吸光值。

（3）計(jì)算DPPH自由基清除率。

（1）接種：角質(zhì)形成細(xì)胞以2.5E5個(gè)/孔的接種密度接種至6孔板，培養(yǎng)箱(37℃、5%CO

)中孵育過夜。

（3）給藥：根據(jù)表2試驗(yàn)分組設(shè)計(jì)，待6孔板中細(xì)胞鋪板率達(dá)到70%以上時(shí)，進(jìn)行分組給藥，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，每孔給藥量為2mL。培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)24h。

（4）劃痕、清洗、培養(yǎng)：孵育結(jié)束后，進(jìn)行劃痕后用PBS清洗，加入正常的細(xì)胞培養(yǎng)液，培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h。

（5）拍照分析：劃痕后0h在4倍鏡下拍照；劃痕24h后，用PBS清洗一次，4倍鏡下拍照。應(yīng)用GraphPad Prism Program軟件作圖分析。

（1）測(cè)試系統(tǒng)：人體角質(zhì)形成細(xì)胞傳代培養(yǎng)按4E4個(gè)/孔接種至24孔板，培養(yǎng)箱（37℃、5% CO

）中孵育過夜。

（2）配液:按試驗(yàn)設(shè)計(jì)（表3）分別配制受試物工作液。

（2）配液：按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)（表2）配置樣品工作液。

（3）給藥：根據(jù)上述表3試驗(yàn)具體設(shè)計(jì)，待24孔板中細(xì)胞鋪板率達(dá)到30%～50%時(shí)，進(jìn)行分組給藥，每孔加樣1mL，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。給藥完成后將24孔板放置在培養(yǎng)箱（37℃、5%CO

）中培養(yǎng)24h。

（4）處理：孵育培養(yǎng)結(jié)束后，吸棄舊液，1mL/孔PBS清洗3次，每孔加1mL 4%的多聚甲醛室溫固定爬片15min。固定結(jié)束后將24孔板放置于4℃下保存?zhèn)溆谩＝?jīng)羊血清封閉，一抗、二抗孵育，滴加Hochest33342染色。

樣品加液要求具體見表4。

（5）封片觀察拍照：用針頭挑出爬片，在載玻片上滴加一滴抗淬滅劑并將爬片反放于載玻片上。24h內(nèi)熒光顯微鏡拍照，分析檢測(cè)結(jié)果。

（1）測(cè)試系統(tǒng)：采用培養(yǎng)傳代人黑色素細(xì)胞為基礎(chǔ)，設(shè)定不同濃度梯度曲酸作為陽性對(duì)照，受試物用磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液稀釋為多級(jí)濃度樣品。

使用1mLEp管，設(shè)立樣品管（T）、樣品本底（T

）、酶反應(yīng)管（C）和溶劑（C

），按要求加液，置37℃水浴槽孵育l0min。依次在各管中加入400μL的左旋多巴溶液，控制每管反應(yīng)時(shí)間為5min,即刻將各管反應(yīng)溶液在475nm處測(cè)定吸光值。

(shotname , extension) = os.path.splitext(tempfilename)

A.計(jì)算酪氨酸酶抑制率。

3.財(cái)務(wù)報(bào)表分析報(bào)告難讀。上面提到，財(cái)務(wù)報(bào)表分析是財(cái)務(wù)人員的工作，是對(duì)財(cái)務(wù)數(shù)據(jù)的對(duì)比分析。財(cái)務(wù)是相對(duì)專業(yè)的知識(shí)，專業(yè)名詞、術(shù)語較多，非財(cái)務(wù)人員對(duì)這些財(cái)務(wù)專業(yè)名詞、術(shù)語比較陌生，不易理解，需要財(cái)務(wù)人員在撰寫財(cái)務(wù)報(bào)表分析報(bào)告上，進(jìn)行表述轉(zhuǎn)述，將一些會(huì)計(jì)專業(yè)術(shù)語，轉(zhuǎn)變?yōu)橐恍┤粘Ｓ谜Z，這樣有利于報(bào)告閱讀者更好理解、使用財(cái)務(wù)報(bào)表分析報(bào)告。但在實(shí)際操作中，財(cái)務(wù)人員習(xí)慣于其專業(yè)表述方式，撰寫的財(cái)務(wù)報(bào)表分析報(bào)告過于“專業(yè)”，影響了財(cái)務(wù)報(bào)表分析報(bào)告閱讀、使用。

（2）黑色素含量檢測(cè)

A.接種：按5E4個(gè)/孔的接種密度接種細(xì)胞至6孔板，培養(yǎng)箱（37℃、5%CO

)中孵育過夜。

B.配液：按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)（表5)配置受試物工作液。

C.給藥：根據(jù)表5試驗(yàn)設(shè)計(jì)，待6孔板中細(xì)胞鋪板率達(dá)到40%～50%時(shí)，進(jìn)行分組給藥，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，每孔給藥量為2mL。培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)72h。

D.細(xì)胞消化提取：培養(yǎng)結(jié)束PBS清洗一次，加入胰酶消化，收集細(xì)胞至Eppendorf管中，離心棄上清液。加入1.2mL混合液（蒸循水∶無水乙醇∶乙醚=2∶5∶5，v/v/v)，渦旋振蕩，室溫放置30min后，離心棄上清液，加入DMSO的NaOH水溶液，采用封口膜封口，放置于80℃水浴中加熱40min。

E.檢測(cè)分析：加熱結(jié)束后，待溫度平衡至室溫后，在405nm波長測(cè)吸光度值，數(shù)值進(jìn)行軟件分析。

2.開發(fā)性特征。根據(jù)相關(guān)的智能理論知識(shí)可知，人的智能存在多元化的發(fā)展形勢(shì)，其決定性因素是因?yàn)槊總€(gè)人都擁有相同的智能，只是后天的開發(fā)和訓(xùn)練程度不同，最終導(dǎo)致每個(gè)人擁有不同的智能因素，進(jìn)而形成現(xiàn)在的豐富多彩的社會(huì)生活。可見，人的智能是需要后天的不斷學(xué)習(xí)和教育進(jìn)行開發(fā)和加強(qiáng)，在此過程中，對(duì)人類智能開發(fā)的程度越高，其表現(xiàn)和發(fā)展就越明顯，其智力水平也就相對(duì)較高。

02 功效評(píng)價(jià)結(jié)果

2.1 基于DPPH自由基清除的抗氧化效果

檢測(cè)結(jié)果顯示，較高濃度條件下，該大米發(fā)酵液可通過對(duì)DPPH自由基清除達(dá)到抗氧化效果。

2.2 基于角質(zhì)形成細(xì)胞遷移的修護(hù)效果評(píng)價(jià)

基于測(cè)試方法，將空白對(duì)照組遷移率歸一，計(jì)算各組相對(duì)遷移率，細(xì)胞遷移照片見圖2所示，數(shù)據(jù)分析結(jié)果見表7和圖3所示。

與BC組相比，PC組的細(xì)胞相對(duì)遷移率顯著上升，說明測(cè)試體系有效。

與BC組相比，PC組的AQP3蛋白含量顯著上升，樣品組大米發(fā)酵液-0.5%、大米發(fā)酵液-1.0%和大米發(fā)酵液-2.5% 的AQP3蛋白含量均顯著上升。該大米發(fā)酵液在濃度為0.5%、1.0%和2.5%時(shí)，可通過提高AQP3蛋白的表達(dá)而發(fā)揮保濕功效。

與BC組相比，樣品組酵母菌/大米發(fā)酵產(chǎn)物濾液-1.0%、酵母菌/大米發(fā)酵產(chǎn)物濾液-2.5%和酵母菌/大米發(fā)酵產(chǎn)物濾液-4.0%組的細(xì)胞相對(duì)遷移率均顯著提高。說明該產(chǎn)品有修護(hù)皮膚屏障的功效。

2.3 基于免疫熒光法測(cè)定AQP3蛋白含量的保濕效果評(píng)價(jià)

（1）測(cè)試系統(tǒng)：以維生素E為陽性對(duì)照，同受試物用95%乙醇溶解稀釋成不同濃度梯度進(jìn)行自由基清除試驗(yàn)。

竹筍營養(yǎng)成分的測(cè)定嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范進(jìn)行操作，其中竹筍水分(含水量)采用烘箱干燥法進(jìn)行測(cè)定(GB/T 5009.3-2003)，灰分含量采用直接灰化法進(jìn)行測(cè)定(GB/T 5009.4-2003)，粗脂肪含量采用索氏提取法進(jìn)行測(cè)定(GB/T 14772-2008)，粗蛋白含量用凱氏定氮法進(jìn)行測(cè)定(GB/T 14771-1993)[7]，氨基酸含量采用氨基酸自動(dòng)分析儀進(jìn)行測(cè)定( GB/T 5009.124-2003)[8]。

1.我們?yōu)榱嘶蠲詵|西，為了保命又不敢吃東西；2.交話費(fèi)的時(shí)候，才發(fā)現(xiàn)自己的廢話那么值錢；3.世界上最遙遠(yuǎn)的距離，就是星期一上午到星期五下午；4.婚姻是愛情的墳?zāi)梗杀氖牵∪€要來盜墓。

2.4 基于酪氨酸酶活性抑制、黑色素細(xì)胞的黑色素含量的美白效果評(píng)價(jià)

基于測(cè)試方法，進(jìn)行酪氨酸酶抑制率檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果匯總?cè)绫?所示，趨勢(shì)圖如圖6所示：

嫁接育苗選擇嫁接最適期，選用半木質(zhì)化健壯良種穗條，做好嫁接后苗木成活期的保溫控濕管理，調(diào)節(jié)適宜苗木生長的光照強(qiáng)度，提供合理的溫濕度條件，促進(jìn)嫁接愈合和營養(yǎng)生長，從而提高苗木成活率。

對(duì)于APL患者，不管是MS作為首發(fā)表現(xiàn)還是復(fù)發(fā)表現(xiàn)，維A酸的早期使用可使患者生存獲益，但對(duì)于APL合并MS最佳治療方案的確定，還需要更多前瞻性和大樣本的臨床試驗(yàn)進(jìn)一步研究。目前資料顯示，盡管APL患者的長期生存率可達(dá)90%以上，但APL合并MS仍預(yù)后較差，MS作為首發(fā)表現(xiàn)的APL患者無病生存期可能要短于作為復(fù)發(fā)表現(xiàn)的APL。

基于測(cè)試方法，進(jìn)行收集細(xì)胞，進(jìn)行黑色素含量抑制率測(cè)定，結(jié)果如表10所示，變化趨勢(shì)圖如圖7所示：

與 BC組相比， PC (光甘草定）組黑色素含量顯著下降，黑色素含量抑制率為21.22%, 說明本次測(cè)試有效。

與 BC組相比，樣品組酵母菌/大米發(fā)酵產(chǎn)物濾液-2.5%的黑色素含量顯著下降， 黑色素含量抑制率為21.42% 。

由此說明，該大米發(fā)酵液可通過抑制酪氨酸酶活性和降低黑色素含量，發(fā)揮美白功效。

結(jié)論

選取支鏈淀粉及蛋白質(zhì)含量更加豐富的優(yōu)質(zhì)有機(jī)大米為原料，經(jīng)高海拔、強(qiáng)紫外線、極端溫差的自然環(huán)境中篩選出胞外酶單一性較好的特殊菌種使用分段控溫供氧工藝發(fā)酵，得到的產(chǎn)品保留了大米的特殊清香，沒有一般釀酒酵母發(fā)酵可能產(chǎn)生的乳酸、丙酸、丁酸的氣味，減少了有機(jī)酸對(duì)皮膚的刺激性，產(chǎn)品更易為消費(fèi)者所接受。

另通過體外生化法與細(xì)胞法進(jìn)行功效評(píng)價(jià)，結(jié)果表明該產(chǎn)品體外功效評(píng)價(jià)顯示：在10%、25%、50%、75%、100%濃度時(shí)，DPPH清除率分別為0.39%、3.14%、5.49%、7.37%、12.08%，表明產(chǎn)品可通過清除自由基的方式達(dá)到抗氧化的作用。離體培養(yǎng)角質(zhì)成形細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)顯示在濃度為1.0%、2.5%和4.0%時(shí)，可以通過促進(jìn)細(xì)胞遷移達(dá)到修護(hù)功效。在濃度為0.5%、1.0%和2.5%時(shí)，可通過提高角質(zhì)成形細(xì)胞中AQP3蛋白的表達(dá)而發(fā)揮保濕功效。酪氨酸酶活性抑制IC

為18.3%,基于人黑色素細(xì)胞，濃度2.5%時(shí)黑色素含量抑制率21.42%，可以達(dá)到美白效果。

合并重組后新企業(yè)的財(cái)務(wù)管理效率將受到影響，針對(duì)這一問題，企業(yè)可為財(cái)務(wù)部門設(shè)置數(shù)據(jù)收集系統(tǒng)，以提升管理效率。例如，企業(yè)可在各終端部門設(shè)置網(wǎng)絡(luò)設(shè)備，該部門所產(chǎn)生的全部財(cái)務(wù)信息，將以數(shù)據(jù)的形式在當(dāng)日上傳至財(cái)務(wù)部門的數(shù)據(jù)庫。財(cái)務(wù)部門可在隔日對(duì)這部分?jǐn)?shù)據(jù)進(jìn)行整理，并參考以往的數(shù)據(jù)對(duì)上傳數(shù)據(jù)進(jìn)行審核。通過這樣的措施，財(cái)務(wù)部門可更為高效地獲得基層數(shù)據(jù)。同時(shí)財(cái)務(wù)部門應(yīng)當(dāng)統(tǒng)一數(shù)據(jù)格式，從而使數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)工作更加便捷。利用這一系統(tǒng)，財(cái)務(wù)部門將實(shí)現(xiàn)全網(wǎng)絡(luò)化辦公。

李輝：“要求經(jīng)濟(jì)獨(dú)立的男性根本就是自私的，女人天生就是弱勢(shì)群體。能夠有實(shí)力養(yǎng)著自己的妻子，把自己的財(cái)務(wù)全權(quán)交給她打理，這是信任，更是愛！”

基于發(fā)酵產(chǎn)物的多樣性而言，目前可以通過硫酸苯酚法測(cè)定總糖含量、茚三酮顯色法測(cè)定氨基酸含量。但具體糖類組分構(gòu)成尚不明確，混合肽類成分的氨基酸連接形式也尚不明確，故具體起到保濕、美白、修護(hù)和抗氧化作用的成分有待進(jìn)一步深入研究。

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