CA125、MDM2、VEGF、FAK在子宮腺肌癥中的表達水平及其意義

溫馨 薩日娜 宋建東

子宮腺肌癥是一種常見的婦科疾病，主要發生在絕經前婦女，可導致慢性盆腔疼痛、痛經、不孕和不良產科結局。據估計，子宮腺肌癥在絕經前婦女中的發病率最高可達80%，在患有不孕癥和慢性盆腔痛的婦女中患病率更高[1]。子宮腺肌癥的主要組織學特征是在子宮肌層內存在子宮內膜腺體和間質，周圍有平滑肌增生。盡管子宮腺肌癥于1860 年由病理學家Carl von Rokitansky 首次描述，并于1962 年被婦科醫生Ludwig Emge 確認為“難以捉摸的疾病”，但至今子宮腺肌癥的病因仍然不明，主要源于歷史上依賴于子宮切除術后子宮標本的組織病理學檢查來診斷疾病，以及過去缺乏可靠的術前診斷，限制了人們對其重要性的認知及進一步研究相關癥狀、合并癥和對生活質量影響的能力。因此，尋找和發現可靠早期的診斷生物標志物對改善子宮腺肌癥患者生育能力具有重要的意義[2-3]。目前，解釋子宮腺肌癥病理學仍然沒有定論，普遍認為子宮腺肌癥是一種與惡性行為相關的良性疾病，包括侵襲能力增強、轉移、細胞凋亡改變及子宮內膜血管生成增加。糖類抗原125（CA125）是一種高分子量糖蛋白，傳統上與卵巢癌相關，在其他良性疾病中可能升高[4]，黏著斑激酶（FAK）是一種細胞質蛋白酪氨酸激酶，在調節細胞黏附、遷移、增殖和存活方面發揮重要作用[5]，血管內皮生長因子（VEGF）是目前已知最為關鍵的血管形成因子[6]，鼠雙微基因2（MDM2）是腫瘤抑制因子P53 的重要調節基因，通過調節P53 促進腫瘤細胞增殖和生長來促進腫瘤的發生和發展[7]。基于此，本研究探討CA125、MDM2、VEGF、FAK 在子宮腺肌癥中的表達水平及其意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2020 年2 月-2022 年2 月于內蒙古醫科大學附屬醫院80 例經子宮切除術治愈并經子宮標本的組織病理學檢查確診為子宮腺肌癥患者的臨床資料，將其設為觀察組，分別取其異位內膜組織和在位內膜組織；并分析同期因其他婦科疾病（排除子宮腺肌癥、子宮內膜異位癥）來本院接受手術治療，且子宮內膜組織標本正常的80 例患者的臨床資料，將其設為對照組。觀察組納入標準：（1）子宮腺肌癥患者均經病理確診，無其他內科合并癥；（2）術前3 個月未經激素治療；（3）臨床資料完整。對照組納入標準：（1）患有除子宮腺肌癥、子宮內膜異位癥以外的良性婦科疾病；（2）未經任何藥物治療；（3）臨床資料完整。排除標準：（1）合并有嚴重肝腎功能不全、血液系統疾病、免疫系統疾病及惡性腫瘤。（2）入院前接受過對癥治療。本次研究獲得到本院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 血清標本及其檢測方法 抽取兩組患者清晨空腹靜脈血5 mL，靜置后離心，1 000 r/min 離心20 min，將上層血清吸取置于EP 管中，密封、標記，放于-80 ℃冰箱保存待測。血清CA125、MDM2、VEGF、FAK 水平的測定均采用酶聯免疫吸附法（ELISA）測定，CA125 試劑盒購自北京普贊生物技術有限公司，MDM2 試劑盒購自武漢伊萊瑞特生物科技有限公司，FAK 試劑盒購自上海意杰生物科技有限公司，VEGF 試劑盒購自上海酶聯生物技術有限公司，所有檢測過程均嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.2.2 組織標本及其檢測方法 術中取觀察組患者異位病灶和在位內膜組織及對照組的正常子宮在位內膜組織，用0.9%生理鹽水沖洗血液，然后放入10%福爾馬林中進行固定，乙醇脫水、常規石蠟包埋，制成厚度約為3 mm 的石蠟切片，采用免疫組織化學進行染色，即55～60 ℃烤片10 min、脫蠟、洗滌、抗原修復、洗滌振蕩、封閉非特異結合位點、分別滴加一抗（VEGF 抗體濃度為1∶500，CA125抗體濃度為1∶250，MDM2抗體濃度為1∶500，FAK 抗體濃度1∶100）4 ℃過夜、洗滌振蕩、滴加二抗室溫孵育、洗滌、滴加二氨基聯苯胺（DAB）顯色后脫水、蘇木素復染、樹脂膠封片。鼠抗人VEGF 單克隆抗體、一鼠抗人CA125 單克隆抗體、鼠抗人FAK 克隆抗體及鼠抗人MDM2 均購Abcam公司。

1.2.3 免疫組化結果判定方法 用低倍和高倍鏡觀察切片，陽性細胞為鏡下組織細胞結構清晰，有棕黃色顆粒沉著，染色明顯高于背景。VEGF 陽性部位位于胞漿、MDM2 陽性部位位于細胞核和胞質中、CA125 和FAK 陽性部位位于細胞膜和細胞質。參照梁爽等[8]研究中的免疫組化結果評分方法對兩組組織標本CA125、MDM2、VEGF、FAK 蛋白表達進行評分。即在細胞密集區隨機選取10 個高倍視野，計數200 個細胞。計算陽性細胞百分率，低于5%為0 分，高于5%且不高于20%為1 分，高于20%且不高于50%為2 分，高于50%且不高于75%為3 分，高于75%為4 分，根據染色強度分為不著色（0 分）、淺棕色（1 分）、棕色（2 分）和深棕色（3 分），最后將陽性率評分與強度評分相乘所得之積即為該組織的免疫組化最終評分。

1.3 統計學處理 應用SPSS 23.0 統計軟件對研究數據進行統計分析，連續變量用（）描述，符合正態分布的連續變量比較采用t 檢驗，分類變量用率（%）描述，采用χ2檢驗，使用各指標血清檢測結果及預測概率作為協變量構建ROC 曲線。曲線下面積（AUC）用于評估每種指標的診斷價值。AUC大于0.9 表明預測效果極佳。AUC 介于0.7～0.9 表明預測效果良好。AUC＞0.5 且＜0.7 表明預測效果不佳。AUC≤0.5 表明該指標缺乏診斷價值。以P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較 觀察組年齡26～51 歲，平均（37.21±6.50）歲；對照組年齡24～49 歲，平均（36.96±6.12）歲，兩組患者年齡比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

2.2 兩組治療前血清CA125、MDM2、VEGF、FAK水平比較 與對照組比較，觀察組治療前血清CA125、MDM2、VEGF、FAK 水平均顯著升高，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組治療前血清CA125、MDM2、VEGF、FAK水平比較（）

表1 兩組治療前血清CA125、MDM2、VEGF、FAK水平比較（）

2.3 兩組組織標本CA125、MDM2、VEGF、FAK蛋白表達比較 觀察組異位內膜組織中CA125、MDM2、VEGF、FAK 蛋白表達均顯著高于在位內膜組織，差異均有統計學意義（P＜0.05），但觀察組在位內膜組織中CA125、MDM2、VEGF、FAK 蛋白表達與對照組內膜組織相比，差異均無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 兩組組織標本CA125、MDM2、VEGF、FAK蛋白表達比較[分，（）]

表2 兩組組織標本CA125、MDM2、VEGF、FAK蛋白表達比較[分，（）]

*與對照組在位內膜組織比較，P＜0.05；#與觀察組在位內膜組織比較，P＜0.05。

2.4 血清VEGF、FAK、CA125、MDM2 在子宮腺肌癥中的診斷價值分析 根據上述檢測結果繪制ROC 曲線，VEGF、FAK、CA125、MDM2 單獨檢測的AUC分別為0.770、0.654、0.648、0.645，均顯著低于聯合檢測的0.916，差異均有統計學意義（ZVEGF=2.036，P=0.042；ZFAK=3.291，P=0.001；ZCA125=3.221，P=0.001；ZMDM2=3.367，P=0.001）。見表3 和圖1。

表3 VEGF、FAK、CA125、MDM2診斷子宮腺肌癥效能分析

圖1 VEGF、FAK、CA125、MDM2診斷子宮腺肌癥ROC曲線

3 討論

子宮腺肌癥是一種常見的子宮疾病，其特征是在子宮肌層中存在子宮內膜腺體和間質，癥狀是非特異性的，并常與其他婦科疾病共存，早期識別診斷和治療具有挑戰性。目前子宮腺肌癥的發病機制尚不明確，臨床多認為痛經、經量過多和不孕癥可能是子宮內膜和肌層成分的炎癥、細胞凋亡、血管生成和收縮異常的結果[9-11]。

CA125 是單克隆抗體OC125 特異識別的腫瘤抗原，與卵巢癌密切相關，最近研得出結論，高水平的CA125 可見于良性婦科疾病而非惡性腫瘤。這主要基于CA125 為腔上皮化生組織細胞膜表面的膜蛋白抗原，在子宮內膜疾病早期具有較強地分泌CA125 的功能，通過影響孕酮分泌進一步促進子宮內膜增生，文獻[12-13]發現子宮腺肌癥女性的CA125 陽性率高于正常對照組或平滑肌瘤患者，且CA125 水平與子宮大小呈正相關，還發現術后1 周平均CA125 水平顯著下降。VEGF 為促血管生長因子，在子宮內膜異位癥中的作用已經確立，子宮內膜細胞具有侵襲性，需要血管生成才能在異位部位建立。而子宮內膜異位癥與子宮內膜異位癥密切相關，故血管生成因子與發生子宮內膜異位癥和子宮腺肌癥的風險有關，盡管關于血管生成在子宮腺肌癥中的作用知之甚少，但文獻[14-16]發現與沒有子宮腺肌癥的對照患者的子宮內膜相比，血管生成標志物的表達增加和抗血管生成標志物的減少，以及異位和在位子宮內膜中血管密度（MVD）和毛細血管特征的增加，證實血管生成可促進子宮腺肌癥發病。上皮間質轉化（EMT）是上皮細胞轉變為間充質細胞的過程，常見于胚胎發育、腫瘤轉移和纖維化疾病中，有研究表明，EMT 在子宮腺肌癥的發展中發揮重要作用，FAK 可能促進這一過程[17-18]，Zheng 等[19]研究顯示FAK 可誘導PI3K/AKT 信號級聯，導致EMT 標志物的上調，在子宮腺肌疾病的發生、發展過程中發揮重要作用。MDM2 是抑癌基因P53 的重要調節基因，可通過促進腫瘤細胞增殖和生長來促進腫瘤的發生和發展，已有文獻[20]表明，MDM2 在子宮內膜異位癥和子宮腺肌癥中升高。本研究結果顯示，觀察組血清CA125、MDM2、VEGF、FAK 及異位組織中CA125、MDM2、VEGF、FAK 表達均顯著高于對照組（P＜0.05），說明血清及異位組織中CA125、MDM2、VEGF、FAK 的表達與子宮腺肌癥疾病發生、發展密切相關，ROC 曲線分析顯示，血清VEGF、FAK、CA125、MDM2 聯合診斷子宮腺肌癥敏感度和特異度可分別達到84.40%和92.90%，故臨床可通過血清VEGF、FAK、CA125、MDM2 聯合檢測對子宮腺肌癥患者進行早期診斷及預后評估。

綜上所述，CA125、MDM2、VEGF、FAK 的表達與子宮腺肌疾病發生、發展密切相關，臨床可通過監測患者血清及組織中CA125、MDM2、VEGF、FAK 的水平判斷疾病進展和預后。鑒于子宮腺肌癥病理機制尚未明確，未來需要更多的研究確定上述生物標志物在子宮腺肌癥中的具體的作用機制，以期成為預防和治療子宮腺肌癥的潛在靶點。