多重分子標志物病理切片聯合檢測對老年食管鱗狀細胞癌患者預后的預測價值

張海燕 張冬云 吳紅芳

(南陽醫學高等專科學校 1第一附屬醫院病理科，河南 南陽 473000；2病理教研室)

食管癌多發于食管黏膜上皮及腺體，具有較高的發病率〔1，2〕。根據組織學分類，其可分為食管鱗狀細胞癌和腺癌，其中前者在我國占比90%〔3〕。目前，針對食管鱗狀細胞癌的主要治療方式仍以外科手術為主，患者5年生存率仍較低，為26.2%～49.4%，尤其是對于老年患者來說，由于此類患者體質和營養較差，故5年生存率更低，研究指出TNM分期對評估老年患者預后準確性很低〔4，5〕。因此，尋找一種有效評估老年食管鱗狀細胞癌患者預后的方法，對制定治療方案及術后隨訪均具有重要意義。葡萄糖調節蛋白(GRP)78是內質網應激時所產生的一類應激蛋白，有研究顯示〔6〕，GRP78高表達可能是影響胃癌患者預后不良的標志物之一；此外，研究顯示〔7〕GRP78高表達與食管癌的發生有關。基質金屬蛋白酶(MMP)-2能夠使腫瘤細胞突破基底膜以侵襲鄰近組織，促進腫瘤微血管的形成，因而其與腫瘤的發生密切相關〔8〕。酪氨酸蛋白激酶(PTK)7與胰腺癌腫瘤分期、淋巴結轉移有關，故其高表達可能提示預后不良〔9〕。CerbB-2是細胞膜上的一種蛋白，相關研究顯示CerbB-2高表達患者預后較差〔10〕。本研究旨在評估以上指標聯合檢測對老年食管癌患者的預測價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015年1月至2016年1月南陽醫學高等專科學校第一附屬醫院收治食管鱗狀細胞癌患者180例，其中男102例，女78例；年齡60～80歲，平均(70.23±4.32)歲。納入標準：(1)經病理學確診為食管鱗狀細胞癌；(2)均為首次確診，且進行手術治療；(3)年齡≥60歲；(4)患者及家屬簽署知情同意書。排除標準：(1)合并其他惡性腫瘤；(2)手術前經過放化療治療；(3)合并免疫系統疾病者；(4)隨訪資料不完整者。收集所有患者的腫瘤組織，并隨機收集100例癌旁組織。

1.2檢測方法 癌組織用甲醛固定、脫水、浸蠟，石蠟包埋，連續切片厚度為4 μm。在二甲苯中脫蠟、濃度梯度乙醇溶液水化后，用3%H2O2溶液室溫處理10 min后用磷酸鹽緩沖液漂洗3次，每次5 min，在120℃中加熱3 min完成抗原修復。根據試劑盒說明書添加GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2一抗，于4℃下孵育12 h后加入二抗在室溫下溫育10 min，加入二氨基聯苯胺(DAB)復染5 min。

1.3結果判斷標準 隨機選取5個視野，結合染色強度和陽性細胞比例進行評分。GRP78和MMP-2判定標準〔11，12〕：陽性細胞占比：≤5%為0分，6%～25% 1分，26%～50% 2分，51%～75% 3分，>75% 4分；著色深度：不著色為0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分，兩項相乘所得，分數≤3分為陰性，>3分為陽性。PTK7判定標準〔13〕：按染色面積分0～4分，染色強度分0～4分，兩項相乘，分數≤2分為陰性，>3分為陽性。CerbB-2判定標準〔14〕：陽性細胞占比：<30% 1分，30%～70% 2分，>70% 3分；著色深度和兩項相乘分數判定同GRP78和MMP-2。

1.4統計學分析 采用SPSS22.0軟件進行χ2檢驗；采用MedCalc軟件繪制受試者工作特征(ROC)曲線評估GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2預后價值，計算曲線下面積(AUC)。

2 結 果

2.1食管鱗狀細胞癌組織和癌旁組織中GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2表達 食管鱗狀細胞癌組織中GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2陽性表達率均明顯高于癌旁組織(P<0.001)，見表1。

表1 食管鱗狀細胞癌組織和癌旁組織中GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2陽性表達〔n(%)〕

2.2食管鱗狀細胞癌組織中GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2陽性表達與臨床病理參數的關系 GRP78和MMP-2陽性表達與分化程度、臨床分期及淋巴結轉移有關(P<0.05)，PTK7和CerbB-2陽性表達與臨床分期及淋巴結轉移有關(P<0.05)，見表2。

表2 GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2陽性表達與食管鱗狀細胞癌患者臨床病理參數的關系(n)

2.3食管鱗狀細胞癌術后5年生存率影響因素 隨訪至2020年12月底，死亡118例，生存62例，GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2陰性表達患者5年生存率均明顯高于陽性表達患者〔20例(54.05%)vs 42例(29.37%)、χ2=7.931,P=0.005;30例(47.62%) vs 32例(27.35%)、χ2=7.450,P=0.006;24例(45.28%)vs 38例(29.92%)、χ2=3.908,P=0.048;16例(53.33%)vs 46例(30.67%)、χ2=5.688,P=0.017〕。

2.4GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2聯合檢測評估患者預后 四項聯合的AUC最大，CerbB-2靈敏度最高，MMP-2特異度最高，見表3和圖1。

表3 GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2聯合檢測評估患者預后〔%(n/N)〕

圖1 GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2聯合檢測評估患者預后的ROC曲線

3 討 論

隨著分子生物學的發展，很多學者發現了與食管癌有關的生物學指標，GRP78是一種免疫球蛋白重鏈結合蛋白，常常定位于真核生物細胞內質網膜上，可參與蛋白質折疊轉運、維持內環境等生理過程，有研究顯示GRP78能夠在某種程度上降低細胞對殺傷性T細胞的敏感度以阻止細胞凋亡，此外還能通過降低細胞毒性T細胞對腫瘤殺傷力以促進腫瘤細胞增殖〔15，16〕。MMPs是一類參與細胞外基質和基底膜降解的蛋白水解酶，其可參與腫瘤浸潤、轉移等，其中MMP-2是MMPs中的明膠酶，其可降解基底膜蛋白等成分，在腫瘤新生血管中也發揮重要作用〔17〕。PTK7是一種具有7個免疫球蛋白樣結構域的細胞外結構域，是假激酶的成員之一，有研究顯示PTK7會在食管癌患者中過表達，參與腫瘤的增殖和遷移〔13，18〕。CerbB-2基因是一種癌基因，主要定位于人體染色體17q21，編碼產物是糖蛋白，其具有酪氨酸激酶活性，其與表皮生長因子受體相似，故能夠與表皮生長因子配體相結合以促進腫瘤細胞的增殖和分裂，是預后不良的一個重要指標〔19〕。

本研究提示GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2可能參與食管癌惡性程度的發生。GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2陽性表達促進腫瘤分化、淋巴結轉移及較高的臨床分期，此研究結果與多項研究結果一致〔12，14，20，25〕。此外，本研究結果提示GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2陽性患者預后較差，因此對于呈陽性患者而言，應該給予更為積極的輔助放化療。GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2聯合檢測對食管鱗狀細胞癌患者具有較高的預測價值。