氟康唑片在中國健康受試者的生物等效性研究

張麗英，郭彩會，宋浩靜，劉亞麗（.河北省人民醫院藥學部，石家莊 05005；.石家莊四藥有限公司，石家莊 0500）

氟康唑作為氟代三唑類抗真菌藥物，主要是通過抑制真菌細胞膜合成受阻，進而影響真菌細胞的生長繁殖。因氟康唑具有抗真菌譜廣，抗菌活性強，口服吸收良好，在體內分布廣，毒性低等特點，在臨床上得到廣泛應用。本試驗參考《以藥動學參數為終點評價指標的化學藥物仿制藥人體生物等效性研究技術指導原則》，研究氟康唑片的人體生物等效性。

1 材料與研究對象

1.1 試藥和儀器

氟康唑片受試制劑（T）（規格：150 mg /片，石家莊四藥有限公司，批號：FZ16120901）；氟康唑片參比制劑（R）（規格：150 mg /片，Pharmaceuticals LLC，批號：H79933）。氟康唑片化學對照品（純度：99.7%，批號：100314-201605，中國食品藥品檢定研究院）；氟康唑片-d4（內標）（純度：98.7%，批號：1132-051A1，加拿大TLC Pharmaceutical Standards 公司）。空白基質（人血漿和人全血，肝素鈉抗凝）均來自中國健康志愿者，由河北省人民醫院Ⅰ期臨床研究室提供。甲醇（HPLC 級）、乙腈（HPLC 級）、甲酸（LC/MS級）（賽默飛世爾科技有限公司），甲酸（色譜級，Aladdin）。

1.2 受試者選擇與入組完成情況

本試驗方案經河北省人民醫院倫理委員會批準[（2017）藥倫審第（02）號]。所有受試者均在充分了解本試驗的目的、方法及風險后，自愿簽署知情同意書，年齡要求18 ～45 歲，單一性別受試者人數不少于總人數的 1/3，體質量指數在19.0 ～26.0 kg·m；無濫用藥物史、藥物依賴史；近3 個月內未參加過其他臨床試驗且未獻血；近2 周內未服用任何藥物；統一進行查體和實驗室檢查，經篩選合格并隨機納入空腹試驗的受試者24 例，餐后試驗的受試者因篩選困難，合格21 例，雖未滿足方案，但病例數符合相關法規要求。45 例受試者均按要求完成試驗，空腹組與餐后組健康受試者的一般資料見表1。

表1 空腹組與高脂餐后組健康受試者的一般資料
Tab 1 General information of healthy subjects in the fasting group and the postprandial group

一般資料空腹組（n ＝24）餐后組（n ＝21）性別[n（%）]男15（62.5）12（57.1）女9（37.5）9（42.9）年齡/歲 30.2±6.09 29.0±7.76身高/cm168.50±9.103166.48±6.783體質量/kg 64.29±8.523 62.33±8.558 BMI/（kg·m－2） 22.59±1.853 22.42±1.956

2 方法

2.1 給藥方案與血樣采集

本研究采用單中心、單劑量、隨機、開放、兩周期、自身交叉對照試驗設計，評價氟康唑片在空腹及高脂餐后兩種狀態下的生物等效性研究。空腹組24 例，高脂餐組21 例，分別將空腹組和高脂餐組的健康受試者隨機分為兩組，交叉給藥，每周期給藥一次，洗脫期為 14 d。空腹組受試者空腹過夜 10 h 以上，服用相應受試制劑或參比制劑150 mg，用 240 mL 水送服，于給藥前1 h 內（0 h）和給藥后0.25、0.5、1、1.5、2、2.5、3、6、12、24、36、48、72、96、120 h 采集靜脈血，每次取血約4 mL 至EDTA-K抗凝真空采血管中。高脂餐組受試者空腹過夜10 h 以上，于第2日早上在服藥前 30 min 開始高脂（提供食物中約50%的熱量）高熱量餐（約800 ～1000 kcal）（高脂餐成分見表2，30 min 內結束進餐），在進餐后30 min 時開始服用相應受試制劑或參比制劑，用水240 mL 送服，于高脂餐后服藥前（0 h）和給藥后0.25、0.5、1、1.5、2、2.5、3、6、12、24、36、48、72、96、120 h 采集靜脈血，每次取血約4 mL 至EDTA-K抗凝的真空采血管中。空腹組和高脂餐組所采集的血樣在1 h 內4℃、1700 g離心10 min，所有離心后血漿樣品分成兩份，在－60℃冰箱中保存，以供藥動學分析。

表2 高脂餐成分表
Tab 2 Ingredient list of high fat meal

總熱量/kcal伊利純牛奶250 mL32 85.550167.5雨潤臺式烤腸60 g 43.4 76.7 21.4141.5煮蛋約110 g 45.5 88.8 7.9142.2味出道牛角面包115 g 34.0283.6209.8527.4總計154.9534.6289.1978.6種類總量蛋白質/kcal脂肪/kcal碳水化合物/kcal

2.2 測定方法與血樣處理

2.2.1 色譜條件 色譜柱：GL Sciences InertSustain C（3 μm，2.1 mm×50 mm）；柱溫：40 ℃；閥R：初始值1；自動進樣器溫度：4℃；流動相：0.1%甲酸水（A）-100% 乙腈（B）；梯度洗脫（0 ～1.3 min，15.0%→50.0%B；1.3 ～1.6 min，50.0%→95.0%B；1.6 ～2.5 min，95.0%B；2.5 ～2.6 min，95.0%→15.0%B；2.6 ～3.5 min，15.0%B）；流速：0.4 mL·min；進樣體積：3.0 μL；分析時間：3.5 min。

2.2.2 質譜條件 電離化模式：ESI；接口溫度：300 ℃；DL 溫度：250 ℃； 霧化氣流量：3.00 L·min；加熱氣流量：10.00 L·min；加熱塊溫度：400℃；干燥氣流量：10.00 L·min；分析模式：正離子模式（MRM）。氟康唑的離子對：307.10/220.10，駐留時間：100.0 ms，碰撞能量（CE）：－17.0 V；內標氟康唑-d4 的離子對：311.10/223.10，駐留時間：100.0 ms，碰撞能量（CE）：－18.0 V。

2.2.3 血漿樣品處理 樣品室溫下融化后，渦旋混勻，吸取30.0 μL 樣品（校正標樣、質控樣品或測試樣品）至96 孔板中，對于雙空白樣品或QC樣品，加入30.0 μL 空白基質；加入30.0μL 內標溶液，對于雙空白樣品加入30.0 μL 50%ACN 溶液；加入180.0 μL 的100%乙腈，渦旋約10 min，在約4 ℃條件下2600 g 離心10 min；轉移30.0 μL 上清液至已加入270.0 μL 30%乙腈溶液的96 孔板中，渦旋5 min，待進樣。

2.3 統計學處理

采用WinNonlin 7.0 軟件對氟康唑的參比制劑和受試制劑的血藥濃度進行非房室模型藥動學參數的估算分析，其他分析及作圖采用SAS 9.4軟件完成。采用BES，將主要藥動學參數

C

、

AUC

、

AUC

經對數轉換后，進行方差分析和90%置信區間分析，將

t

進行配對秩和檢驗，評價兩制劑的生物等效性。

3 結果

3.1 方法學考察

液相色譜串聯質譜（LC-MS/MS）法的方法學驗證由蘇州國辰科技股份有限公司生物分析部完成。血漿中內源性物質不干擾氟康唑的測定。氟康唑在10.0 ～5000 ng·mL與峰面積線性關系良好，準確度及精密度結果見表3。血漿樣品中氟康唑的提取回收率為95.0%～99.9%，內標氟康唑-d4 的回收率為 91.7%。氟康唑在 25 000 ng·mL濃度范圍內，稀釋因子為 1∶10 時具有良好的稀釋可靠性。血漿樣本分別在－20℃和－80℃條件下儲存28 d、90 d 的穩定性良好，血漿樣本在－60℃條件下經過5 次凍融循環的穩定性良好；血漿樣本在處理前室溫條件下放置25 h 以及提取后在自動進樣器（溫度設置：4℃）放置94 h 穩定性良好；全血樣本于冰浴條件下放置2 h 內的穩定性良好；溶血基質效應、高脂基質效應、殘留均不影響血漿中氟康唑的準確定量。方法學驗證結果表明本方法可用于臨床試驗血漿樣品的分析。

表3 血漿中氟康唑的精密度和準確度
Tab 3 Precision and accuracy of fluconazole in human plasma

質量濃度/（ng·mL－1）批內批間測定值/（ng·mL－1）RSD/%測定值/（ng·mL－1）RSD/%10.0 9.54±0.232.4 9.77±0.414.2 30.0 29.1±0.72.4 29.2±0.62.1 375375±30.80 368±113.0 20002110±733.52050±763.7 37503720±350.90 3620±1103.0

3.2 血藥濃度-時間曲線及藥動學參數

空腹組和餐后組受試者口服受試制劑和參比制劑后，氟康唑的平均血藥濃度-時間曲線見圖1，藥動學參數見表4。

表4 空腹和高脂餐受試者口服受試制劑和參比制劑后的主要藥動學參數(mean±SD)
Tab 4 Main pharmacokinetics parameters of fasting and high-fat diet subjects after the oral administration of the test and reference
preparations (mean±SD)

參數空腹組高脂餐組試驗制劑（n ＝24）參比制劑（n ＝24）試驗制劑（n ＝21）參比制劑（n ＝21）Cmax/（ng·mL－1）4287.08±1016.764052.92±723.383275.71±377.083373.33±439.46 AUC0 ～t /（×105 ng·h·mL－1）1.30±0.19 1.33±0.19 1.26±0.17 1.28±0.20 AUC0 ～∞/（×105 ng·h·mL－1）1.38±0.19 1.41±0.21 1.33±0.19 1.35±0.22 tmax/h0.50（0.25，2.5）1.00（0.25，3.00）3.00（1.5，6.00）3.00（1.0，6.0）t1/2/h28.8±3.529.5±4.227.9±4.827.7±3.9

圖1 健康受試者空腹（A）和餐后（B）單次口服150 mg 氟康唑片的平均血藥濃度-時間圖Fig 1 Mean plasma concentration-time diagram of a single oral dose of 150 mg fluconazole tablets in healthy subjects on a fasting stomach（A）and after a meal（B）

3.3 生物等效性分析

在空腹狀態下口服氟康唑受試制劑和參比制劑的

C

、

AUC

及

AUC

的幾何均值的比值分別為104.64%、98.01%和97.64%，90%

CI

分別為97.04%～112.85%、96.57%～99.48%和 96.18%～99.12%，個體內變異分別為15.32%、3.00%和3.04%。在餐后狀態下口服氟康唑受試藥物和參比藥物的

C

、

AUC

及

AUC

的幾何均值的比值分別為97.42%、98.65%和98.88%，90%

CI

分別為94.28% ～100.67%、95.90% ～101.48%和95.69%～102.17%，個體內變異分別為 6.14%、5.30%和6.14%。與參比制劑比較，受試制劑

C

、

AUC

及

AUC

的90%置信區間均落在參比制劑的80.00%～125.00%，說明兩種制劑具有生物等效性。

3.4 安全性評價

本試驗空腹組共有24 例受試者納入安全性評價，服用受試制劑后，有6 例受試者發生7 例次不良事件，分別為丙氨酸氨基轉移酶升高、心悸、惡心、上呼吸道感染、血脂升高、血小板升高、發熱，其中除前3 例不良事件研究者判斷與研究藥物可能無關外，其余均與研究藥物肯定無關。上呼吸道感染這一不良事件嚴重程度為Ⅱ級，其余均為Ⅰ級。因受試者的上呼吸道感染發生在洗脫期，口服感冒清熱軟膠囊后緩解，經研究者分析，此藥物不影響氟康唑的藥動學參數，同意繼續進入第二周期試驗。服用參比制劑后，有3例受試者發生3 例次不良事件，分別為轉氨酶升高、尿上皮細胞升高、上呼吸道感染，其中轉氨酶升高與研究藥物可能有關，其余2 例與研究藥物肯定無關，嚴重程度均為Ⅰ級。

高脂餐后組共有21 例受試者納入安全性評價，服用受試制劑后，有4 例受試者發生4 例次不良事件，分別為尿潛血陽性、智齒冠周炎、針刺傷、發熱，其中除尿潛血陽性與研究藥物可能無關外，其余3 例均與研究藥物肯定無關。服用參比制劑后，有2 例受試者發生2 例次不良事件，1 例不良事件為丙氨酸氨基轉移酶升高，判斷與研究藥物可能有關，另1 例為尿白細胞高，與研究藥物可能無關。受試制劑和參比制劑階段所有不良事件的嚴重程度均為Ⅰ級。

空腹組與餐后組均未發生嚴重不良事件和導致退出試驗的不良事件。以上表明在空腹和餐后狀態下健康受試者單次口服150 mg 氟康唑受試制劑與參比制劑在體內具有相似的安全性和耐受性。

4 討論

氟康唑是目前臨床上常用的抗真菌藥，本研究得出其血漿消除半衰期為30 h 左右，大約120 ～150 h 達到穩態血藥濃度，所以目前臨床上每日給藥一次是科學合理的，但對于肝腎功能不全的患者，藥物的半衰期會明顯延長，血藥濃度升高，易發生蓄積中毒，建議臨床上應根據患者具體情況，通過監測氟康唑的穩態血藥濃度來調整用藥劑量。

氟康唑不良反應主要有頭痛、頭暈、皮疹、腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐、肝腎功能異常、血液學指標改變等，本研究中受試者出現的不良反應有丙氨酸氨基轉移酶升高、心悸、惡心、尿潛血陽性、轉氨酶升高，與說明書中基本一致。臨床用藥后易產生胃腸道反應和中樞系統不良反應，有時導致嚴重的肝損傷或血液系統疾病，故對于該藥可能會出現消化道系統的不良反應的人群應餐后服用，這樣可借助食物的作用避免藥物對消化道的刺激，對于接受氟康唑治療的患者建議定期檢查肝功能。

本研究氟康唑片血藥濃度的測定方法可靠，血漿樣本中的雜質對氟康唑的測定無干擾，受試制劑和參比制劑

C

、

AUC

及

AUC

的幾何均值的比值90% 置信區間均落在參比制劑80.00%～125.00% 內，表明本試驗兩種制劑具有生物等效性。其研究結果的主要藥動學參數與文獻報道的數據基本一致，健康受試者在試驗期間發生的不良事件也基本一致，為患者安全用藥提供了質量保證。