狼毒大戟的化學(xué)成分及細(xì)胞毒活性研究

葛繼蕓，周艷卿，邱彥，王建，周瑾，李盛建，趙亮，曹青青*（.上海東方肝膽外科醫(yī)院藥材科，上海 0048；.上海市寶山區(qū)羅店醫(yī)院藥劑科，上海 0908；.上海市浦東新區(qū)人民醫(yī)院藥劑科，上海 000）

狼毒大戟又名貓眼睛，為大戟科大戟屬植物狼毒大戟（

Euphorbia fischeriana

Steud.）的干燥塊根，為多年生草本植物，主要生長于丘陵坡地以及林緣地帶。在我國主要分布于內(nèi)蒙古、東北及河北等地區(qū)，藥源充足，資源豐富?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》中記載狼毒有泄水逐飲，破積殺蟲的功效，主治水腫腹脹，痰食蟲積，心腹疼痛，結(jié)核，疥癬等，但其味苦、辛，性平，有大毒，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明狼毒大戟具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗結(jié)核、免疫調(diào)節(jié)等作用，但由于大毒制約了其臨床應(yīng)用和新藥開發(fā)。

近年來，國內(nèi)外諸多學(xué)者對狼毒大戟做了大量研究，狼毒大戟的臨床應(yīng)用也逐漸被人們重視。狼毒大戟主要以根入藥，故諸多研究主要基于狼毒大戟總提取物或提取部位探索活性，對于具體活性成分尚不明確。狼毒大戟的化學(xué)成分主要有二萜類、倍半萜類、苯乙酮類及黃酮類等，而對于單體化合物的活性成分研究報(bào)道不夠深入。為了擴(kuò)大與利用狼毒大戟的臨床應(yīng)用與新藥開發(fā)，其單體化合物的研究顯得尤為重要。因此，本文采用色譜分離制備技術(shù)，對狼毒大戟的化學(xué)成分進(jìn)行提取、分離、鑒別，同時(shí)采用MTT 法研究其單體化合物對肝癌細(xì)胞與乳腺癌細(xì)胞的毒性作用，旨在進(jìn)一步探索狼毒大戟單體化合物的藥理作用，為臨床安全有效的應(yīng)用和藥材的進(jìn)一步開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

Agilent1260 高效液相色譜儀、Agilent 6220飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（美國安捷倫科技有限公司）；Bruker AVANCE Ⅲ 600 高分辨核磁共振波譜儀（德國布魯克科技有限公司）；SMART-N 超純水機(jī)（香港力康生物醫(yī)療科技控股有限公司）；RE-52 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海申生科技有限公司）；CO培養(yǎng)箱（美國Thermo）；TS-100 搖床（海門其林貝爾）；Multiskan MK3 酶標(biāo)儀（美國Thermo）；XDS-200倒置顯微鏡（上海蔡康光學(xué)）；全自動(dòng)手持式細(xì)胞計(jì)數(shù)器Scepter 2.0（美國Millipore）；18 XW-80A型旋渦混合器（海門其林貝爾）；SB3200-T 超聲發(fā)生器（上海科導(dǎo)，50 kHz，120 W）；AE240 型十萬分之一電子天平（瑞士梅特勒）。

1.2 試藥

所用試劑均為分析純（江蘇強(qiáng)盛功能化學(xué)股份有限公司），水為自制超純水。玻璃色譜柱（江蘇南通三晶玻璃儀器有限公司）；反相C硅膠（日本大曹株式會社）；柱色譜用硅膠、硅膠GF254 薄層板（山東煙臺江友化工有限公司）。

乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231、Sum149、MCF-7、ZR-75-1、SKBr3、BT474、肝癌細(xì)胞株HepG2（南京科佰生物科技有限公司）；紫杉醇（北京譜析，純度：98%）；澳洲胎牛血清、DMEM 培養(yǎng)基、PBS 溶液、0.5%胰蛋白酶（美國Gibco 公司）。

中藥狼毒大戟飲片購自安徽（產(chǎn)地西藏）；經(jīng)海軍軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室的韓婷副教授鑒定為大戟科大戟屬植物狼毒大戟

Euphorbia fischeriana

Steud.的干燥根。標(biāo)本存放于上海詩丹德生物技術(shù)公司留樣庫。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取和分離

取狼毒大戟藥材30 kg 粉碎后，用80%的乙醇于65℃下回流提取兩次，合并兩次提取液減壓回收至無乙醇?xì)埩?，得粗提?6 L。取粗提液2 L，加水使其混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3 次，每次加入萃取溶劑2 L。合并各萃取層溶液，減壓回收溶劑，得石油醚浸膏80 g，乙酸乙酯浸膏90 g，正丁醇浸膏300 g。

取乙酸乙酯浸膏采用正相硅膠柱色譜分離，采用石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)從50∶1 逐漸過渡到1∶1 梯度洗脫，收集其中薄層點(diǎn)相似的流分，得到流分Fr1 ～Fr6；從Fr2 通過反相C硅膠柱（丙酮∶乙酸乙酯∶甲醇梯度洗脫）分離得到化合物3（20 mg），7（33 mg），8（78 mg）；采用反相C硅膠柱從Fr3（氯仿-甲醇梯度洗脫）分離得到化合物1（21 mg），2（30 mg），4（38 mg）；從Fr4應(yīng)用反相C硅膠柱（氯仿-甲醇梯度洗脫）分離得到化合物6（34 mg）；從Fr5 應(yīng)用反相C硅膠柱（氯仿-甲醇梯度洗脫）分離得到化合物5（28 mg）；從Fr6 也通過反相C硅膠柱（氯仿-甲醇梯度洗脫）分離得到化合物9（26 mg）。

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定

對狼毒大戟中分離得到的9 個(gè)化合物進(jìn)行MS、H-NMR 譜與C-NMR 譜的波譜數(shù)據(jù)采集，解析波譜數(shù)據(jù)并與參考文獻(xiàn)對比，推測化合物的結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 9 個(gè)單體化合物的結(jié)構(gòu)式Fig 1 Structures of 9 compounds

化合物1：白色針晶，CHO，ESI-MS 的質(zhì)核比（

m/z

）為331.19 [M ＋H]。H-NMR（600 MHz，CDCl）

δ

：4.03（1H，s，11-H），3.67（1H，s，14-H），2.28（1H，s，9-H），2.08（3H，s，17-CH），0.93（3H，s，20-CH），0.85（3H，s，19-CH），0.82（3H，s，18-CH）；C-NMR（150 MHz，CDCl）

δ

：169.6（C-16），148.6（C-13），130.3（C-15），85.2（C-12），66.1（C-8），60.9（C-11），55.4（C-14），53.5（C-5），48.0（C-9），41.3（C-1），39.2（C-10），39.2（C-3），35.6（C-7），33.5（C-4），33.5（C-18），21.9（C-19），20.8（C-6），18.4（C-2），15.4（C-20），8.7（C-17）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致，推測化合物為巖大戟內(nèi)酯B?；衔?：黃色針晶，CHO，ESI-MS 的質(zhì)核比（

m/z

）為391.10 [M ＋H]。H-NMR（600 MHz，CDCl）

δ

：13.19（1H，s，4-OH），9.15（1H，s，6-OH），8.82（1H，s，6'-OH），6.02（1H，s，5-H），3.95（3H，s，2-OCH），3.84（3H，s，4'-OCH），3.74（2H，s，CH），2.66（3H，s，3'-COCH），2.63（3H，s，3-COCH），2.06（3H，s，5'-CH3）；C-NMR（150 MHz，CDCl）

δ

：203.8，32.5（3-COCH），202.3，30.5（3'-COCH），163.0（C-6），162.7（C-4'），162.6（C-4），162.5（C-2'），160.6（C-6'），155.8（C-2），110.8（C-1'），110.7（C-5'），107.6（C-3'），105.2（C-1），105.2（C-3），92.4（C-5），64.7（4'-OCH），55.7（2-OCH），16.2（CH），8.7（5-CH）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致，推測化合物為ebracteolatain A?；衔?：淺黃色針晶，CHO，ESI-MS的質(zhì)核比（

m/z

）為377.08 [M ＋H]。H-NMR（600 MHz，CDCl）

δ

：12.81（1H，s，4-OH），9.11（1H，s，6-OH），8.67（1H，s，6'-OH），6.32（1H，s，5'-OH），6.02（1H，s，5-OH），3.97（3H，s，2-OCH），3.84（3H，s，4'-OCH），3.71（2H，s，CH），2.61（3H，s，3-OCH），2.67（3H，s，3'-OCH）；C-NMR（150 MHz，CDCl）

δ

：205.3，33.9（3-COCH），203.5，31.8（3'-COCH），166.1（C-2'），164.6（C-6），164.3（C-4），164.1（C-6'），163.9（C-4'），159.7（C-2），109.8（C-1'），106.6（C-3），104.0（C-1），104.0（C-3'），93.8（C-5'），93.8（C-5），66.1（2-COCH），57.1（4'-COCH），17.4（CH），該化合物5 號位上無甲基取代，其他位置的化學(xué)位移與ebracteolatain A 基本一致。HMBC 譜圖顯示，H-2 OCH（

δ

3.91）與C-2（

δ

159.7）相關(guān)，H-4'（

δ

3.84）與C-4（

δ

163.9）相關(guān)，H-5（

δ

6.02）與C-6（

δ

164.6）相關(guān)，H-5'（

δ

6.32）與C-6'（

δ

164.1）相關(guān)，H-6' OH（

δ

8.67）與C-5'（

δ

95.8）相關(guān)，進(jìn)一步確認(rèn)該化合物與ebracteolatain A 結(jié)構(gòu)相似。推測該化合物為3，3'-二乙酰基-2，4'-二甲氧基-2'，4，6，6'-四羥基-二苯基甲烷。通過SciFinder 檢索未發(fā)現(xiàn)與該化合物結(jié)構(gòu)一致的文獻(xiàn)報(bào)道，故確認(rèn)該化合物為新發(fā)現(xiàn)的化合物，且在狼毒大戟中首次報(bào)道?；衔?：無色細(xì)針晶，CHO，ESIMS 的質(zhì)核比（

m/z

）為409.38 [M-COOCH]。H-NMR（600 MHz，CDCl）

δ

：5.18（1H，t，

J

＝3.6 Hz，H-12），4.45（1H，dd，

J

＝7.8 Hz，H-3），2.03（3H，s，CHCO），1.13（3H，s，CH-27），0.97（6H，s，CH-25，26），0.96（6H，s，CH-29，30），0.87（6H，s，CH-23，24），0.81（3H，s，CH-28）；C-NMR（150 MHz，CDCl）

δ

：171.2（C-32），145.5（C-13），121.9（C-12），81.2（C-3），55.5（C-5），47.8（C-9），47.5（C-18），47.0（C-19），41.9（C-14），40.1（C-8），38.5（C-21），37.9（C-1），37.4（C-4），37.1（C-22），34.9（C-10），33.6（C-21），32.8（C-7），32.7（C-17），31.3（C-20），28.6（C-23），28.3（C-15），27.2（C-28），26.4（C-16），26.2（C-27），23.9（C-30），23.8（C-2），23.8（C-11），21.5（C-31），18.5（C-6），17.0（C-26），16.9（C-24），15.8（C-25）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致，推測化合物為

β

-香樹酯醇乙酸酯?；衔?：無色針晶，CHO，ESI-MS 的質(zhì)核比（

m/z

）為197.07 [M ＋H]。H-NMR（600 MHz，DMSO）

δ

：14.22（1H，s，2-OH），10.53（1H，s，4-OH），6.07（1H，s，H-5），3.78（3H，s，6-OCH），2.53（3H，s，1-COCH），1.88（3H，s，3-CH）；C-NMR（150 MHz，DMSO）

δ

：204.1，34.6（1-COCH），165.9（C-4），164.6（C-6），162.7（C-2），106.1（C-3），104.5（C-1），92.3（C-5），57.4（6-OCH），9.2（3-CH）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致，推測化合物為狼毒乙素?；衔?：無色針晶，H-NMR（600 MHz，CDCl）

δ

：5.35（1H，dd，

J

＝3.0，2.4 Hz，H-5），3.52（1H，tt，

J

＝10.8，4.2 Hz，H-3），1.00（3H，s，H-19），0.92（3H，d，

J

＝6.6 Hz，H-21），0.84（3H，t，

J

＝7.8 Hz，H-29），0.83（3H，d，

J

＝6.0 Hz，H-26），0.81（3H，d，

J

＝6.6 Hz，H-27），0.68（3H，s，H-18）；C-NMR（150 MHz，CDCl）

δ

：140.8（C-5），121.7（C-6），71.8（C-3），56.8（C-14），56.1（C-17），45.9（C-24），42.3（C-4，13），39.8（C-12），37.3（C-1），36.5（C-10），36.2（C-20），33.7（C-22），31.9（C-7，8），31.7（C-2），29.2（C-25），28.3（C-23），26.1（C-16），24.3（C-15），23.1（C-28），21.1（C-11），19.8（C-26），19.4（C-19），19.1（C-27），18.8（C-21），12.0（C-29），11.9（C-18）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致，推測化合物為

β

-谷甾醇。化合物7：黃色油狀，CHO，ESI-MS 的質(zhì)核比（

m/z

）為285.20 [M-H]。H-NMR（600 MHz）

δ

：6.71（1H，s，H-1），5.87（dd，

J

＝10.8，17.4 Hz，H-15），4.89（1H，dd，

J

＝1.2，10.8 Hz，H-16），4.98（1H，dd，

J

＝1.2，17.4 Hz，H-16），2.69 ～2.59（2H，m，H-6），2.11（3H，s，H-19），1.98 ～1.95（2H，m，H-11），1.77 ～1.72（1H，s，H-8），1.67 ～1.54（2H，s，H-7），1.46 ～1.42（1H，m，H-14），1.21 ～1.18（1H，m，H-14），1.02（3H，s，H-17），1.00（3H，s，H-20）；C-NMR（150 MHZ，CDCl）

δ

：151.3（C-15），140.9（C-2），140.6（C-10），140.0（C-3），127.3（C-5），122.7（C-4），109.0（C-16），109.0（C-1），39.8（C-14），36.6（C-9），36.5（C-8），36.5（C-13），34.3（C-11），33.1（C-12），27.0（C-6），25.8（C-7），22.9（C-17），21.5（C-20），11.5（C-19）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致，推測化合物為euphebracteolatins A。化合物euphebracteolatins A 主要存在于月腺大戟中，首次在狼毒大戟中發(fā)現(xiàn)。化合物8：無色針晶，CHO，ESI-MS 的質(zhì)核比（

m/z

）為289.21 [M-H]。H-NMR（600 MHz，CDCl）

δ

：5.89（1H，d，

J

＝1.2 Hz，H-3），5.80（1H，dd，

J

＝5.4，10.8 Hz，H-15），4.95（1H，d，

J

＝1.2 Hz，H-5），4.92（1H，dd，

J

＝1.2，3.6 Hz，H-16），4.90（1H，dd，

J

＝0.6，10.8 Hz，H-16），1.21（3H，s，H-18），1.20（3H，s，H-20），1.02（3H，s，H-17），0.69（3H，s，H-19）；C-NMR（150 MHz，CDCl）

δ

：183.9（C-2），173.3（C-4），150.0（C-15），117.3（C-3），109.5（C-16），89.9（C-5），43.3（C-7），41.0（C-14），39.6（C-10），39.4（C-8），39.4（C-9），39.1（C-6），36.0（C-13），31.7（C-12），30.0（C-20），28.5（C-11），22.6（C-17），18.9（C-19），18.8（C-18）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致，推測化合物為fischeria A?；衔?：白色針晶，CHO，ESI-MS 的質(zhì)核比（

m/z

）為315.19 [M-H]。HNMR（600 MHz，CDCl）

δ

：5.47（1H，d，

J

＝5.4 Hz，H-11），3.71（1H，s，H-14），2.64（1H，d，

J

＝5.4 Hz，H-9），2.06（3H，s，H-17），0.95（3H，s，H-18），0.86（3H，s，H-19），0.73（3H，s，H-20）；CNMR（150 MHz，CDCl）

δ

：170.6（C-16），147.5（C-12），145.1（C-13），125.2（C-15），104.1（C-11），61.2（C-8），54.5（C-14），53.6（C-5），51.9（C-9），41.6（C-1），41.5（C-10），39.2（C-3），34.2（C-7），33.6（C-4），33.5（C-18），21.9（C-19），20.9（C-6），18.5（C-2），15.0（C-20），8.7（C-17）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致，推測化合物為巖大戟內(nèi)酯A。

2.3 細(xì)胞毒活性實(shí)驗(yàn)

采用MTT 法對狼毒大戟中提取得到的9 個(gè)單體化合物進(jìn)行細(xì)胞毒活性評價(jià)，選取6 種類型乳腺癌細(xì)胞株（Her 2 陽性型SKBr 3 及BT 474、LuminalA 型MCF-7、LuminalB 型ZR-75-1、三陰性乳腺癌MDA-MB-231 及Sum149）及1 種肝癌細(xì)胞株HepG2。以紫杉醇為陽性對照藥。將上述7 種腫瘤細(xì)胞密度調(diào)整為5×10個(gè)·mL，接種到96 孔培養(yǎng)板中，每孔接種100 μL 細(xì)胞懸液，置于37 ℃、5%CO培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜，觀察細(xì)胞貼壁且生長良好后，設(shè)置陽性對照組，空白對照組和各個(gè)不同濃度藥物的實(shí)驗(yàn)組。配制1 ～9 化合物的母液濃度為5 mmol·L，紫杉醇母液濃度為3.5 mmol·L，將各化合物和紫杉醇母液稀釋得到8 個(gè)梯度濃度的樣品溶液（20、15、12.5、10、7.5、5、2、1 mol·L，分別作用于7 種腫瘤細(xì)胞，空白對照組中加等量培養(yǎng)基，每個(gè)劑量樣本設(shè)置6 個(gè)平行孔。分別置于37 ℃、5%CO培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，之后每孔加入MTT液（5 g·L）20 μL。繼續(xù)培養(yǎng)4 h，吸棄上清液，每孔加入100 μL DMSO，避光，低速震蕩15 min，使結(jié)晶充分溶解。用酶標(biāo)儀（波長492 nm）測定吸光度（

OD

）值，計(jì)算不同濃度的化合物對乳腺癌細(xì)胞的抑制率。細(xì)胞抑制率（%）＝[1－（加藥組

OD

值－調(diào)零孔

OD

值）/（對照組

OD

值－調(diào)零孔

OD

值）]×100%。由此計(jì)算陽性藥紫杉醇及化合物1 ～9 對不同腫瘤細(xì)胞的抑制率，并確定72 h 半數(shù)抑制濃度，結(jié)果如表1、2，圖2所示。

表1 9 個(gè)化合物對HepG2 和MCF-7 細(xì)胞生長的影響
Tab 1 Effect of 9 compounds on the growth of HepG2 and MCF-7 cells

注：“－”表示給藥濃度＞100 μmol·L。
Note：“－” indicates that the administration concentration is more than 100 μmol·L.

化合物IC50/（μmol·L－1）HepG2MCF-7 1－－2 61.83±0.1165.73±0.74 3 54.55±0.07616.71±0.121 4－－5－－6－－25.55±0.02919.62±0.117 8－－7 9－－紫杉醇＜1＜1

圖2 不同濃度的化合物2 和化合物3 對乳腺癌細(xì)胞株的抑制率Fig 2 Inhibition rate of compound 2 and compound 3 with different concentrations on the breast cancer cells

3 討論

為了進(jìn)一步探索狼毒大戟的化學(xué)成分和藥理活性，本研究以中藥材狼毒大戟飲片作為研究對象，應(yīng)用多種色譜技術(shù)，從其乙醇總提物的乙酸乙酯萃取部位分離得到9 個(gè)單體化合物。通過化合物的理化性質(zhì)、質(zhì)譜及核磁數(shù)據(jù)，結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道，分析鑒定了各單體化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。單體化合物涉及的結(jié)構(gòu)類型有二萜類、三萜類、苯乙酮類、甾醇類，本研究已在SciFinder 中檢索，確認(rèn)化合物3 是新發(fā)現(xiàn)的化合物，化合物7 為首次從狼毒大戟中分離得到。

諸多學(xué)者對狼毒大戟的抗腫瘤活性進(jìn)行了研究，結(jié)果表明其提取物及單體化合物對肝癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞等具有顯著的抑制作用。本研究主要探索其狼毒大戟單體化合物對肝癌細(xì)胞和乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒活性。結(jié)果表明9 個(gè)單體化合物對肝癌細(xì)胞株HepG2 均無顯著細(xì)胞毒活性?；衔? 對乳腺癌細(xì)胞株的細(xì)胞毒活性作用均顯著，對乳腺癌細(xì)胞株BT474 的細(xì)胞毒活性效果最強(qiáng)，且其抑制效果呈濃度依賴性?；衔? 對乳腺癌細(xì)胞株Sum149、ZR-75-1 細(xì)胞毒活性明顯，對乳腺癌細(xì)胞株Sum149 的細(xì)胞毒活性較乳腺癌細(xì)胞株ZR-75-1 強(qiáng)?；衔? 對乳腺癌MCF-7 細(xì)胞有一定抑制作用。其他化合物對乳腺癌細(xì)胞株未表現(xiàn)出顯著抑制活性。

化合物3 的抗乳腺癌細(xì)胞毒活性與化合物2相比發(fā)生明顯變化，其對乳腺癌細(xì)胞株ZR-75-1細(xì)胞毒活性較化合物2 弱，而對Sum149 細(xì)胞的細(xì)胞毒活性較化合物2 強(qiáng)，且對其他乳腺癌細(xì)胞株均無明顯的細(xì)胞毒活性?；衔? 結(jié)構(gòu)較化合物2 在5'位上少了一個(gè)甲基，從化合物構(gòu)效關(guān)系上來看，化合物2 結(jié)構(gòu)中5'位上甲基對化合物的活性具有顯著影響。明確化合物的構(gòu)效關(guān)系有利于進(jìn)一步探索化合物對腫瘤細(xì)胞毒性的作用機(jī)制。

綜上，盡管相關(guān)學(xué)者對狼毒大戟進(jìn)行了大量研究，但針對其化學(xué)成分及活性的研究仍然是目前開發(fā)應(yīng)用的熱點(diǎn)。本研究進(jìn)一步分析狼毒大戟的化學(xué)成分，篩選其單體化合物對肝癌細(xì)胞和乳腺癌細(xì)胞株的細(xì)胞毒活性，并初步探討其活性化合物的構(gòu)效關(guān)系，為深入開發(fā)狼毒大戟的中藥資源和臨床應(yīng)用提供參考。

表2 3 個(gè)化合物對乳腺癌細(xì)胞生長的影響
Tab 2 Effect of 3 compounds on the growth of the breast cancer cells

注：“20（30%）”表示給藥濃度20 μmol·L 時(shí)抑制率為30%。
Note：“20（30%）” indicates that the inhibition rate is 30% when the administration concentration is 20 μmol·L.

化合物IC50/（μmol·L－1）MDA-MB-231Sum149MCF-7ZR-75-1SKBr3BT474 2 5.41±0.265.47±0.17 5.73±0.74 3.49±0.5410.10±1.662.63±0.59 3 12.55±0.395.23±0.4416.71±0.1210.13±1.8013.69±2.67＞20（40%）5＞20（30%）＞20（30%）＞20（30%）＞20（30%）＞20（30%）＞20（30%）紫杉醇1.72±0.092＜1＜11.89±0.110＜1＜1