血清CD44V6、MMP-2及TgAb水平與分化型甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的相關(guān)性分析

于永歌

甲狀腺癌是臨床上常見的一種惡性腫瘤，近年來(lái)發(fā)病率明顯上升。根據(jù)甲狀腺癌的分化情況分為分化型甲狀腺癌和未分化型甲狀腺癌，其中分化型甲狀腺癌占甲狀腺癌的90%以上，對(duì)患者的健康與生活質(zhì)量產(chǎn)生較大影響[1]。當(dāng)前臨床多應(yīng)用手術(shù)治療甲狀腺癌，手術(shù)分為甲狀腺全切術(shù)和甲狀腺次切術(shù)，根據(jù)患者的病情選擇合適的手術(shù)方法，術(shù)后通過(guò)常規(guī)131I 治療來(lái)提高患者生存率。雖然分化型甲狀腺癌患者預(yù)后總體效果良好，但仍有1.2%～4.2%的患者出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，降低了患者的遠(yuǎn)期生存率[2]。因此，對(duì)分化型甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移情況進(jìn)行早期診斷，對(duì)于改善預(yù)后具有重要意義。臨床上，對(duì)分化型甲狀腺癌術(shù)后患者多采用甲狀腺球蛋白（Tg）、促甲狀腺激素（TSH）等甲狀腺激素水平來(lái)評(píng)估患者的治療效果[3]。研究發(fā)現(xiàn)[4]，基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）在甲狀腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，且轉(zhuǎn)移組織高于未轉(zhuǎn)移組織。但是對(duì)于血清MMP-2 水平是否能夠預(yù)測(cè)甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移情況目前尚無(wú)定論。另外有研究發(fā)現(xiàn)[5]，分化型甲狀腺癌通過(guò)治療后可改善血清白細(xì)胞分化抗原44 變異型6（CD44V6）、抗甲狀腺球蛋白抗體（TgAb）表達(dá)水平，但血清CD44V6、TgAb 表達(dá)是否與術(shù)后轉(zhuǎn)移情況相關(guān)尚未明確。因此，為了早期預(yù)測(cè)與判斷分化型甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移情況，本研究選取我院2019年3月～2021年3月收治的60 例分化型甲狀腺癌患者為研究對(duì)象，探討血清CD44V6、MMP-2 及TgAb 水平與分化型甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 一般資料選取我院2019年3月～2021年3月收治的60 例分化型甲狀腺癌患者為研究對(duì)象，所有患者均行手術(shù)治療與131I 治療，將治療1年后出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的患者作為轉(zhuǎn)移組（n=19），未出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的患者作為未轉(zhuǎn)移組（n=41）。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者經(jīng)病理確診為分化型甲狀腺癌[6]；對(duì)本研究知情并簽署同意書；臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：病情不穩(wěn)定者；合并精神障礙疾病者；不符合手術(shù)治療指征者；合并嚴(yán)重原發(fā)性疾病者。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。兩組患者一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 兩組患者一般資料比較

1.2 方法CD44V6 檢測(cè)：抽取患者空腹靜脈血2ml，離心后取上清液，置于-20℃冰箱內(nèi)待檢。檢測(cè)前將樣品取出，徹底融化（達(dá)到室溫20℃～25℃）后開始檢測(cè)。首先將樣品稀釋100 倍，應(yīng)用濃縮洗滌液和雙蒸水稀釋至500ml，并加入5μl 標(biāo)準(zhǔn)品和5μl已稀釋血清，均勻混合10s 后，加入200μl Anti-CD44V6 Biotin，混合30s 后，37℃下放置30min，隨后反復(fù)對(duì)反應(yīng)板進(jìn)行洗滌，5 次之后去除水滴，加入200μl HRP，均勻混合培育30min，洗滌后加入顯色液再次溫育30min，在每個(gè)孔處加入100μl 終止液，15min 內(nèi)讀取OD 值，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算CD44V6濃度。

MMP-2 檢測(cè)：抽取患者術(shù)后15d 清晨空腹肘靜脈 血2ml，以2 000r/s 的速度離心15min，收集上清液放置-80℃的冰箱內(nèi)待檢。應(yīng)用雙夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清中MMP-2 表達(dá)水平：將抗人MMP-2 單抗包放置在酶標(biāo)板上，加入生物素化抗人MMP-2（二抗），其可結(jié)合單抗MMP-2 形成免疫復(fù)合物。應(yīng)用過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin 將二抗的生物素結(jié)合，并將多余物質(zhì)洗掉。隨后加入TMB 顯色，進(jìn)行反應(yīng)，每孔加入終止液，檢測(cè)吸光度，并計(jì)算OD 值。本試驗(yàn)所用酶聯(lián)免疫試劑盒均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司，所有步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行。

甲狀腺激素水平與抗體檢測(cè)：抽取患者術(shù)后15d 清晨空腹肘靜脈血液5ml，離心后，留取上清液，Tg、TgAb、TSH、游離三碘甲狀腺原氨酸（FT3）、游離四碘甲狀腺原氨酸（FT4）應(yīng)用Roche Cobas 6000 電化學(xué)發(fā)光儀與配套試劑，應(yīng)用電化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行測(cè)定，操作步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 23.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；采用Spearman 相關(guān)分析方法分析血清CD44V6、MMP-2 及TgAb 水平與分化型甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的相關(guān)性；采用Logistic 回歸分析分析上述指標(biāo)對(duì)患者預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)價(jià)值；P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者相關(guān)血清指標(biāo)表達(dá)水平比較兩組患者TSH、FT3、FT4 水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；轉(zhuǎn)移組患者血清CD44V6、MMP-2、Tg、TgAb 水平明顯高于未轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組患者相關(guān)血清指標(biāo)表達(dá)水平比較（±s）

表2 兩組患者相關(guān)血清指標(biāo)表達(dá)水平比較（±s）

指標(biāo) 轉(zhuǎn)移組（n=19） 未轉(zhuǎn)移組（n=41） t P CD44V6（ng/ml） 525.62±84.62 428.63±78.92 13.505 0.001 MMP-2（ng/ml） 286.61±85.92 139.68±54.73 11.291 0.001 Tg（ng/ml） 45.25±12.63 13.92±4.27 20.237 0.001 TgAb（IU/ml） 692.52±147.25 613.63±136.29 2.856 0.005 TSH（mIU/L） 76.68±31.57 77.63±32.68 0.149 0.882 FT3（mIU/L） 2.04±1.02 2.06±1.11 0.093 0.926 FT4（mIU/L） 5.36±2.62 5.12±2.65 0.460 0.646

2.2 血清CD44V6、MMP-2 及TgAb 與分化型甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的相關(guān)性分析Spearman 相關(guān)分析結(jié)果顯示：TSH、FT3、FT4、Tg 與分化型甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移情況無(wú)明顯相關(guān)性（P＞0.05），CD44V6、MMP-2、TgAb 與分化型甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移情況呈正相關(guān)（P＜0.05），見表3。

表3 CD44V6、TgAb、MMP-2 與分化型甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的相關(guān)性分析

2.3 血清CD44V6、MMP-2 及TgAb 對(duì)分化型甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的診斷與預(yù)測(cè)價(jià)值應(yīng)用ROC 曲線分析顯示：CD44V6、MMP-2 及TgAb 聯(lián)合診斷的敏感度與特異性明顯高于CD44V6、MMP-2 或TgAb單一診斷（P＜0.05），見表4、圖1。Logistic 回歸分析結(jié)果表明：CD44V6、MMP-2 及TgAb 對(duì)分化型甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移具有獨(dú)立預(yù)測(cè)價(jià)值（P＜0.05），見表5。

表4 血清CD44V6、MMP-2 及TgAb 對(duì)分化型甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值(%)

表5 血清CD44V6、MMP-2 及TgAb 對(duì)分化型甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討論

CD44 屬于分布較為廣泛的一組細(xì)胞表面跨膜糖蛋白，是細(xì)胞黏附分子的一種，CD44V6 屬于細(xì)胞黏附分子CD44 變異型。隨著臨床分子學(xué)研究進(jìn)展，有研究發(fā)現(xiàn)[7]，CD44 分子變異型會(huì)在腫瘤細(xì)胞表面異常表達(dá)，和腫瘤的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)，并在腫瘤的轉(zhuǎn)移和侵襲中發(fā)揮重要作用。MMPs 是一組具有跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)和分泌功能的肽鏈內(nèi)切酶，主要分為膜型基質(zhì)金屬蛋白酶、間質(zhì)溶素酶、明膠酶、膠原酶等。MMPs 除了在人體正常生理過(guò)程中發(fā)揮作用外，還會(huì)參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展，通過(guò)促進(jìn)血管新生、激活細(xì)胞生長(zhǎng)因子以及降解細(xì)胞外基質(zhì)等作用于腫瘤組織。以往研究發(fā)現(xiàn)[8]，MMPs 與多種惡性腫瘤具有密切關(guān)系。另外有研究通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)[9]，MMP-2 可輔助診斷甲狀腺癌患者術(shù)前淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，而對(duì)于術(shù)后轉(zhuǎn)移情況的預(yù)測(cè)并無(wú)確切結(jié)論。TgAb 是TSH 的受抗體，共包括3 種形式，分別是抑制性抗體、中性抗體以及刺激性抗體。研究發(fā)現(xiàn)[10]，TgAb 對(duì)于甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移具有獨(dú)立預(yù)測(cè)價(jià)值。因此，本研究分析血清CD44V6、MMP-2 及TgAb 水平與分化型甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，希望能夠?yàn)榕R床提供參考。

本研究結(jié)果表明，兩組患者TSH、FT3、FT4 水平對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），轉(zhuǎn)移組患者血清CD44V6、MMP-2、Tg、TgAb 水平明顯高于未轉(zhuǎn)移組（P＜0.05）。這是因?yàn)镸MP-2 是MMP 家族成員，細(xì)胞外基質(zhì)降解酶，通過(guò)對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)中不同成分的降解，在腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。MMPs 家族成員可降解癌細(xì)胞周圍細(xì)胞，導(dǎo)致癌細(xì)胞進(jìn)出周圍組織，促使腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移，形成新生血管后，成為腫瘤轉(zhuǎn)移的血行通道。有研究發(fā)現(xiàn)[11]，惡性腫瘤轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)過(guò)程中，細(xì)胞外基底膜和基質(zhì)降解是必要條件，明膠酶作為基質(zhì)金屬蛋白酶中的一種，主要作用就是分解Ⅳ型膠原，降解基底膜促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)，因此MMP-2 屬于腫瘤惡性進(jìn)展標(biāo)志物的一種，與本研究結(jié)果相符。CD44V6 作為重要腫瘤分子標(biāo)記物的一種，參與細(xì)胞基質(zhì)黏附、靶向及腫瘤生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移以及淋巴細(xì)胞激活，因此CD44V6 水平越高可能增加分化型甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移現(xiàn)象。另外，TgAb 屬于自身免疫性甲狀腺疾病的重要標(biāo)志物和主要抗體，也是甲狀腺癌診療的常見血清標(biāo)志物，因此，分化型甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移患者會(huì)出現(xiàn)TgAb 水平升高。研究發(fā)現(xiàn)[12]，25%以上的分化型甲狀腺癌患者會(huì)出現(xiàn)TgAb 升高現(xiàn)象，若持續(xù)或重新出現(xiàn)TgAb 升高，提示患者出現(xiàn)疾病復(fù)發(fā)情況。Spearman 相關(guān)分析結(jié)果顯示：TSH、FT3、FT4、Tg 與分化型甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移無(wú)明顯相關(guān)性（P＞0.05），CD44V6、MMP-2、TgAb 與分化型甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（P＜0.05）。MMP-2 是癌細(xì)胞降解并突破基底膜，向外周浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要因素，而CD44V6 屬于腫瘤標(biāo)志物，TgAb 是甲狀腺疾病的重要標(biāo)志物。有研究發(fā)現(xiàn)[13]，檢測(cè)甲狀腺癌患者癌組織中CD44V6、MMP-2、TgAb 水平明顯升高，三者可判斷癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)潛能，與本研究結(jié)果相符。應(yīng)用ROC 曲線分析顯示：CD44V6、MMP-2 及TgAb 聯(lián)合診斷的敏感度與特異性明顯高于CD44V6、MMP-2 或TgAb 單一診斷（P＜0.05）。Logistic 回歸分析結(jié)果表明：CD44V6、MMP-2 及TgAb 對(duì)分化型甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移具有獨(dú)立預(yù)測(cè)價(jià)值（P＜0.05）。以往的研究[14，15]多分析了CD44V6、MMP-2 及TgAb 與甲狀腺癌病理情況的相關(guān)性，并無(wú)針對(duì)三者聯(lián)合診斷甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的敏感度與特異性以及對(duì)預(yù)后預(yù)測(cè)的分析，而本研究加入了這些觀察。

綜上所述，分化型甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移患者血清CD44V6、MMP-2 及TgAb 水平明顯升高，與術(shù)后轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，應(yīng)用血清CD44V6、MMP-2 及TgAb 聯(lián)合診斷敏感度和特異性高于單一診斷，且血清CD44V6、MMP-2 及TgAb 為分化型甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素。因此可以考慮應(yīng)用術(shù)前血清CD44V6、MMP-2 及TgAb 水平作為分化型甲狀腺癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)和輔助診斷指標(biāo)。