單純皰疹病毒型腦炎患者血清AchE、sOX40L水平與認知功能的相關(guān)性*

王 莎，賀 龍，李素婷，王東紅，王 靜

1.邯鄲市第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)二科，河北邯鄲 056002；2.邯鄲市中心醫(yī)院神經(jīng)外三科，河北邯鄲 056002； 3.邯鄲市中心醫(yī)院輸血科，河北邯鄲 056002；4.邯鄲市第一醫(yī)院CT室，河北邯鄲 056002

單純皰疹病毒型腦炎(HSE)是單純皰疹病毒(HSV)感染所誘發(fā)的一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病，此疾病進展快、病情危重、病死率高，且多數(shù)存活患者存在不同程度認知功能障礙[1]。頭顱CT、MRI技術(shù)是臨床診斷HSE的主要影像學技術(shù)，可通過觀察中樞神經(jīng)系統(tǒng)解剖結(jié)構(gòu)變化評估中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷情況，但缺點是影像學表現(xiàn)相對滯后，而如何早期評估病情轉(zhuǎn)歸，指導臨床積極完善治療方案，強化針對性治療是亟待解決的問題之一[2]。乙酰膽堿作為腦重要神經(jīng)遞質(zhì)，是記憶學習的生化基礎(chǔ)，有研究證實，乙酰膽堿酯酶(AchE)可分解突觸間的乙酰膽堿繼而影響個體學習記憶活動，而有認知障礙的患者血清AchE水平升高[3-4]。可溶性O(shè)X40L(sOX40L)是共刺激因子家族主要成員之一，有研究已證實，其在病毒性心肌炎、原發(fā)性膽汁性膽管炎等疾病中水平異常，且異常程度與病情關(guān)系密切，但其與HSV病情轉(zhuǎn)歸的關(guān)系鮮見報道[5-6]。基于上述理論基礎(chǔ)，本研究探討HSE患者血清AchE、sOX40L水平及認知功能變化，旨在為臨床完善相關(guān)預(yù)警機制提供參考，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年3月至2020年12月就診于邯鄲市第一醫(yī)院(下稱本院)的63例HSE患者作為觀察組，另選取同期在本院體檢的63例健康者作為對照組。觀察組納入標準：(1)經(jīng)腦脊液PCR反應(yīng)確診為HSE，且病程<7 d；(2)入組前未經(jīng)相關(guān)治療。對照組納入標準：經(jīng)體檢身體健康，無可能影響本研究結(jié)果的疾病。排除標準：(1)伴其他神經(jīng)系統(tǒng)感染及自身免疫性疾病患者；(2)其他傳染性疾病患者；(3)腦卒中等其他影響認知功能的疾病患者；(4)在治療過程中病死者。本研究經(jīng)本院倫理委員會審批通過，受試者對本研究知情，并簽署知情同意書。兩組性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)等比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組一般資料比較

1.2方法

1.2.1治療方法 觀察組患者均予以阿昔洛韋(石藥集團歐意藥業(yè)有限公司，國藥準字H20046529)抗病毒，酌情使用甘露醇(河北天致藥業(yè)有限公司，國藥準字H13021587)降顱壓，鼠神經(jīng)生長因子(未名生物醫(yī)藥有限公司，國藥準字S20060052)提供營養(yǎng)，苯巴比妥(云南白藥集團大理藥業(yè)有限責任公司，國藥準字H53021324)抗癲癇等對癥治療。

1.2.2檢測方法 觀察組指標檢測均在疾病緩解期進行。生化指標檢測：采用非抗凝真空管采集肘靜脈血4 mL，3 500 r/min離心15 min(離心半徑為8 cm)，采集上層血清，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測sOX40L水平，試劑盒由上海仁捷生物科技有限公司提供；采用比色法檢測AchE水平，試劑盒由武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司提供。酶聯(lián)免疫吸附試驗操作步驟：取血清標本，用蒸餾水將原裝洗滌液30 mL稀釋至1 200 mL備用，各取標準品、血清25 μL于樣品孔，每孔加抵抗素試劑25 μL，混勻30 s，室溫孵育30 min；甩盡板內(nèi)液體，每孔加350 μL洗滌液洗板，去水滴，反復(fù)洗3次；每孔加50 μL辣根過氧化物酶(HRP)，混勻30 s，室溫孵育30 min；甩盡板中液體，每孔加350 μL洗滌液洗板，去水滴，復(fù)洗3次；每孔加顯色液50 μL，混勻10 s，室溫孵育15 min；每孔加終止液50 μL，混勻30 s，30 min內(nèi)在450 nm處讀取吸光度值，參照標準曲線讀取樣品水平。比色法操作步驟：取待測樣品20 μL至樣品孔，加緩沖液(GENMED試劑A)，混勻，室溫靜置1 min，加20 μL 誘導液(GENMED試劑B)，混勻，即刻放進540 nm分光光度儀獲得吸光度值，讀取樣品水平。

1.2.3認知功能評價[7]采用簡易精神狀態(tài)檢查量表(MMSE)評估認知功能，包括注意力及計算力、語言能力、回憶力、記憶力、定向力5個方面，總分范圍0～30分，得分為整數(shù)，以MMSE評分10～20分為認知功能不良組，21～30分為認知功能稍差組。質(zhì)量控制：生化指標檢測由資深檢驗技師嚴格參照試劑盒說明書步驟規(guī)范操作，認知功能評價由經(jīng)培訓合格的專業(yè)問卷調(diào)查人員進行，由患者本人自行完成問卷填寫，有不懂可進行解釋，但不給予任何引導性指導，調(diào)查中采用統(tǒng)一術(shù)語，數(shù)據(jù)統(tǒng)一處理，雙人錄入。

1.3觀察指標 (1)對比兩組血清AchE、sOX40L水平、MMSE評分。(2)對比觀察組不同MMSE評分患者血清AchE、sOX40L水平。(3)分析血清AchE、sOX40L水平與MMSE評分的關(guān)系。(4)分析認知功能損害的影響因素。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清AchE、sOX40L水平及MMSE評分比較 觀察組血清AchE、sOX40L水平均高于對照組，MMSE評分低于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組血清AchE、sOX40L水平及MMSE評分比較

2.2觀察組不同MMSE評分患者血清AchE、sOX40L水平比較 觀察組患者經(jīng)MMSE評分，其中10～20分18例，21～26分26例，27～30分19例。不同MMSE評分患者血清AchE、sOX40L水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；隨MMSE評分降低，血清AchE、sOX40L水平呈升高趨勢。見表3。

表3 觀察組不同MMSE評分患者血清AchE、sOX40L水平比較

2.3分析血清AchE、sOX40L水平與MMSE評分的關(guān)系 Pearson相關(guān)分析顯示，血清AchE、sOX40L水平與MMSE評分呈負相關(guān)(r=-0.675、-0.598，均P<0.001)，見圖1、2。

圖1 血清AchE水平與MMSE評分關(guān)系

圖2 血清sOX40L水平與MMSE評分關(guān)系

2.4認知功能損害的單因素分析 認知功能稍差組及認知功能不良組患者性別、年齡、最高學歷、發(fā)病至入院時間對比，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；認知功能稍差組及認知功能不良組患者間確診時血清白細胞介素6、C反應(yīng)蛋白、AchE、sOX40L水平及癲癇發(fā)作情況對比，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表4。

2.5認知功能損害的多因素分析 將表4有意義項目作為自變量，將MMSE評分作為因變量納入多元線性逐步回歸分析(賦值：MMSE評分、白細胞介素6、C反應(yīng)蛋白、AchE、sOX40L為具體值，“癲癇未發(fā)作”=0，“癲癇發(fā)作”=1)，結(jié)果顯示，校正白細胞介素6、C反應(yīng)蛋白水平后，AchE、sOX40L水平及癲癇發(fā)作仍是認知功能損害的影響因素(P<0.05)。見表5。

表4 認知功能損害的單因素分析

續(xù)表4 認知功能損害的單因素分析

表5 認知功能損害的多因素分析

3 討 論

HSE是中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見感染性疾病，占全部腦炎的5%～20%，病毒性腦炎的20%～68%[8]。盡管隨著阿昔洛韋等抗病毒藥物的廣泛應(yīng)用，HSE患者病死率得到顯著控制，但中樞神經(jīng)組織受病毒侵襲及病理生理效應(yīng)影響出現(xiàn)不同程度損傷可致患者認知功能損害。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HSE患者中出現(xiàn)認知功能損害占比接近71%，與相關(guān)研究近似[9]。因此，臨床急需加強HSE患者預(yù)后相關(guān)影響因素研究，積極完善治療方案，確保患者能最大化獲益。

sOX40L是機體免疫應(yīng)答系統(tǒng)協(xié)同刺激分子家族主要成員之一，其主要參與T細胞活化、增殖、遷移等過程。有研究證實，sOX40L在炎性浸潤部位T細胞中表達明顯升高，而在非炎性部位幾乎無表達[10]。本研究對HSE患者外周血檢測發(fā)現(xiàn)，HSE患者sOX40L水平較健康人明顯升高(P<0.05)。分析原因可能是，sOX40L在啟動T細胞免疫效應(yīng)后發(fā)揮正性調(diào)控作用，以維持并延續(xù)免疫應(yīng)答，在HSV持續(xù)復(fù)制情況下，隨T細胞大量生成及凋亡可釋放sOX40L入血[11]。這提示血清sOX40L水平升高可能與HSE發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。但也有研究對30例病毒性腦炎患兒血清sOX40L水平檢測，并未見其水平明顯升高[12]。本研究結(jié)論與此不符，可能與病例選取范圍及樣本量不同有關(guān)。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，隨MMSE評分降低，血清sOX40L水平呈升高趨勢，這主要因為HSE發(fā)生、發(fā)展除與HSV對機體直接侵襲行為有關(guān)外，炎性細胞因子所誘發(fā)的炎性反應(yīng)亦在其中發(fā)揮重要作用。RODRGUEZ等[13]研究顯示，機體受病毒侵襲后免疫功能異常可激活變態(tài)反應(yīng)；同時病毒感染后，免疫系統(tǒng)對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的免疫性損害程度甚至超過病毒對機體的直接侵犯，而sOX40L過表達可致免疫防御過度，加重HSE患者認知功能損害。

膽堿能系統(tǒng)分布整個中樞神經(jīng)系統(tǒng)，參與神經(jīng)傳遞及氧化應(yīng)激、免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)等多個生理過程。目前臨床已證實，抗膽堿能藥物可通過減輕氧化應(yīng)激及延緩細胞凋亡而降低腦梗死后癡呆的發(fā)生風險[14]。AchE是膽堿能系統(tǒng)重要調(diào)節(jié)物質(zhì)，其主要功能是終止神經(jīng)遞質(zhì)作用于突觸后膜，參與生物體內(nèi)神經(jīng)信號傳遞過程。一項基礎(chǔ)實驗證實，學習記憶障礙小鼠血清中AchE水平明顯升高，隨治療進行，血清AchE水平降低[15]。本研究結(jié)果顯示，觀察組血清AchE水平高于對照組(P<0.05)，且血清AchE水平越高的患者，認知功能損害越嚴重。分析此機制可能是AchE可作為一種特異性神經(jīng)分泌蛋白，調(diào)節(jié)神經(jīng)元增殖及突起長出，而HSE發(fā)病后隨HSV復(fù)制及機體免疫異常激活，中樞神經(jīng)細胞損傷加劇，AchE代償性生成以促進損傷組織修復(fù)，但其主要功能是降解乙酰膽堿，終止神經(jīng)遞質(zhì)傳導過程，當其過度生成時可直接造成膽堿能神經(jīng)末梢所釋放的乙酰膽堿被破壞，血清AchE水平越高，可能提示神經(jīng)功能損傷越嚴重，同時可加劇神經(jīng)傳導障礙，影響認知功能[16]。因此，血清AchE水平或可為臨床早期HSE患者預(yù)后提供參考。但還有研究指出，中樞神經(jīng)系統(tǒng)病毒感染病情轉(zhuǎn)歸是多因素參與的結(jié)果，炎性反應(yīng)、并發(fā)其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病等均與HSE患者預(yù)后發(fā)生認知功能障礙有關(guān)[17]。本研究采用多元線性逐步回歸校正白細胞介素6、C反應(yīng)蛋白水平后發(fā)現(xiàn)，AchE、sOX40L、癲癇發(fā)作與MMSE評分有關(guān)(P<0.05)，說明AchE、sOX40L、癲癇發(fā)作是HSE患者發(fā)生認知功能損害的主要因素。但不難看出癲癇發(fā)作仍無法直觀性評價患者認知情況，且患者認知功能受眾多因素影響，而血清AchE、sOX40L水平變化涉及免疫損害、神經(jīng)傳導等過程，或可滿足對認知功能評估的需求，為臨床完善相關(guān)診療機制提供參考。本研究不足之處在于，樣本量較小，HSE患者血清AchE、sOX40L所測結(jié)果為病情穩(wěn)定期數(shù)據(jù)，而HSE確診時數(shù)據(jù)是否可作為此類患者預(yù)后預(yù)測的指標，仍需后期繼續(xù)探討。

綜上所述，血清AchE、sOX40L水平升高是HSE患者認知功能損害的相關(guān)因素，可能為臨床完善相關(guān)預(yù)警機制提供參考。