淺談化妝品功效熱門成分
—多肽

蛋白質(zhì)是生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者。多個(gè)、多種氨基酸縮合成多肽鏈，單根多肽鏈或多根多肽鏈連接后，繼而空間折疊形成蛋白質(zhì)。多肽是蛋白質(zhì)的片段，具有生理調(diào)節(jié)功能和營(yíng)養(yǎng)功能，對(duì)于人體的生長(zhǎng)發(fā)育、營(yíng)養(yǎng)代謝、免疫調(diào)節(jié)、內(nèi)分泌平衡等生理機(jī)能都有調(diào)節(jié)作用，與人體的健康、衰老、疾病、治療、康復(fù)密切相關(guān)。

多肽應(yīng)用廣泛。作為藥物被應(yīng)用，目前世界上有80多個(gè)多肽藥物上市，全球有150多個(gè)品種處于臨床研究階段，400～600個(gè)治療多肽在進(jìn)行臨床前研究；作為美容功效被應(yīng)用，全世界有數(shù)百種美容肽；作為食物調(diào)味被應(yīng)用，著名的代糖阿斯巴甜，就是典型的二肽衍生物；被應(yīng)用于營(yíng)養(yǎng)，如我國(guó)批準(zhǔn)的新資源食品中就有玉米低聚肽粉及小麥低聚肽；被應(yīng)用于表面活性劑，有日本Kaneka生產(chǎn)的Surfactin。

多肽獲取方式主要有化學(xué)合成法、發(fā)酵法、提取法及降解法。提取法產(chǎn)量極小，實(shí)驗(yàn)室做研究可以，但幾乎無(wú)法工業(yè)化；降解法比較粗放，無(wú)論酸堿法還是酶法，蛋白質(zhì)降解很難得到單一分子結(jié)構(gòu)的多肽，因?yàn)槟c道可以直接吸收部分小肽，降解法用于生產(chǎn)保健品原料可行，成本較低，產(chǎn)量也可以很大。目前也有部分化妝品原料是此類，比如水解大豆蛋白，但這類混合物成分復(fù)雜。

發(fā)酵法的優(yōu)勢(shì)是利用細(xì)胞工廠，獲得純度高的目標(biāo)多肽，不存在消旋問(wèn)題，規(guī)模放大容易，還可以獲得合成困難的多肽。發(fā)酵法需要先構(gòu)建高效表達(dá)的工程菌株，這是困難且花費(fèi)大量時(shí)間和成本的。但發(fā)酵法優(yōu)點(diǎn)突出，綠色可持續(xù)，用合成生物學(xué)來(lái)生產(chǎn)多肽，是未來(lái)的發(fā)展方向。目前發(fā)酵法獲得的短肽如谷胱甘肽，獲得的長(zhǎng)肽如乳酸鏈球菌素、ε-聚賴氨酸鹽酸鹽、溶菌酶、r-聚谷氨酸等大宗產(chǎn)品，還有如干擾素類、白介素類、生長(zhǎng)因子類、重組膠原蛋白、超氧化歧化酶SOD等珍貴原料，這些都是用化學(xué)合成法難以獲得的成分，尤其如超氧化歧化酶SOD,是生物體細(xì)胞內(nèi)廣泛存在且必需的抗氧化成分，功效全面。曾幾何時(shí)大寶SOD蜜的大寶天天見廣告深入人心，但因?yàn)楫?dāng)時(shí)進(jìn)口SOD容易失活，且價(jià)格高昂，無(wú)奈只能概念添加。據(jù)報(bào)道，我國(guó)中科院微生物研究所前幾年推出世界首次從耐熱菌發(fā)酵得到穩(wěn)定化SOD，可以在80攝氏度，pH值為4～11時(shí)保持穩(wěn)定，解決了SOD的穩(wěn)定性問(wèn)題。SOD在抗氧化、抗輻射、抗衰老的實(shí)驗(yàn)中都有良好表現(xiàn)，有望成為本土原創(chuàng)的下一代網(wǎng)紅功效成分。

化學(xué)合成多肽的優(yōu)勢(shì)包括：合成方法可靠，生產(chǎn)成本可控，氨基酸長(zhǎng)度可控，尤其對(duì)小分子多肽類的合成優(yōu)勢(shì)更加明顯，雜質(zhì)成分可控，可制定相對(duì)準(zhǔn)確的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，易于工業(yè)化生產(chǎn)；對(duì)于一些非天然存在的多肽種類可以規(guī)模化可控生產(chǎn)，比如可以在肽鏈上接上化學(xué)修飾過(guò)的氨基酸殘基。化學(xué)合成多肽是目前多肽的主流生產(chǎn)方法，目前化妝品行業(yè)用的功效多肽，通常是化學(xué)合成的。目前在《已使用化妝品原料目錄名稱(2021版)》中化妝品的多肽，通常氨基酸個(gè)數(shù)不大于10，基本都是化學(xué)合成法來(lái)源。

本文僅以化學(xué)合成多肽為例，從一個(gè)化妝品企業(yè)用戶的非專業(yè)角度作一些粗淺科普，希望能讓更多消費(fèi)者和業(yè)界人士了解合成多肽。

固相合成引發(fā)多肽合成革命性突破

肽（Peptide）是指由兩個(gè)或兩個(gè)以上氨基酸通過(guò)肽鍵縮合而形成的化合物。二個(gè)氨基酸縮合就能形成最簡(jiǎn)單的二肽，比如抗糖化的肌肽就是丙氨酸和L-組氨酸縮合形成的二肽；三個(gè)氨基酸縮合就形成三肽，比如抗氧化的谷胱甘肽就是由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸按序縮合形成；大部分二肽，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，容易放大，化學(xué)合成居多；谷胱甘肽也能化學(xué)合成，但因?yàn)橛休^活潑的巰基，化學(xué)合成副反應(yīng)較多，且作為藥品市場(chǎng)需求大，而酵母中谷胱甘肽含量又較高，酵母又是典型的工程菌，因此谷胱甘肽發(fā)酵法生產(chǎn)是主流。

化妝品中多肽最出名的莫過(guò)藍(lán)銅肽GHK-Cu，它是個(gè)三肽和銅離子的絡(luò)合物，產(chǎn)量較大，三肽結(jié)構(gòu)并不復(fù)雜，因此GHK(甘氨酰-L-組氨酸-L-賴氨酸)一般采用液相化學(xué)合成的方法獲得GHK后，和二價(jià)銅離子以摩爾比1:1或2:1絡(luò)合后，過(guò)飽和析出，形成藍(lán)銅肽醋酸鹽或鹽酸鹽，絡(luò)合相當(dāng)于一種純化方式，規(guī)避了液相合成雜質(zhì)較多的缺點(diǎn)；如果在甘氨酸上先棕櫚酰化，然后通過(guò)固相合成法逐步加上組氨酸和賴氨酸，也可以先賴氨酸，在組氨酸和甘氨酸形成GHK后，最后棕櫚酰化，可以得到棕櫚酰三肽-1。

2002年我國(guó)將多肽列為國(guó)家重點(diǎn)產(chǎn)品開發(fā)。在近20年的時(shí)間里，合成多肽在醫(yī)藥、食品、化妝品等領(lǐng)域引發(fā)了關(guān)于功效的工業(yè)革命！

英國(guó)生物化學(xué)家桑格（Frederick Sanger）使用X射線分析法在1955年研究確定了牛胰島素的化學(xué)結(jié)構(gòu)。1965年9月 17日，我國(guó)在世界上首次用人工方法化學(xué)合成了結(jié)晶牛胰島素。

化學(xué)合成多肽最初是液相合成法。液相合成就是經(jīng)典的化學(xué)合成，三傳一反成本低，容易放大，但液相法的缺點(diǎn)是容易消旋，后處理困難。但對(duì)于只有2,3個(gè)氨基酸的小肽，液相合成通常是有優(yōu)勢(shì)的。結(jié)晶牛胰島素51個(gè)氨基酸二條肽鏈的結(jié)構(gòu)，液相合成也可以合成，但合成困難且成本較高。

1972年，Lou Carpino開始將9-芴甲氧羰基（Fmoc)用于保護(hù)α-氨基，其在堿性條件下可以迅速脫除，10分鐘就可以反應(yīng)完全。由于其反應(yīng)條件溫和，迅速得到廣泛使用，到了20世紀(jì)80年代取代了叔丁氧羰基（Boc)，成為固相多肽合成中的常用合成方法。

固相有機(jī)合成多肽的研究一直在發(fā)展，其中包含固相合成樹脂、多肽縮合試劑、氨基酸保護(hù)基的研究，并在此基礎(chǔ)上推動(dòng)可持續(xù)性，綠色化學(xué)方面的合成研究（如Lipotec公司在推動(dòng)綠色化學(xué)合成多肽）。

Sederma公司最早生產(chǎn)且被寶潔應(yīng)用壟斷的多肽Matrixyl（棕櫚酰五肽-4），后來(lái)原廠Sederma進(jìn)一步開發(fā)了Matrixyl 3000（棕櫚酰三肽-1，棕櫚酰4肽-7）號(hào)稱功效超過(guò)Matrixyl；Matrixyl 3000里面的棕櫚酰三肽-1，也被稱為棕櫚酰寡肽，它和銅肽的肽鏈?zhǔn)且粯拥摹?/p>

多肽化學(xué)合成的簡(jiǎn)單歷史如下：

1902年，Emil Fischer開始做多肽合成實(shí)驗(yàn)，由于當(dāng)時(shí)多肽合成方面的知識(shí)太少，進(jìn)展緩慢。

1932年，Max Bergmann等人開始使用芐氧羰基來(lái)保護(hù)α-氨基，多肽合成有了一些發(fā)展。

1950年代，F(xiàn)red Sanger發(fā)明了氨基酸序列測(cè)定方法，并因此獲得了1958年的諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。

1963年，Merrifeld提出了固相多肽合成方法（SPPS),這是在多肽化學(xué)史上具有里程碑意義的合成方法。這種方法一出來(lái)，就由于合成方便、迅速，成為多肽合成的常用方法，而且也帶來(lái)有機(jī)合成上的一次革命，并成為一支新學(xué)科—固相有機(jī)合成（SPOS)。Merrifeld將叔丁氧羰基（Boc)用于保護(hù)α-氨基并在固相多肽合成上使用，其可以在酸性條件下定量脫除，反應(yīng)也迅速，30分鐘內(nèi)就可以反應(yīng)完全。

多肽化學(xué)合成真正的騰飛，是來(lái)自于Merrifeld博士。1963年，Merrifeld博士首次提出了固相多肽合成方法(SPPS)，該合成方法的出現(xiàn)也帶來(lái)了多肽有機(jī)合成的一次革命。對(duì)于多肽合成來(lái)說(shuō)，幾乎就是所見即所得，只要結(jié)構(gòu)式合理，就能按序合成多肽，從此誕生了一門獨(dú)立的學(xué)科—固相有機(jī)合成(SPOS)，Merrifeld博士也因此榮獲了1984年的諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。

現(xiàn)在，多肽全自動(dòng)合成儀代替了大部分繁瑣的手動(dòng)實(shí)驗(yàn)過(guò)程，可通過(guò)編程合成眾多不同的多肽來(lái)作優(yōu)選。

多肽合成關(guān)鍵步驟和質(zhì)量把控

三肽及三肽以上的美容多肽合成，大多數(shù)都采用固相合成方法，其中t-Boc和Fmoc是固相多肽合成現(xiàn)在使用的主要兩種策略。相對(duì)于t-BOC固相合成（需要用到強(qiáng)刺激性的氫氟酸），F(xiàn)moc反應(yīng)條件更加溫和，副反應(yīng)較少，逐漸成為主要的化學(xué)固相合成方法。

高校的停車位也是學(xué)校的重要資源，為了能夠依靠車位給學(xué)校創(chuàng)造更高的價(jià)值，需要使用精細(xì)化管理的方法。在校園內(nèi)，教學(xué)樓和辦公樓周邊對(duì)車位的需求很大，如果大量的車輛在不清楚車位具體情況時(shí)，就會(huì)向著這兩個(gè)位置聚集，致使出現(xiàn)交通問(wèn)題。這就需要進(jìn)行智能停車位的建設(shè)，通過(guò)架設(shè)智能識(shí)別的攝像頭，紅綠色顯示的指示等，無(wú)線地感線圈等，對(duì)車位的空余情況進(jìn)行分析，并形成數(shù)據(jù)，將這些數(shù)據(jù)接入找車位的APP，就能引導(dǎo)車輛快速扎到停車位置，還避免了局部停車過(guò)多所導(dǎo)致的閘口壓力。

多肽的Fmoc固相合成的基本原理：先將所要合成肽鏈的羥末端氨基酸的羥基以共價(jià)鍵的結(jié)構(gòu)同一個(gè)不溶性的高分子樹脂相連，然后以此結(jié)合在固相載體上的氨基酸作為起點(diǎn)，脫掉氨基端的保護(hù)，和下一個(gè)過(guò)量的氨基酸（反應(yīng)過(guò)程需要加入偶聯(lián)劑來(lái)活化氨基酸上的羧基）進(jìn)行肽鍵縮合，然后洗滌去除殘留氨基酸，用茚三酮測(cè)試是否清洗干凈或反應(yīng)完全，然后就開始重復(fù)脫保護(hù)，和下一個(gè)氨基酸進(jìn)行肽鍵縮合、洗滌，用茚三酮測(cè)試是否清洗干凈或反應(yīng)完全，直到達(dá)到所要合成的肽鏈長(zhǎng)度，最后將肽鏈從樹枝上裂解下來(lái)，之后經(jīng)過(guò)色譜純化等處理，得到目標(biāo)多肽。用于多肽合成的氨基酸，并非普通氨基酸，而是經(jīng)過(guò)Fmoc氨基保護(hù)的氨基酸，部分氨基酸還需要側(cè)鏈保護(hù)，還要考慮到是否消旋，實(shí)際反應(yīng)是復(fù)雜的，成本也很高。

多肽合成的主要原料通常包括，N,N二甲基甲酰胺（DMF）、哌啶、固相多肽合成樹脂、二氯甲烷（DCM）、茚三酮測(cè)試液、四甲基脲六氟磷酸鹽（HBTU）或類似耦合劑、三異丙基硅烷(TIS)、乙二硫醇（EDT）、甲基叔丁基醚或乙醚、三氟乙酸（TFA）、N-甲基嗎啉（NMM）、乙醇、各種多肽合成用Fmoc氨基酸等。當(dāng)然，不同多肽合成，原料和合成條件細(xì)節(jié)不一樣，以上只是典型案例。

新原料近十年來(lái)，是全世界化妝品企業(yè)和全世界原料企業(yè)的一大心病，因?yàn)?012～2019年，中國(guó)只新增了4種化妝品原料，國(guó)家對(duì)于化妝品原料審批非常嚴(yán)格。2020年開始，化妝品行業(yè)新原料推出注冊(cè)和備案制，在2020～2021年，已有8款新原料申請(qǐng)獲批，預(yù)示著在“放管服”的思想下，國(guó)家藥監(jiān)逐漸放開新原料備案，這是化妝品原料企業(yè)的發(fā)展機(jī)遇，也是挑戰(zhàn)。

作為化妝品原料，化學(xué)合成多肽的質(zhì)量把控是極為重要的。目前在化妝品應(yīng)用中，多肽這一類產(chǎn)品缺少國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，但在不斷應(yīng)用發(fā)展過(guò)程中，很多企業(yè)也建立了嚴(yán)格的化學(xué)合成多肽質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)來(lái)進(jìn)行品質(zhì)把控。

最初我們使用的多是國(guó)外的多肽，都是含多少ppm的溶液型多肽產(chǎn)品，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)非常簡(jiǎn)單，通常只有pH范圍，然后是溶液中的多肽含量范圍，加上常規(guī)的顏色氣味外觀微生物重金屬制備，無(wú)法真實(shí)評(píng)估稀釋前多肽的品質(zhì)。隨著多肽國(guó)產(chǎn)化的發(fā)展，我們可以得到純品，這能夠幫助我們更好地從源頭把控多肽的質(zhì)量。因?yàn)橛辛思兤罚涂梢宰龈珳?zhǔn)的分析和評(píng)估，藥品行業(yè)使用多肽是要對(duì)雜質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的，如果沒(méi)有純品，雜質(zhì)情況就無(wú)法分析。

化學(xué)合成多肽的質(zhì)量檢測(cè)涉及面廣，建立標(biāo)準(zhǔn)的參考依據(jù)是國(guó)內(nèi)外藥典標(biāo)準(zhǔn)和化妝品行業(yè)規(guī)范限度要求的結(jié)合。包括純度、凈肽含量、水分含量、鹽含量、溶劑殘留、微生物、重金屬指標(biāo)等等，涉及的檢測(cè)設(shè)備包括高效液質(zhì)聯(lián)用(HPLC-MS/MS)、氣相色譜(GC)=、等離子體質(zhì)譜（ICPMS）等等。分析方法的建立也是合成多肽能夠快速發(fā)展的一個(gè)重要原因，如通過(guò)設(shè)置不同的HPLC測(cè)試梯度條件，不同極性的勝肽可以被分離，峰面積和肽含量成正比，對(duì)多肽可以進(jìn)行充分的定性和定量分析；MALDI-TOF MS是精確測(cè)定相對(duì)分子質(zhì)量,使用多肽衍生進(jìn)行氨基酸分析確定氨基酸種類和個(gè)數(shù)，當(dāng)各種原理的質(zhì)譜技術(shù)串聯(lián)應(yīng)用時(shí)，不但可以得到多肽的相對(duì)分子質(zhì)量信息，也可以判斷它的序列結(jié)構(gòu)。

Research on Big Data Analysis Laboratory Construction_________________________________YANG Liqun 78

關(guān)于多肽的一些指標(biāo)、純度與含量

用液相色譜測(cè)試一個(gè)不是絕對(duì)百分百純凈的物質(zhì)時(shí)，其實(shí)這個(gè)物質(zhì)里面存在液相色譜條件下出峰和不出峰的不同成分，純度考慮的是所有出峰（也就是被液相檢出）的成分中，目標(biāo)物質(zhì)的百分含量。此情況是沒(méi)考慮過(guò)沒(méi)被檢測(cè)的那部分物質(zhì)占據(jù)的量；也就是純度值絕不可能超過(guò)100%。對(duì)于多肽來(lái)說(shuō)，肽的純度是在肽的最大吸收峰214nm處由HPLC分析而得到的，肽中一般還含有水分和鹽分，但肽的純度沒(méi)有把它們計(jì)算在內(nèi)，純度考慮的是粗肽分離純化的結(jié)果。

含量是指目標(biāo)物在樣品中所占的百分比，樣品包含目標(biāo)物及水分、鹽分、其他雜質(zhì)等；肽的含量是指目標(biāo)肽在樣品中所占的百分比，所以肽含量這個(gè)指標(biāo)是與水分，鹽分等相關(guān)的，水分和鹽分含量控制得越好，肽含量也越高。用HPLC測(cè)試含量，通常需要標(biāo)準(zhǔn)物。因此有時(shí)被檢測(cè)樣品會(huì)出現(xiàn)含量超過(guò)100%的情況，看似不合理，其實(shí)這反而是正常的，因?yàn)榻Y(jié)果里面包含稱量誤差、標(biāo)準(zhǔn)物純度并非100%等一系列實(shí)際分析問(wèn)題。

溶劑殘留這個(gè)指標(biāo)也是非常重要的，化學(xué)合成過(guò)程中無(wú)法避免溶劑的使用，控制溶劑殘留也就顯得尤為重要。有些過(guò)敏反應(yīng)其實(shí)是產(chǎn)品中其他成分所引起的，目前我們觀察到很多的多肽原料沒(méi)有體現(xiàn)溶殘這一個(gè)指標(biāo)，所以有這個(gè)指標(biāo)且數(shù)值非常低的多肽也是我們?cè)u(píng)判的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。如乙酰化后如果純化沒(méi)做好會(huì)帶入較高醋酸鹽，如氫氟酸或三氟乙酸可能會(huì)溶解重金屬，所以還需要測(cè)試醋酸鹽、三氟乙酸鹽、及重金屬含量；另外還有水分含量、氯離子含量等；國(guó)產(chǎn)多肽生產(chǎn)企業(yè)里，例如浙江湃肽在純肽的COA上，就體現(xiàn)了溶劑殘留指標(biāo)和鹽含量指標(biāo)，其對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的認(rèn)真態(tài)度值得推薦。

對(duì)化妝品生產(chǎn)企業(yè)來(lái)說(shuō)，不可能對(duì)每種原料都花費(fèi)高昂的成本進(jìn)行逐批次檢驗(yàn)。最合適的做法是，找對(duì)原料生產(chǎn)商，找能通過(guò)質(zhì)量審核且自身有完善質(zhì)量控制能力的原料生產(chǎn)商。比如，多肽合成中需要用到高純度的Fmoc-氨基酸，部分還需要側(cè)鏈保護(hù)的高純Fmoc-氨基酸，酰基化的Fmoc-氨基酸，或者其他關(guān)鍵原料，如果原料生產(chǎn)商自身質(zhì)量把控好，能對(duì)它的上游生產(chǎn)商有質(zhì)量控制，且本身又能進(jìn)行良好有效的來(lái)料質(zhì)量檢驗(yàn)，這就給產(chǎn)品的質(zhì)量批次穩(wěn)定性奠定了基礎(chǔ)。

目前珀萊雅公司應(yīng)用的幾十種多肽里面，因?yàn)榭紤]到多肽的專利保護(hù)，以及支持科研原創(chuàng)的態(tài)度，絕大多數(shù)種類的多肽仍然來(lái)自國(guó)外供應(yīng)商。國(guó)產(chǎn)多肽目前基本都還是仿制肽。因此做好與原研多肽的一致性評(píng)價(jià)是非常重要的。用INCI名字表達(dá)多肽并不嚴(yán)謹(jǐn)，另外還存在多肽中某個(gè)氨基酸的手性結(jié)構(gòu)、原料或制備過(guò)程帶來(lái)的雜質(zhì)等情況，這對(duì)于多肽物質(zhì)呈現(xiàn)的功效影響很大。

1）首先根據(jù)王家會(huì)站1992—2016年最大流量，計(jì)算頻率并繪制頻率曲線，取頻率p為10%所對(duì)應(yīng)的流量10.0 m3/s為高水流量。

這一改變對(duì)多肽市場(chǎng)的規(guī)范意義重大。目前多肽類由于缺乏國(guó)家及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，基本上按照企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)來(lái)執(zhí)行，市場(chǎng)產(chǎn)品品質(zhì)參差不齊。同時(shí)，美國(guó)個(gè)人護(hù)理品協(xié)會(huì)(PCPC) 對(duì)合成小分子肽的命名描述得非常簡(jiǎn)略，導(dǎo)致很多合成多肽原料使用的是統(tǒng)一INCI，但其實(shí)完全不是同一個(gè)物質(zhì)；另外，合成多肽的具體序列測(cè)定，可能的構(gòu)型驗(yàn)證過(guò)程非常困難，想要完全破譯一款多肽的序列需要原料商在開發(fā)產(chǎn)品做大量研發(fā)工作。所以一旦序列確認(rèn)成功，原料廠家出于對(duì)自身的保護(hù)，不對(duì)外公布多肽序列。

新規(guī)對(duì)寡肽類應(yīng)明確氨基酸序列這一項(xiàng)的明確指出，對(duì)合成肽類市場(chǎng)也是一次不小的沖擊。序列的公布，讓偽劣假貨無(wú)處遁形，也方便用戶更好驗(yàn)證評(píng)估原料真?zhèn)巍＿@一舉措有利于多肽市場(chǎng)的規(guī)范，讓多肽產(chǎn)品真正回歸單一明確的分子。沖擊也是動(dòng)力，對(duì)于真正踏實(shí)做高質(zhì)量產(chǎn)品，特別對(duì)于那些原創(chuàng)且做好知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)的企業(yè)來(lái)講，會(huì)帶來(lái)良性循環(huán)。

從原料報(bào)送碼公示頁(yè)面上看到，頁(yè)面沒(méi)有涉及原料商的機(jī)密信息，甚至連原料商品名都不公示，這體現(xiàn)了監(jiān)管部門注重原料生產(chǎn)企業(yè)的知識(shí)產(chǎn)權(quán)和商業(yè)保密。但也要認(rèn)識(shí)到，監(jiān)管部門讓原料商主動(dòng)提供的原料報(bào)送安全信息，相當(dāng)于用政府威嚴(yán)給化妝品生產(chǎn)企業(yè)提供了無(wú)形的保障，使用具有原料報(bào)送碼的原料，一定程度上可以讓化妝品企業(yè)，特別是中小型化妝品企業(yè)更有安全感。

延伸濕地旅游產(chǎn)品鏈，還可開展?jié)竦匚幕蓍e、濕地?cái)z影競(jìng)賽、濕地文化演藝活動(dòng)、濕地文化學(xué)術(shù)論壇，以提高濕地旅游的參與性和趣味性。

新原料法規(guī)給予合成多肽更多的未來(lái)探索空間

從合成多肽的制備步驟來(lái)看，涉及不少化學(xué)試劑，如果經(jīng)過(guò)精準(zhǔn)的脫除、洗滌和工藝，制備過(guò)程中所產(chǎn)生的雜質(zhì)包括中間體、副產(chǎn)物、溶殘等，目前都已經(jīng)可以精準(zhǔn)控制在合理且安全應(yīng)用的范圍內(nèi)。現(xiàn)代分析儀器精度很高，只要我們理解了整個(gè)反應(yīng)過(guò)程及參與的試劑，就能分析檢測(cè)多肽原料中的雜質(zhì)。

化妝品是由各種原料經(jīng)過(guò)合理調(diào)配加工而成的復(fù)配混合物，化妝品創(chuàng)新的源頭很大程度上取決于原料創(chuàng)新，原料的多樣性對(duì)于行業(yè)發(fā)展至關(guān)重要。缺少創(chuàng)新原料，化妝品企業(yè)無(wú)法實(shí)現(xiàn)建立自己的核心技術(shù)，創(chuàng)新受限，競(jìng)爭(zhēng)內(nèi)卷，因此化妝品企業(yè)對(duì)原料廠商也提出了更高的要求，提供創(chuàng)新原料的原料企業(yè)將獲得更多與企業(yè)深度合作的機(jī)會(huì)。新原料代表突破、新機(jī)會(huì)，也代表企業(yè)的研發(fā)生產(chǎn)實(shí)力。新原料的推出，能更好地推動(dòng)國(guó)產(chǎn)化妝品本地創(chuàng)新，在國(guó)內(nèi)乃至國(guó)際市場(chǎng)中更具品牌競(jìng)爭(zhēng)力。

新原料申報(bào)新規(guī)中對(duì)于注冊(cè)受理和備案受理收件相比較以前都縮短了時(shí)間，對(duì)于備案受理最短5個(gè)工作日即可完成備案梳理。雖然時(shí)間上有縮短，但新原料的備案所需要提交的資料還是要求非常嚴(yán)格的，特別是對(duì)于多肽類，在新規(guī)中有特別指出：對(duì)于國(guó)內(nèi)外首次使用的具有較高生物活性的寡肽、多肽、蛋白質(zhì)類新原料，應(yīng)當(dāng)提供第1～12項(xiàng)毒理學(xué)試驗(yàn)資料，包括：

1.急性經(jīng)口或急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)；

2.皮膚和眼刺激性/腐蝕性試驗(yàn)；

3.皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)；

式中:為獨(dú)立的同向分布噪聲,設(shè)為高斯噪聲,均值為零,方差為是傳感器測(cè)量的實(shí)際距離.假定偽影隨著測(cè)量距離的增加而增加.本文中,其中γ為常數(shù),距離矩陣D的估計(jì)誤差用向量ξk=vect(ξk)表示,則

4.皮膚光毒性試驗(yàn)（原料具有紫外線吸收特性需做該項(xiàng)試驗(yàn)）；

由于受歐洲美聲唱法的影響，20世紀(jì)30年代開始，我國(guó)的民族聲樂(lè)有了初期的發(fā)展，在周小燕、喻伊暄等為代表的一批聲樂(lè)教育家的努力下，我國(guó)的民族唱法獲得很大發(fā)展。尤其是到了20世紀(jì)50年代，我國(guó)的民族唱法逐漸開始向?qū)I(yè)化發(fā)展。這時(shí)，一些音樂(lè)院校相繼開設(shè)了民族聲樂(lè)課程，設(shè)立了民族聲樂(lè)研究機(jī)構(gòu)，在繼承傳統(tǒng)民歌特點(diǎn)的基礎(chǔ)上，大膽借鑒吸收了美聲唱法在呼吸、發(fā)聲、共鳴等方面的優(yōu)點(diǎn)，使民族聲樂(lè)步入了一個(gè)良性循環(huán)的發(fā)展軌道。隨著民族聲樂(lè)的不斷探索和發(fā)展，還出現(xiàn)了一批富有民族風(fēng)格特色的歌劇，如《小二黑結(jié)婚》、《洪湖赤衛(wèi)隊(duì)》等。這些歌劇深受觀眾的喜愛，為民族聲樂(lè)添彩增色，同時(shí)也為民族唱法的發(fā)展奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

5.皮膚光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)（原料具有紫外線吸收特性需做該項(xiàng)試驗(yàn)）；

6.致突變?cè)囼?yàn)（至少應(yīng)當(dāng)包括一項(xiàng)基因突變?cè)囼?yàn)和一項(xiàng)染色體畸變?cè)囼?yàn)）；

7.亞慢性經(jīng)口或經(jīng)皮毒性試驗(yàn)（如果該原料在化妝品中使用經(jīng)口攝入可能性大時(shí)，應(yīng)當(dāng)提供亞慢性經(jīng)口毒性試驗(yàn)）；

將樣品用0.22 μm的針式過(guò)濾器過(guò)濾后，在波長(zhǎng)420 nm、520 nm、620 nm下測(cè)定其吸光值，分別記做A420、A520、A620，計(jì)算 A420、A520、A620 之和作為樣品的色度值[7,8]。

2021年5月開始，《化妝品注冊(cè)備案管理辦法》《化妝品功效宣稱評(píng)價(jià)規(guī)范》《化妝品標(biāo)簽管理辦法》等多項(xiàng)化妝品行業(yè)法規(guī)正式實(shí)施。其中，新《條例》下首次實(shí)施原料安全信息報(bào)送，這對(duì)化妝品原料行業(yè)是一次不小的變革。原料安全相關(guān)信息表附件14相對(duì)于之前的我們常用的MSDS（物質(zhì)安全說(shuō)明表），明確要求所有組分比例完全公開，并對(duì)生產(chǎn)工藝提出了要求，對(duì)質(zhì)量控制各項(xiàng)指標(biāo)也更為嚴(yán)格，其中特別指出，針對(duì)化學(xué)結(jié)構(gòu)明確的單一原料，提供純度要求，寡肽類應(yīng)明確氨基酸序列。

8.致畸試驗(yàn)；

9.慢性毒性/致癌性結(jié)合試驗(yàn)；

加入的廢液偏少，BT值會(huì)偏高，溶液呈乳白色，易形成“堿式絮狀物”，液相與固相比重差縮小后造成鎘渣漂移、出口含固量升高、首槽鎘渣品位低、除鎘反應(yīng)器含鎘梯度不明顯、迫使鋅粉更換加快等一系列化“惡性循環(huán)”。廢液加入過(guò)多，BT值偏低，消耗鋅粉量增加，槽內(nèi)產(chǎn)生氣泡，同樣影響沸騰層的穩(wěn)定。通過(guò)長(zhǎng)時(shí)間試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：除鎘 BT值適宜控制在0.7～1.2之間，宜低不宜高。

10.吸入毒性試驗(yàn)（原料有可能吸入暴露時(shí)須做該項(xiàng)試驗(yàn)）;

“周明，你為什么把天水家的低保戶資格給取消，是不是去年你妻侄和我孫子打架被拘留，你懷恨在心。你覺得我們姓徐的好欺負(fù)？”仗著在村里輩分高，族長(zhǎng)直呼其名。

根據(jù)本科醫(yī)學(xué)教育教學(xué)改革的要求，不斷完善考核制度是提高醫(yī)學(xué)本科學(xué)生教學(xué)質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)[1]。在本校教育教學(xué)改革的過(guò)程中，將醫(yī)學(xué)免疫學(xué)與微生物學(xué)課程考核分為平時(shí)考核和期末考核。其中，考勤、課堂表現(xiàn)、作業(yè)是學(xué)生平時(shí)考核的主要內(nèi)容。因?yàn)樽鳂I(yè)是學(xué)生復(fù)習(xí)并鞏固所學(xué)醫(yī)學(xué)免疫學(xué)與微生物學(xué)知識(shí)，獨(dú)立運(yùn)用所學(xué)知識(shí)解決臨床相關(guān)問(wèn)題，提高學(xué)生綜合素質(zhì)能力的重要手段；并且在教學(xué)過(guò)程中，教師也可以通過(guò)作業(yè)了解學(xué)生對(duì)所學(xué)內(nèi)容的掌握情況及應(yīng)用能力，以便更好地改進(jìn)教學(xué)策略和方法，提高教學(xué)效果[2]。因此，作業(yè)在醫(yī)學(xué)免疫學(xué)與微生物學(xué)課程平時(shí)考核中占有很大比例。

11.長(zhǎng)期人體試用安全試驗(yàn)（待定）；

雖然旅游業(yè)已經(jīng)在我國(guó)發(fā)展了幾十年，但是相關(guān)法律法規(guī)卻非常缺失，需要進(jìn)一步完善才可以。網(wǎng)絡(luò)上的信息真假難分，想要保證在線上良好運(yùn)行，必須有強(qiáng)大的法律保障，才能減少不利因素的影響，創(chuàng)建出綠色網(wǎng)絡(luò)環(huán)境。游客由于自身原因，很難分辨出真假信息，導(dǎo)致經(jīng)常出現(xiàn)上當(dāng)受騙的情況，造成錢財(cái)?shù)膿p失。在實(shí)際運(yùn)行中，一般都是線上查詢、線下交易，過(guò)程中存在一定的漏洞。當(dāng)游客自身權(quán)益受到侵犯的時(shí)候，卻沒(méi)有法律的保障，長(zhǎng)此以往市場(chǎng)秩序會(huì)出現(xiàn)混亂的情況。所以建立健全法律法規(guī)是必然的，讓旅游各方面都更加規(guī)范。

12.根據(jù)原料的特性和用途，需提供其他項(xiàng)目的毒理學(xué)試驗(yàn)資料。

注1 對(duì)于很多f(n),如多項(xiàng)式、指數(shù)函數(shù)等,和式可以有簡(jiǎn)單的形式,推導(dǎo)時(shí)需要一些技巧，如當(dāng)f(n)=n時(shí),和式歸結(jié)為計(jì)算

還應(yīng)當(dāng)同時(shí)提交皮膚吸收/透皮試驗(yàn)和免疫毒性試驗(yàn)資料。這也要求多肽類原料商在新原料前期研發(fā)申報(bào)前就做好充分的安全性評(píng)估、功效評(píng)估、工藝評(píng)估，確保新原料的順利合規(guī)應(yīng)用。

培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、馬鈴薯去皮，切成塊煮沸30 min，然后紗布過(guò)濾，再加糖及瓊脂，融化后補(bǔ)足水至 1000 mL，121 ℃滅菌30 min，液體培養(yǎng)基不加瓊脂。

對(duì)于以上要求，個(gè)人認(rèn)為，多肽分子也得分情形考慮，大多數(shù)結(jié)構(gòu)的多肽，在正常皮膚上使用風(fēng)險(xiǎn)不大，一刀切都要按照情形1中的要求商榷。

國(guó)內(nèi)外首次使用的具有防腐、防曬、著色、染發(fā)、祛斑美白、防脫發(fā)、祛痘、抗皺（物理性抗皺除外）、去屑、除臭功能，以及其他國(guó)內(nèi)外首次使用的具有較高生物活性的化妝品新原料，應(yīng)當(dāng)提交上述第1～12項(xiàng)毒理學(xué)試驗(yàn)資料；如果不具備或不宣稱具有這些情形1中的功能，完全可以按照情形2：國(guó)內(nèi)外首次使用的，不具有防腐、防曬、著色、染發(fā)、祛斑美白、防脫發(fā)、祛痘、抗皺（物理性抗皺除外）、去屑、除臭功能的新原料，應(yīng)當(dāng)提交上述第1～7項(xiàng)毒理學(xué)試驗(yàn)資料來(lái)處理；我始終覺得化妝品是低風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)品，如果都按情形1，一個(gè)創(chuàng)新多肽的檢測(cè)費(fèi)用估計(jì)就要在500～1000萬(wàn)元，耗時(shí)3年以上，過(guò)高的費(fèi)用和過(guò)長(zhǎng)的測(cè)試時(shí)間，會(huì)限制真正的國(guó)產(chǎn)創(chuàng)新多肽類新原料的發(fā)展；而引入國(guó)外已經(jīng)銷售3年以上但目前不在已使用目錄上的多肽，又無(wú)法鼓勵(lì)國(guó)內(nèi)源頭創(chuàng)新。

對(duì)于多肽類原料，《已使用化妝品原料名稱目錄》（2021年版）中的涉及多肽的原料共計(jì)75個(gè)，但在國(guó)際化妝品原料標(biāo)準(zhǔn)中文名稱目錄中有1203個(gè)涉及多肽原料。這些多肽原料想要進(jìn)入中國(guó)化妝品原料INCI，必須進(jìn)行新原料的備案及申報(bào)工作。對(duì)新原料這一塊，需要新《條例》在釋義中對(duì)多肽創(chuàng)新分子進(jìn)一步松綁，給予合成多肽類原料更多的未來(lái)探索空間，對(duì)于國(guó)產(chǎn)化妝品企業(yè)來(lái)講，也會(huì)是極大的發(fā)展推動(dòng)。從行業(yè)發(fā)展角度來(lái)看，安全和發(fā)展要平衡考慮。有土壤，創(chuàng)新的種子才能發(fā)芽。

多肽的創(chuàng)新

因?yàn)槎嚯墓滔嗪铣杉夹g(shù)的成熟，多肽生產(chǎn)漸漸變成體力活，當(dāng)然，做好質(zhì)量把控并不是容易的事情。不同多肽生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品，質(zhì)量并非一樣，要選擇技術(shù)能力強(qiáng)、質(zhì)量有保障的多肽生產(chǎn)企業(yè)。

但更難的是原創(chuàng)，有目的、超越式的創(chuàng)新。我們教育體制下，往往學(xué)生缺乏提出正確問(wèn)題的能力。

多年來(lái)，多肽類化妝品新原料，很遺憾國(guó)內(nèi)多肽生產(chǎn)商只有模仿，沒(méi)有創(chuàng)新，原因來(lái)自法規(guī)對(duì)新原料的限制。深圳維琪在類蛇毒肽分子上進(jìn)行了衍生，在原有的淡紋功效基礎(chǔ)上，還可以提升膠原蛋白含量，備案為003號(hào)新原料，是多肽邁出可喜的一步。

未來(lái)我們總是要走上原創(chuàng)道路的，如何創(chuàng)新是擺在我們面前必須邁過(guò)的門檻。對(duì)既有多肽分子修飾是第一步，但我們的目標(biāo)不應(yīng)僅限于此。

國(guó)外一些多肽原研企業(yè)，借助于計(jì)算機(jī)仿真，選定目標(biāo)蛋白，明確活性位點(diǎn)，模擬活性位點(diǎn)和受體相互作用確定最優(yōu)短片肽的序列，并加以分子修飾，如DSM的Syn-Coll、Syn-ake；從功效機(jī)理逆過(guò)程出發(fā)，如皺紋來(lái)自肌肉收縮，從這個(gè)機(jī)理出發(fā)，Lipotec開發(fā)了廣受好評(píng)的Argireline、SNAP-8；Lipotec被巴菲特買下后，Lipotec原老板Antonio Parente博士和Jose Maria Garcia Aoton博士成立了Lipoture后，開發(fā)出更高效的Munapsys(乙酰基6肽-1)。

或者，尋找新的靶點(diǎn)，這需要許多生物和醫(yī)學(xué)博士把手頭的研究考慮在皮膚護(hù)理領(lǐng)域進(jìn)行應(yīng)用。此外，還有很多未通過(guò)臨床的藥物肽，對(duì)于美容肽這個(gè)應(yīng)用場(chǎng)景來(lái)說(shuō)，或許是另外開了一扇門。

另外，制劑創(chuàng)新，主要涉及劑量劑型，長(zhǎng)效緩釋方法、器械和給藥途徑等領(lǐng)域可能是門檻較低的一個(gè)方向。現(xiàn)有的凍干粉技術(shù)并沒(méi)從本質(zhì)上提高多肽的功效或生物利用度，通過(guò)微針、納米乳液、脂質(zhì)體等形式來(lái)提高多肽的功效，這些方向可行，但都需要進(jìn)一步探索和驗(yàn)證。

對(duì)多肽在皮膚上的滲透性、輸送到真皮目標(biāo)部位的濃度一直不明確，需要用實(shí)驗(yàn)說(shuō)明。

從多肽生產(chǎn)角度，每批次合成工藝更穩(wěn)定、批量更大、成本更低，乃至于用合成生物學(xué)發(fā)酵的方法進(jìn)行生產(chǎn)，這些也是需要?jiǎng)?chuàng)新的。

結(jié)語(yǔ)

美容肽，自Sederma率先引入化妝品行業(yè)以來(lái)，消費(fèi)者對(duì)此類成分的關(guān)注和認(rèn)知程度都在不斷加大，目前其迎來(lái)了應(yīng)用的爆發(fā)期，商業(yè)價(jià)值巨大。國(guó)內(nèi)化學(xué)合成多肽目前還是集中在模仿和制備端，在基礎(chǔ)科學(xué)應(yīng)用這一塊還與國(guó)外有較大的差距，仍有很多的研究工作要做，包括許多合成多肽的真實(shí)臨床應(yīng)用、復(fù)配功效研究、濃度梯度的研究等。

積極開發(fā)新結(jié)構(gòu)的多肽產(chǎn)品，推動(dòng)國(guó)產(chǎn)多肽研究，多向國(guó)外美容肽企業(yè)如Lipotec、DSM、Lipoture、Sederma、Ashland等學(xué)習(xí)，學(xué)習(xí)他們的原創(chuàng)思路。這些都是多肽原料生產(chǎn)商和化妝品企業(yè)需要一起去協(xié)作共同探討解決的問(wèn)題。