2例散發型神經纖維瘤病病人及其家系NF1基因突變的檢測

馬盼盼 劉芙蓉 張慶華 張 釧 郝勝菊 陳 雪 王 真 孫慶梅

Ⅰ型神經纖維瘤病（neurofibromatosis type 1，NF1）的典型特征是身體多處牛奶咖啡斑，腋下和腹股溝雀斑，多個離散的皮膚神經纖維瘤以及虹膜Lisch 結 節。NF1 以 常 染 色 體 顯 性 方 式 遺 傳。本文報道2例散發

NF1

基因檢測結果。

1 資料與方法

1.1 一般資料 病例1為33歲女性，眼睛周圍和上身分布咖啡斑，已懷孕6周，其丈夫未見明顯異常。病例2 為3 歲男孩，全身分布牛奶咖啡斑，背部皮下有一腫塊，雙側扁桃體腫大，父母及其姐姐未見異常。

1.2

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基因檢測 抽取病例1及其丈夫、病例2及其父母外周血2～3 ml。取200 μl 外周血，采用全自動核酸提取儀提取DNA，然后使用核酸濃度測定儀NanoDrop2000 測定DNA 濃度。保證DNA 濃度在50 ng/μl 左右，OD260/280 在1.8～2.0。待測樣本送至邁基諾基因檢測公司進行高通量測序，平均測序深度為1 000×，所有區域達到20×以上的覆蓋度。

1.3 驗證

1.3.1 點突變驗證分析 根據GenBank

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基因序列(NC_000017.11)，應用在線Primer 3.0（http://primer3.ut.ee）軟件設計相應突變位點引物。對相應致病突變位點所在基因組區域進行PCR 擴增，純化擴增產物，使用BigDye 測序反應試劑盒（美國Applied Biosysterms公司）進行測序，然后使用ABI 3500D Genetic Analyzer儀器（美國Applied Biosysterms 公司）進行檢測。最后，對測序結果與

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基因參考序列（NM_000267）進行比對。1.3.2 外顯子雜合缺失分析 使用多重探針連接擴增技術檢測試劑盒（SALSA MLPA P081 及P082 探針，荷蘭MRC 公司），包括DNA 的變性、探針雜交、連接反應、擴增、及產物分析，檢測

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基因拷貝數變化。

2 結果

2 例均檢測出

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基因突變。病例1 為

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基因整體雜合缺失突變（圖1A）；病例2 為

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基因c.6408delA（圖1B），導致氨基酸改變p.L2137Yfs*42，為移碼突變，導致基因功能喪失。

圖1 2例NF1基因檢測結果