嬰幼兒化妝品中游離甲醛的檢測方法適用性研究

＊徐勤科 李莉 劉婷媛 魏學冰 郭朝暉 孫鶯

（甘肅省藥品檢驗研究院 甘肅 730000）

引言

甲醛是一種由氫、氧和碳元素構成的有機化合物。甲醛在我們呼吸的空氣中自然存在，甚至是我們人體代謝的一部分。動植物也會產生甲醛。某些蔬菜在烹調過程中會以副產品的形式釋放甲醛。因此，甲醛并非我們想象中那么可怕，因為我們的身體每天都在不停的代謝微量的甲醛。但是甲醛濃度過大時候的潛在危害也非常嚴重的，特別是新房剛裝修的人們，談醛色變一直是普遍的現狀[1]。甲醛的主要危害表現為對皮膚粘膜的刺激作用。甲醛在室內達到一定濃度時，人就有不適感。大于0.08mg/m3的甲醛質量濃度可引起眼紅、眼癢、咽喉不適或疼痛、聲音嘶啞、噴嚏、胸悶、氣喘、皮炎等。新裝修的房間甲醛含量較高，是眾多疾病的主要原因。但是，甲醛除了是造成室內空氣污染的元兇之外，還被廣泛應用于各個行業，例如，化妝品[2-4]。

而對于女性最關注的化妝品中是否含有甲醛這一問題，其實化妝品中檢測到的甲醛是部分防腐劑和原料帶進來的，并不是人為添加的，而是在生產過程中，為保證產品的溫和質地，并避免細菌繁殖而采用的生產過程的副產物。化妝品產品成份是否對人體有害，關鍵取決于量，而對于護理品，甲醛的質量分數不超過0.05%是安全的。美國食品藥品管理局（FDA）2010調查結果顯示，化妝品中使用甲醛的比例高達25%。其主要通過在化妝品體系中緩慢釋放少量的游離甲醛起到殺滅微生物的作用。因此，中國對化妝品等其他產品中甲醛的最大使用含量有嚴格的標準。甲醛和多聚甲醛在化妝品中的最大允許使用含量為0.2%（以游離甲醛計），并規定禁用于噴霧化妝品[5-8]。

目前國家對釋放甲醛類防腐劑沒有禁用，只是對防腐劑有個限量的規定。衛生部在2015年發布的《化妝品安全技術規范》（以下簡稱“規范”），化妝品中禁止使用二噁烷，而甲醛則屬于被限制使用的成分[5]。化妝品中被允許的最大使用量有0.2%，除此之外，像一些指甲硬化劑中甲醛的最大允許使用濃度為5%。而嬰幼兒專用的產品中則并沒有作特殊的規定[9-11]。所以嬰幼兒化妝品中甲醛的檢測方法研究勢在必行。

1.材料和方法

(1)試劑與儀器

Waters 2695高效液相色譜儀、Waters柱后衍生儀；C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm，資生堂ADME）；Milli-Q IQ 7000超純水機（美國Millipore公司）；渦旋振蕩器（艾卡公司）；電子天平（瑞士梅特勒公司）。

甲醛標準水溶液（SIGMA-ALORICH、CAS：50-00-0、d=1.09g/mL）。

乙酸銨（色譜純）、冰乙酸（分析純）、乙酰丙酮（分析純）、二氯甲烷（分析純）、磷酸（分析純）、微孔濾膜（0.45μm，水相型）；實驗用水為一級水。

(2)方法

①標準曲線溶液的配制

精密量取甲醛標準物質水溶液適量，用0.2%磷酸水溶液（質量分數，下同）稀釋成1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL的標準系列溶液。臨用現制。

②供試品溶液制備

稱取樣品0.2g（精確到0.001g）于10mL具塞比色管中，加0.2%磷酸水溶液至10mL刻度，渦旋處理1min，5000rpm離心5min，取上清液過0.45μm微孔濾膜（水相）過濾。濾液作為待測溶液，并盡快測定。

③色譜條件

色譜柱：C18柱（250mm×4.6mm×5μm）；柱溫：25℃；流速：1.0mL/min；進樣量10μL。流動相為0.2%磷酸溶液；檢測波長：420nm。柱后衍生溶液（稱取62.5g乙酸銨，置于流動相存儲瓶中，加入5mL乙酰丙酮、7.5mL乙酸，用水定容至1000mL，超聲溶解混勻即可），柱后衍生溶液流速：0.5mL/min；衍生溫度：100℃。

④樣品測定

調節儀器，平衡大約30min至最佳工作狀態，設定方法時間10min，依次由低到高進樣已配制好的標準曲線溶液，以其峰面積對進樣濃度進行線性回歸，得到標準曲線方程，然后進6針空白溶液清洗管路，消除管道殘留，再依次進樣。

2.實驗結果

(1)特異性的檢查

分別選取已配制好的標準品甲醛水溶液高、中、低濃度進樣，記錄對照品峰的出峰時間在3.771～3.784min。表明該方法出峰時間較穩定，特異性良好，見圖1。

圖1 甲醛不同濃度色譜圖

(2)標準曲線的建立

建立儀器方法，平衡儀器至基線平穩，精密吸取已配制好的甲醛標準系列溶液各10μL，濃度由低到高分別進樣檢測，以甲醛系列濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標,繪制甲醛標準曲線，線性方程為Y=89669X-32011，相關系數為0.9997，見圖2。

圖2 甲醛溶液標準曲線

(3)方法檢出限

取標準曲線系列溶液最低濃度點0.4mL（濃度為1.0 μg/mL）至含有0.2g樣品的比色管中，按供試品溶液制備方法制備，然后稀釋25倍進樣，查看信噪比，計算檢出濃度。測得信噪比為3.2，利用檢出限計算方法得出方法檢出限結果為0.0003%，低于標準檢出限，所以符合規范要求。

(4)加標回收率

為驗證該方法的準確性和可靠性，進行了樣品加標測定。加標分為高、低兩種濃度添加，在稱取的樣品中添加高低兩種濃度的甲醛標準溶液，按照供試品溶液制備方法進行處理，依次注入色譜儀，每個樣品平行測定3次并記錄被測物質的峰面積，計算其回收率。得到回收率在96.1%～99.6%之間，回收率符合規范中通用要求的80.0%～120.0%。該實驗表明本實驗方法準確可靠。實驗結果見表1。

表1 方法加標回收率

(5)方法重現性

為驗證此方法的準確性，對甲醛標準曲線第二濃度點（濃度為2.0μg/mL）連續測定7次，計算相對標準偏差（RSD）為0.5%，符合規范要求。表明本實驗方法準確性較好。結果見表2。

表2 方法重現性

(6)精密度

精密度分為日內精密度和日間精密度，分別取標準曲線第二濃度點和第五濃度點在0h、24h、48h連續進樣6次，記錄被測物質峰面積，計算其RSD值。得到日內精密度和日間精密度均小于0.5%，而平均精密度小于5%。表明該方法準確、可靠，符合規范要求，見表3。

表3 精密度

(7)穩定性

取標準曲線第二濃度點分別在0h、3h、6h、8h、12h、18h、24h、48h分別進樣，考察甲醛組分峰面積穩定性，計算得到甲醛峰面積RSD為1.1%。表明該方法在檢測嬰幼兒類化妝品的甲醛的含量時，在48h內檢測都是穩定的，符合規范要求，見表4。

表4 穩定性

3.討論

本研究建立了柱后衍生—高效液相色譜法測定嬰幼兒化妝品中游離甲醛的測定方法，依次開展了該方法特異性實驗、線性實驗、檢出限實驗、樣品加標回收率實驗、重現性實驗、日間精密度實驗、日內精密度實驗、穩定性實驗，從而確定該方法對檢驗嬰幼兒化妝品中游離甲醛含量的適用性。

實驗結果得出該方法特異性良好、線性良好，相關系數大于0.995，檢出限低至0.0003%，回收率大于96.1%，重現性連續7次進樣RSD為0.5%，日內精密度和日間精密度RSD均小于0.5%，供試品溶液在48h內測定其RSD為1.1%，相對穩定，符合規范方法建立的各項技術參數。所以該方法對嬰幼兒類化妝品中游離甲醛的測定適用性極高。本研究可以對嬰幼兒類化妝品中甲醛的含量進行控制，對市場上嬰幼兒類化妝品質量保障具有十分重要的意義，可為嬰幼兒類化妝品的用妝安全提供技術支撐。