基于慢性輕度不可預(yù)知性溫和型應(yīng)激的C57BL/6N小鼠抑郁模型的建立與評(píng)價(jià)

約日古麗·麥海提 任小巧 范佳佳 李 鑫 劉媛媛 毛 萌

(北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京，100029)

抑郁癥是由各種因素引起的一種心境障礙或情感障礙性疾病[1]，其主要臨床表現(xiàn)為情緒低落、對(duì)外界興趣減退、感到內(nèi)疚、毫無(wú)價(jià)值感及反復(fù)出現(xiàn)自殺念頭、食欲和體質(zhì)量顯著變化(增加或減少)、睡眠紊亂(嗜睡或失眠)等，除此之外它還可能會(huì)影響心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)等，從而對(duì)人類生命健康產(chǎn)生威脅[2-3]。該病致殘率及發(fā)病率高，女性更易遭遇抑郁癥[4-5]。目前全球抑郁癥患者大約3.4億人，其中15%～20%的患者最終自殺身亡[6]。2030年抑郁癥可能會(huì)成為全球最大的健康殺手[4,7]，盡管如此，至今關(guān)于抑郁癥病因病機(jī)的探索尚處于初級(jí)階段[8]，更為棘手的是本病具有異質(zhì)性，臨床癥狀不一致，表現(xiàn)形式多樣、相關(guān)癥狀繁多，因而目前研究尚無(wú)法解釋抑郁癥的所有方面[9-10]。

抑郁動(dòng)物模型是研究抑郁癥必不可少的工具，廣泛應(yīng)用于抑郁癥病因病機(jī)研究及抗抑郁藥的篩選。眾所周知，社會(huì)環(huán)境因素是抑郁癥發(fā)病的重要危險(xiǎn)因素，以環(huán)境壓力為背景的抑郁動(dòng)物模型的研究較為關(guān)鍵。慢性輕度不可預(yù)知性溫和型應(yīng)激(Chronic Unpredictable Mild Stress，CUMS)模型是一種強(qiáng)有效的抑郁動(dòng)物模型，通過(guò)各種環(huán)境物理刺激方法，在動(dòng)物不可預(yù)知的情況下長(zhǎng)期施加于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，能有效模仿人類日常生活中遇到的各種心理壓力。本研究選取無(wú)特定病原體(Specific pathogen Free，SPF)級(jí)C57BL/6N小鼠，通過(guò)CUMS法，連續(xù)8周進(jìn)行持續(xù)性刺激，建立CUMS應(yīng)激抑郁模型，探索CUMS法建立抑郁癥C57BL/6N小鼠模型的條件，在此基礎(chǔ)上觀察不同時(shí)間點(diǎn)該模型行為學(xué)變化，以明確造模時(shí)間對(duì)動(dòng)物模型的影響，對(duì)該模型進(jìn)行評(píng)價(jià)和優(yōu)化。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 7周齡SPF級(jí)C57BL/6N雄性小鼠，體質(zhì)量18.0～21.0 g，實(shí)驗(yàn)單位使用許可證編號(hào)：SYXK(京)2016-0038(由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于清潔級(jí)動(dòng)物房，室溫維持在(25±1)℃，濕度維持在(65±5)%，采用12 h循環(huán)交替光照法(光照時(shí)間為7:30到19:30)晝夜節(jié)律。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。

1.1.2 儀器 1)小鼠曠場(chǎng)行為測(cè)試箱：長(zhǎng)×寬×高為50 cm×50 cm×40 cm的木制箱。底面用黑線劃分成面積相等的25個(gè)正方形方格，每行和每列各5個(gè)方格，中心9格為中央?yún)^(qū)。曠場(chǎng)箱中央正上方安置攝像頭，觀察記錄小鼠活動(dòng)情況。2)小鼠游泳池：高度為30 cm，直徑為20 cm的圓柱形游泳池。3)小鼠懸尾箱：地面高度20 cm的紙箱，一面敞開，其余各面封閉。4)小動(dòng)物生理系統(tǒng)檢測(cè)儀(Harvard Apparatus，美國(guó)，型號(hào)：HPMS)。5)行為學(xué)記錄分析軟件：EthoVision XT.15影像跟蹤系統(tǒng)(諾達(dá)思信息技術(shù)公司，荷蘭，型號(hào)：EthoVision XT.15)。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 將動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，先對(duì)所有小鼠進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)，按曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)評(píng)分淘汰個(gè)別自發(fā)運(yùn)動(dòng)差的小鼠，再將納入的56只小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為對(duì)照組(n=14)和CUMS抑郁模型組(n=42)。對(duì)照組每5只一籠，正常飼養(yǎng)；CUMS組單籠飼養(yǎng)，給予CUMS應(yīng)激，其干預(yù)內(nèi)容如下：傾斜(45°)12 h、濕墊料(籠里加250 mL左右的水)過(guò)夜、束縛6 h、禁飲24 h、禁食24 h、冷水浴(4 ℃)3 min、熱水浴(45 ℃)3 min、晝夜交替8 h、頻閃8 h、空瓶刺激24 h、夾尾(尾尖1 cm處)2 min、陌生異常物品刺激(如塑料杯、牙刷等)過(guò)夜、合籠(2只小鼠一籠)過(guò)夜、冷環(huán)境2 h、長(zhǎng)夜12 h、長(zhǎng)晝24 h、大鼠墊料24 h等誘導(dǎo)抑郁癥的形成，每天給予23種應(yīng)激，同一種應(yīng)激1周內(nèi)不得出現(xiàn)2次以上，共執(zhí)行8周。

1.2.2 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.2.2.1 一般情況的觀察 每天觀察所有小鼠的一般情況，包括毛發(fā)色澤、活躍程度、精神狀態(tài)、身體姿態(tài)、抓取時(shí)掙扎反映程度、對(duì)應(yīng)激的反應(yīng)情況及大小便等。

1.2.2.2 小鼠體質(zhì)量和肛溫的檢測(cè) 造模前、造模第1、2、3、4、5、6、7、8周末分別對(duì)2組小鼠進(jìn)行稱重，并記錄不同時(shí)點(diǎn)的小鼠體質(zhì)量變化。造模第3、5、8周末分別對(duì)2組小鼠進(jìn)行肛溫檢測(cè)，檢測(cè)肛溫時(shí)將小動(dòng)物生理檢測(cè)器的探頭插入小鼠肛門內(nèi)，深度以探頭完全進(jìn)入肛門為標(biāo)準(zhǔn)，維持時(shí)間至少10 s。

1.2.2.3 糖水偏好實(shí)驗(yàn) 糖水偏好實(shí)驗(yàn)(Sucrose Preference Test，SPT)用于測(cè)量小鼠快感缺乏，小鼠糖水偏好率下降顯示小鼠快感缺乏[11]。造模前3 d，訓(xùn)練動(dòng)物適應(yīng)糖水測(cè)試，將所有小鼠單籠飼養(yǎng)，每籠同時(shí)放置2個(gè)水瓶。第1天，兩瓶均裝1%蔗糖水；第2天放置蔗糖水和蒸餾水各1瓶，每4小時(shí)轉(zhuǎn)換水瓶的位置，以防小鼠對(duì)水瓶的位置產(chǎn)生偏好；第3天禁食禁水；第4天上午9點(diǎn)，每只小鼠同時(shí)給予事先定量好的蔗糖水和蒸餾水各1瓶，2 h后取走所有水瓶并稱重。造模開始后按上述實(shí)驗(yàn)方法分別在造模第3、5、8周末做一次SPT，并計(jì)算糖水偏好率(1%糖水消耗量/總水消耗量×100%)。

1.2.2.4 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn) 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)(Open Field Test，OFT)可檢測(cè)小鼠自發(fā)運(yùn)動(dòng)能力以及探索行為，效果顯著、操作方便，對(duì)小鼠的傷害小[12]。本實(shí)驗(yàn)造模前，造模第3、5、8周末各做1次OFT，實(shí)驗(yàn)開始前將小鼠置于實(shí)驗(yàn)室60 min讓其適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境，觀察時(shí)將單只小鼠置于50 cm×50 cm×40 cm光潔敞箱中央(箱內(nèi)表面顏色為藍(lán)色、地板為白色)，由攝像機(jī)記錄小鼠5 min內(nèi)的動(dòng)作行為表現(xiàn)，并由1名實(shí)驗(yàn)人員在固定位置記錄小鼠直立次數(shù)(小鼠前兩肢完全離開底板或爬墻)、修飾行為(理毛)情況，在每次測(cè)試完成之后，用75%的乙醇進(jìn)行清理。整體實(shí)驗(yàn)結(jié)束后通過(guò)EthovisionXT.15軟件分析曠場(chǎng)視頻。

1.2.2.5 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn) 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)(Forced Swimming Test，F(xiàn)ST)是由Porsolt于1978年開發(fā)的一種嚙齒動(dòng)物行為實(shí)驗(yàn)，常用于評(píng)估模型動(dòng)物抑郁樣行為，具有良好的可信度和預(yù)測(cè)效度[13-14]。本實(shí)驗(yàn)造模前，造模第3、5、8周末各做1次強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)。將小鼠放入高30 cm，直徑20 cm的圓柱形游泳池，水位15 cm，水溫23～25 ℃，將小鼠放置在水中6 min，前2 min讓其適應(yīng)環(huán)境后，記錄后4 min中內(nèi)不動(dòng)的時(shí)間，當(dāng)小鼠以直立的姿勢(shì)漂浮，只做一些小動(dòng)作把頭露出水面時(shí)才被判斷為不動(dòng)[15]。每次測(cè)完后換水，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境安靜。

1.2.2.6 懸尾實(shí)驗(yàn) 懸尾實(shí)驗(yàn)(Tail Suspension Test，TST)從1985年首次引入抑郁癥研究領(lǐng)域以來(lái)已有20余年，一直被用于抗抑郁藥的篩選以及動(dòng)物模型行為評(píng)價(jià)[16]。實(shí)驗(yàn)全過(guò)程通常持續(xù)6 min，TST不動(dòng)時(shí)間一般被評(píng)價(jià)為小鼠絕望狀態(tài)[17]。本實(shí)驗(yàn)造模前，造模第3、5、8周末各做1次懸尾實(shí)驗(yàn)。自制離地面高度20 cm的紙箱，紙箱一面敞開，便于觀察小鼠，其余各面封閉，避免外界環(huán)境的干擾，從其中一個(gè)側(cè)面穿一小圓孔，將小鼠尾巴從圓孔穿過(guò)去，一位實(shí)驗(yàn)員抓小鼠尾根1/3處保持不動(dòng)，另一位實(shí)驗(yàn)員記錄小鼠不動(dòng)的時(shí)間。前2 min讓小鼠適應(yīng)環(huán)境，后4 min記錄不動(dòng)時(shí)間，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境安靜。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)小鼠一般情況的影響 造模開始之前對(duì)照組和CUMS組小鼠均毛發(fā)整潔光亮，活潑好動(dòng)，精神狀態(tài)良好。應(yīng)激3周后抓取CUMS組小鼠時(shí)，小鼠反應(yīng)不太劇烈，易抓取，喜歡疊摞墊料在角落里睡覺(jué)，而對(duì)照組小鼠抓取時(shí)不易抓取，多動(dòng)，抓取后用四肢反抗，喜歡趴在籠蓋上。應(yīng)激5周后，CUMS組小鼠毛發(fā)凌亂、枯黃失澤，抓取時(shí)容易脫毛，對(duì)冰水浴、熱水浴刺激的耐受能力下降(耐受時(shí)間<3 min)，合籠時(shí)相互毆斗不太劇烈，抓尾巴時(shí)反應(yīng)遲鈍，抓頸部皮膚時(shí)不反抗，平時(shí)嗜睡、蜷臥在籠角落里。對(duì)照組小鼠依然活潑好動(dòng)，毛發(fā)光澤，未出現(xiàn)脫毛等現(xiàn)象。第7周后CUMS組小鼠后頸、背、頭等身體各部分毛發(fā)出現(xiàn)片狀脫落，精神萎靡、體型瘦削。見(jiàn)圖1。

圖1 毛發(fā)變化

2.2 體質(zhì)量變化 造模開始之前2組小鼠體質(zhì)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。造模開始之后，前3周對(duì)照組和CUMS組小鼠體質(zhì)量均有不同程度的增長(zhǎng)，2組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。至造模第4周后，CUMS組小鼠體質(zhì)量呈下降趨勢(shì)，2組體質(zhì)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)圖2。

圖2 體質(zhì)量變化

2.3 肛溫的變化 與對(duì)照組比較，CUMS組在造模第3、5、8周肛溫差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，可認(rèn)為造模過(guò)程中或造模建立后CUMS組小鼠體溫未出現(xiàn)顯著變化，體溫正常。見(jiàn)圖3。

圖3 2組小鼠肛溫比較

2.4 對(duì)行為學(xué)變化的影響

2.4.1 糖水偏好實(shí)驗(yàn) 分別在造模第3、5、8周末對(duì)所有小鼠進(jìn)行糖水偏好實(shí)驗(yàn)，計(jì)算2組小鼠糖水偏好百分比，并且這3個(gè)時(shí)間點(diǎn)CUMS組糖水偏好率顯著低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，可認(rèn)為此時(shí)間點(diǎn)CUMS組小鼠糖水?dāng)z入量均低于對(duì)照組。見(jiàn)圖4。

圖4 糖水偏好實(shí)驗(yàn)

2.4.2 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn) 本研究重點(diǎn)觀察了2組小鼠在造模第3、5、8周后的OFT抑郁樣行為。其中造模第3、5周后，2組小鼠的OFT行為表現(xiàn)結(jié)果比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)；第8周后結(jié)果顯示，CUMS組小鼠水平運(yùn)動(dòng)總距離及運(yùn)動(dòng)速度均顯著小于對(duì)照組(均P<0.05)。見(jiàn)圖5～6。并且其中央?yún)^(qū)運(yùn)動(dòng)累積時(shí)間顯著少于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)圖7～8。垂直運(yùn)動(dòng)和修飾行為比較，CUMS組小鼠出現(xiàn)了垂直運(yùn)動(dòng)次數(shù)的減少而修飾行為的增多，2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1～2。

圖5 運(yùn)動(dòng)速度

圖6 運(yùn)動(dòng)距離

圖7 中央格停留時(shí)間

圖8 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)軌跡

表1 2組小鼠直立次數(shù)比較次)

表2 2組小鼠修飾行為次數(shù)的比較次)

2.4.3 懸尾實(shí)驗(yàn) 與對(duì)照組比較，造模第3、5、8周后，CUMS組小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間長(zhǎng)，2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)圖9。

圖9 懸尾實(shí)驗(yàn)

2.4.4 強(qiáng)迫游泳 與對(duì)照組比較，造模第3周CUMS組強(qiáng)迫游泳不動(dòng)的時(shí)間長(zhǎng)，2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，可認(rèn)為CUMS組小鼠表現(xiàn)為強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間出現(xiàn)了延長(zhǎng)。造模第5、8周2組小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動(dòng)的時(shí)間長(zhǎng)雖均有延長(zhǎng)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)圖10。

圖10 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)

2.4.5 不同時(shí)點(diǎn)CUMS組小鼠抑郁行為比較 對(duì)CUMS組小鼠造模3、5、8周時(shí)行為學(xué)變化進(jìn)行多重比較：CUMS組小鼠在應(yīng)激過(guò)程中體質(zhì)量逐漸減輕(P<0.05)；SPT結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)，這3個(gè)時(shí)間點(diǎn)糖水?dāng)z入量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；OFT結(jié)果顯示，CUMS組小鼠直立次數(shù)和中央各停留時(shí)間逐漸減少(均P<0.05)，修飾行為增多(均P<0.05)，水平運(yùn)動(dòng)總距離和運(yùn)動(dòng)速度造模8周時(shí)出現(xiàn)顯著縮短及減慢(P<0.05)；FST不動(dòng)時(shí)間逐漸延長(zhǎng)(P<0.05)；TST不動(dòng)時(shí)間至造模第5周有顯著延長(zhǎng)，造模第8周時(shí)開始縮短(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 CUMS組小鼠各時(shí)間段行為學(xué)結(jié)果比較

3 討論

C57BL/6(B6)小鼠是生物醫(yī)學(xué)和行為實(shí)驗(yàn)研究中使用最廣泛的品系，B6小鼠較活躍，學(xué)習(xí)能力強(qiáng)，且近交系動(dòng)物品系提高了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的可靠性和重復(fù)性[18-19]，故本研究中選擇了B6的近交系C57BL/6N小鼠。

當(dāng)前，抑郁癥的造模方法有20余種，目前常用有習(xí)得性無(wú)助(Learned Helplessness，LH)、慢性不可預(yù)知性溫和型應(yīng)激(CUMS)、社會(huì)失敗應(yīng)激(Social Defeat Stress，SDS)、生命早期應(yīng)激(Early Life Stress，ELS)、行為絕望(強(qiáng)迫游泳和小鼠懸尾)、給藥(如：糖皮質(zhì)激素)、基因操作等[20-21]。其中CUMS是目前最常用、最可靠，能有效模仿抑郁癥病因病機(jī)的嚙齒類動(dòng)物抑郁模型[22]，該模型是20世紀(jì)80年代后期發(fā)展起來(lái)的，至今已有30多年的經(jīng)歷。CUMS模型誘導(dǎo)條件相對(duì)真實(shí)，通過(guò)給予各種不同壓力源，以防止或延遲習(xí)慣性，較常用的壓力源有：晝夜顛倒、社會(huì)壓力、禁飲、禁食、束縛、濕墊料、強(qiáng)迫游泳和傾斜等[23-24]。不同實(shí)驗(yàn)室對(duì)CUMS內(nèi)容及操作也不盡一致，本研究通過(guò)傾斜、濕墊料、束縛、禁飲、禁食、冷水浴、熱水浴、晝夜交替、頻閃、空瓶刺激、夾尾、陌生異物、合籠、冷環(huán)境、長(zhǎng)夜、長(zhǎng)晝、大鼠墊料等刺激對(duì)C57BL/6N小鼠進(jìn)行了連續(xù)8周的持續(xù)性刺激。

一般情況觀察發(fā)現(xiàn)小鼠暴露于CUMS應(yīng)急后逐漸出現(xiàn)活動(dòng)減少、精神不振、毛發(fā)變軟、易脫落；造模7周時(shí)上述情況更加惡化，甚至出現(xiàn)毛發(fā)片狀脫落。造模過(guò)程中CUMS組小鼠體質(zhì)量逐漸減輕，具有顯著時(shí)間-應(yīng)激交互作用；SPT顯示，造模3周時(shí)CUMS組小鼠糖水?dāng)z入量顯著下降，即出現(xiàn)了快感缺失，并且整個(gè)應(yīng)激過(guò)程中幾乎保持同一水平，可見(jiàn)C57BL/6N小鼠糖水?dāng)z入率的變化無(wú)顯著時(shí)間效應(yīng)。上述變化十分類似于大部分抑郁癥患者中出現(xiàn)的體質(zhì)量逐漸減輕、脫發(fā)、愉悅感喪失等臨床癥狀[25-26]。

CUMS應(yīng)激會(huì)逐漸削弱抑郁模型動(dòng)物主動(dòng)應(yīng)對(duì)壓力的動(dòng)機(jī)，因此CUMS組小鼠在TST和FST不可避免的惡劣環(huán)境(水/懸尾)中會(huì)出現(xiàn)短時(shí)間內(nèi)適應(yīng)環(huán)境后放棄掙扎而保持不動(dòng)的行為表現(xiàn)，即“絕望”情感狀態(tài)，雖然這2種實(shí)驗(yàn)理論基礎(chǔ)相同，但是他們之間有區(qū)別，各品種動(dòng)物對(duì)該實(shí)驗(yàn)的敏感度不同[27]，有研究者發(fā)現(xiàn)C57BL/6品系在TST過(guò)程中有爬尾傾向[28-29]，本研究中C57BL/6N小鼠TST過(guò)程中亦出現(xiàn)了類似行為，并且FST中不動(dòng)時(shí)間比TST長(zhǎng)。經(jīng)各時(shí)間點(diǎn)分析發(fā)現(xiàn)，造模3周時(shí)CUMS組小鼠FST和TST不動(dòng)時(shí)間均顯著延長(zhǎng)；造模5周時(shí)TST和FST不動(dòng)時(shí)間比3周時(shí)的更長(zhǎng)，到8周時(shí)雖然2組組間比較CUMS組小鼠TST不動(dòng)時(shí)間有顯著延長(zhǎng)，但是CUMS組組內(nèi)比較發(fā)現(xiàn)其不動(dòng)時(shí)間呈縮短趨勢(shì)，說(shuō)明隨著時(shí)間的延長(zhǎng)C57BL/6N小鼠對(duì)TST敏感性降低，產(chǎn)生了適應(yīng)性。在造模第5、8周時(shí)FST中，2組小鼠均出現(xiàn)了不動(dòng)時(shí)間的延長(zhǎng)，使得2組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這可能與季節(jié)更換有關(guān)，因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)十月中旬開始進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)后期時(shí)剛好是入冬。有研究表明，強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)會(huì)受到季節(jié)因素的影響，在冬天時(shí)老鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間會(huì)增多，而在春天會(huì)減少[30]，并且臨床上亦有發(fā)現(xiàn)，太陽(yáng)照射時(shí)間的縮短，比如秋季，會(huì)增加抑郁癥發(fā)病率[31]，這說(shuō)明季節(jié)因素在抑郁癥發(fā)病過(guò)程中可能有一定的影響。從這2種實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)C57BL/6N小鼠較敏感于FST，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)該品種小鼠可能會(huì)對(duì)TST產(chǎn)生耐受。

OFT一般檢測(cè)抑郁模型動(dòng)物在新的、陌生環(huán)境條件下的自主運(yùn)動(dòng)活動(dòng)及探索行為(直立、爬墻、穿梭中央?yún)^(qū))的變化狀況[32]。本研究重點(diǎn)分析了C57BL/6N小鼠OFT水平運(yùn)動(dòng)總路程、運(yùn)動(dòng)速度、箱中央各停留累積時(shí)間、直立運(yùn)動(dòng)次數(shù)、修飾行為頻數(shù)等5個(gè)指標(biāo)，并發(fā)現(xiàn)C57BL/6N小鼠遭受為期5周的CUMS后出現(xiàn)直立次數(shù)和中央各停留時(shí)間的顯著減少，而且其中直立行為隨著應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)會(huì)逐漸減少；造模時(shí)間延期到第8周時(shí)則表現(xiàn)為水平運(yùn)動(dòng)總路程減小、運(yùn)動(dòng)速度減慢、修飾頻繁等。該時(shí)間較其他研究晚[33-34]，這可能和應(yīng)激程序或小鼠品系或品種不同有關(guān)。從上述異常的行為表現(xiàn)中得出：C57BL/6N小鼠受到應(yīng)激后先喪失了對(duì)外界的興趣，即探索能力，并且隨著應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸加重，而它的自發(fā)運(yùn)動(dòng)能力當(dāng)環(huán)境壓力已超過(guò)其承受能力時(shí)才出現(xiàn)減弱；而修飾行為是嚙齒類動(dòng)物天生的行為，具有清潔及維護(hù)毛發(fā)、皮膚的作用，動(dòng)物理毛時(shí)間及理毛次數(shù)與環(huán)境因素和壓力有關(guān)，壓力源會(huì)增加實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的理毛次數(shù)[35-36]，正如本研究顯示，較長(zhǎng)時(shí)間(8周)的CUMS誘C57BL/6N小鼠修飾行為次數(shù)頻繁。

經(jīng)各時(shí)間段行為學(xué)評(píng)價(jià)，從上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析可得出CUMS組小鼠行為變化具有逐漸性：應(yīng)激早期(3、5周時(shí))出現(xiàn)快感缺失、絕望感，探索能力逐漸減弱，并且這些前期行為變化較符合于抑郁癥患者所出現(xiàn)的對(duì)外界事物興趣喪失、愉快感喪失、疲乏或精力減退、絕望感等輕度臨床抑郁表現(xiàn)[37]；到第8周時(shí)CUMS組小鼠抑郁表現(xiàn)更為顯著，CUMS組小鼠行為學(xué)障礙加重，其行為變化和嚴(yán)重抑郁癥患者臨床上所出現(xiàn)的運(yùn)動(dòng)執(zhí)行能力及社會(huì)交際或交往能力下降、探索思考能力減退等行為表象十分相似[38]。

4 小結(jié)和展望

綜上所述，本研究通過(guò)CUMS應(yīng)激誘導(dǎo)C57BL/6N小鼠建立了抑郁樣動(dòng)物模型，并由此發(fā)現(xiàn)該模型中隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng)，C57BL/6N小鼠抑郁表現(xiàn)更為顯著，抑郁程度逐漸加重：首先出現(xiàn)快感缺失、絕望感、對(duì)外界興趣減退，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)會(huì)出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)能力減弱等行為表現(xiàn)。本研究為今后針對(duì)抑郁癥各階段的藥物研究和對(duì)抑郁癥各階段的臨床表現(xiàn)及其進(jìn)程的研究提供了參考，但是還需要進(jìn)一步結(jié)合多項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證。

本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)C57BL/6N小鼠對(duì)籠內(nèi)環(huán)境很敏感，平常喜歡干燥、干凈的環(huán)境，如若放在刨花類墊料籠里喜歡在籠角落建筑圓形巢穴，并且喜歡在自建巢穴里睡覺(jué)，白天喜歡爬在籠蓋欄桿上，但是每次濕籠過(guò)夜或束縛后表現(xiàn)為精神萎靡，爬桿或籠里運(yùn)動(dòng)減少等，所以適當(dāng)增加濕籠子和束縛次數(shù)，可能會(huì)有助于縮短造模時(shí)間；此外將來(lái)研究抑郁模型動(dòng)物筑巢方面的行為研究中C57BL/6N小鼠的實(shí)驗(yàn)效果可能會(huì)較好。

抑郁動(dòng)物模型的制備，尤其是CUMS模型易受環(huán)境因素的影響，不同的實(shí)驗(yàn)環(huán)境以及CUMS刺激方式會(huì)導(dǎo)致不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并且不同品系或品種動(dòng)物對(duì)應(yīng)激的敏感程度不同，甚至行為學(xué)實(shí)驗(yàn)(OFT、TST、FST)等表現(xiàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[39]，例如：C57BL/6、BALBC、昆明、ICR等不同品系小鼠曠場(chǎng)行為表現(xiàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[40]，除此之外C57BL/6品系中最常用的C57BL/6j和C57BL/6N之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[41]，因此在不同實(shí)驗(yàn)室很難得到一致的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。抑郁模型研究不僅注重實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生理解剖結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，還需要注重其本性情感特點(diǎn)，所以抑郁模型的制備需要將來(lái)從動(dòng)物品系或品種以及性別的選擇、造模環(huán)境等方面進(jìn)行進(jìn)一步細(xì)化研究，并且按照動(dòng)物的行為特點(diǎn)科學(xué)地選用合適的動(dòng)物品系或品種，再選擇該實(shí)驗(yàn)動(dòng)物較敏感的刺激方式，從而提高模型效果以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致性。