氣相色譜法同時測定速效心痛滴丸中兩種成分含量的應用價值

毛耀南 錢桂英

速效心痛滴丸是純中藥制劑,由牡丹皮、川芎、冰片三味天然藥材中提取有效成分用現代中藥制造技術精制而成,具有清熱涼血,活血止痛等功效,用于偏熱型輕、中度胸痹心痛,痛兼煩熱,舌苔色黃等,本品對穩定性心絞痛屬心脈瘀熱證的患者具有較快的療效,可用于養心、護心和速效救心,體現了中藥的特色和優勢,在臨床廣泛應用。治療冠心病心絞痛的中藥新藥仍然是研究的熱點之一［1-4］,為大力發展中醫中藥,有效地控制中藥制劑的產品質量,本實驗參照相關文獻［5-9］,采用氣相色譜法同時測定速效心痛滴丸中丹皮酚和冰片的含量,對測定過程進行了優化改進,方法簡便可行,并應用于該產品的質量控制,現報告如下。

1 儀器與試藥

GC-14B 氣相色譜儀(日本島津公司)；冰片對照品,丹皮酚對照品,丁香酚對照品,均購自中國藥品生物制品檢定所；醋酸乙酯為分析純；速效心痛滴丸［上海海虹實業(集團)巢湖今辰藥業有限公司］。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:以聚乙二醇20M 為固定相,涂布濃度10%,擔體Chromaxorb W(Av-Dmcs)；柱溫170～200℃,程序升溫,升溫速度10℃/min,進樣口溫度240 ℃。載氣(N2)流量50 ml/min,空氣壓力0.5 kg/cm2,氫氣壓力0.8 kg/cm2,進樣量2 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 內標溶液的制備 取丁香酚適量,加醋酸乙酯制成每1 ml 含20 mg 的溶液,搖勻,作為內標溶液。

2.2.2 對照品溶液的制備 分別精密稱取冰片對照品246.4 mg、丹皮酚對照品26.49 mg,置25 ml 量瓶中,加醋酸乙酯溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為對照品貯備液。

2.2.3 樣品溶液的制備 取樣品約1 g,精密稱定,置25 ml 量瓶中,加入醋酸乙酯適量,超聲提取20 min,冷卻至室溫,精密加入內標溶液1 ml,加醋酸乙酯至刻度,搖勻,離心10 min,取上清液即得。

2.2.4 陰性溶液的制備 按生產工藝,分別制備不含牡丹皮及冰片的滴丸作為空白,與“2.2.3”項陰性對照溶液行同法處理,即得。

2.3 系統適用性試驗 取對照品貯備液,吸取2.0 ml置10 ml 量瓶中,精密加入內標溶液1 ml,加醋酸乙酯至刻度,搖勻,精密吸取2 μl,注入氣相色譜儀；再分別精密吸取樣品溶液和陰性對照溶液各2 μl 注入氣相色譜儀,按“2.1”項下色譜條件,依法測定,記錄色譜圖。從色譜圖可知,在此色譜條件下,丹皮酚、冰片和內標物質可達到很好分離,在與丹皮酚峰、冰片峰及內標物質峰保留時間相同的時間段內無其他色譜峰,說明陰性對照溶液不干擾丹皮酚及冰片的含量測定,見圖1。

圖1 氣相色譜圖

2.4 線性關系考察 取對照品貯備液,分別吸取0.2、1.0、2.0、3.0、4.0 ml 置10 ml 量瓶中,各精密加入內標溶液1 ml,加醋酸乙酯至刻度,搖勻,依次進樣2 μl,在上述色譜條件下測定峰面積,以丹皮酚和冰片的峰面積與內標峰面積的比值為縱坐標(Y),丹皮酚、冰片進樣濃度(X)為橫坐標,經數據回歸處理得其線性回歸方程。丹皮酚：Y=0.1038X+0.0672,r=1；冰片：Y=150.14X+1.6323,r=0.9999。結果表明：丹皮酚在21.19～423.84 μg/ml、冰片在0.1971～3.9424 mg/ml 的濃度范圍內有良好的線性關系。

2.5 精密度試驗 取“2.4”項下的同一份對照品溶液,重復進樣6次,每次測得丹皮酚和冰片與相應內標峰面積的比值,其平均峰面積比值分別為21.9570(RSD=0.22%)和296.4277(RSD=0.13%)。試驗表明,該法精密度良好。

2.6 重現性試驗 取同一批號的樣品6 份,按“2.2.2”、“2.3”項下方法制備樣品溶液,分別進樣測定。結果：丹皮酚含量RSD 為1.92%；冰片含量RSD 為1.86%,表明方法重現性良好。

2.7 穩定性試驗 取“2.6”項下的樣品溶液,于室溫條件下放置,分別在第0、2、4、6、8、10、12、24 h進樣測定,記錄峰面積。結果：丹皮酚和冰片與相應內標峰面積比值的RSD 分別為0.39%和0.36%,表明樣品溶液在24 h 內穩定。

2.8 加樣回收試驗 取已知含量的樣品(丹皮酚含量0.34%、冰片含量6.99%)6 份,每份1 g,精密稱定,分別精密加入丹皮酚3.5 mg、冰片70 mg,置分液漏斗中,加水20 ml,時時振搖使溶解,用醋酸乙酯提取4 次(16、10、10、10 ml),合并提取液,置50 ml 量瓶中,精密加入內標溶液1 ml,加醋酸乙酯至刻度,搖勻,精密吸取2 μl,注入氣相色譜儀依法測定,結果見表1。

表1 加樣回收率試驗(n=6)

2.9 樣品測定 抽取兩個生產廠家的速效心痛滴丸各3 批樣品共6 批,按“2.2.3”項下方法制備樣品溶液,按“2.1”項下色譜條件測依法定,記錄峰面積,將丹皮酚和冰片與相應內標峰面積的比值代入回歸方程計算樣品中丹皮酚和冰片含量,測定結果表明這6 個批號的速效心痛滴丸含量均符合規定,結果見表2。

表2 樣品含量測定(n=3,mg/丸)

3 討論

采用氣相色譜法對速效心痛滴丸中丹皮酚和冰片進行含量測定的方法,之前已有報道,作者在相關資料原有實驗方法的基礎上做了一些探索。對于色譜條件的選擇方面,通過不同柱溫和不同流速下試驗,結果該法所得出的保留時間、分離度、對稱性都達到分析要求。

速效心痛滴丸采用的是固體分散,藥物溶出快速,在供試品的制備方法上,本文參考中國藥典中收載的龍腦含量測定方法［10］,分別用乙酸乙酯、無水乙醇等作為樣品提取溶劑,超聲處理作為提取條件,并且試驗對比了不同的提取時間,分別進樣測定,結果用乙酸乙酯提取制成的供試品溶液峰形好,重現性好,各成分之間分離良好,超聲20 min 提取率為最高。以上實驗表明,用氣相色譜法對速效心痛滴丸進行含量測定,方法簡便、靈敏、可靠,可應用于該制劑的質量控制,針對不同廠家的速效心痛滴丸在生產工藝,或包裝、運輸、儲存等可能存在的問題,在生產和貯存過程中是否造成有效成分的損失,作者應用此方法,隨機抽取臨床正在使用樣品進行檢測,以進一步保證用藥安全有效,并為臨床合理用藥提供了理論依據。